實(shí)驗(yàn)性單側(cè)前牙反牙合修復(fù)體對(duì)大鼠髁突軟骨基質(zhì)及相關(guān)因子表達(dá)的影響研究

發(fā)布時(shí)間：2020-04-12 12:36

【摘要】：顳下頜關(guān)節(jié)紊亂�。═MD）是一類常見的口腔疾病。骨關(guān)節(jié)炎是其病理性改變之一，其特征為軟骨基質(zhì)降解，軟骨下骨改建，骨贅形成以及關(guān)節(jié)慢性炎癥。咬合異常是TMD的重要病因之一。本課題組前期研究表明，大鼠后牙漸進(jìn)性咬合紊亂可以導(dǎo)致關(guān)節(jié)盤增厚，髁突軟骨異常改建，甚至出現(xiàn)退行性變。本研究在此基礎(chǔ)上，以Sprague-Dawley（SD）大鼠為研究對(duì)象，首次施加了前牙不良修復(fù)體的操作，建立了實(shí)驗(yàn)性前牙反牙合動(dòng)物模型，通過化學(xué)染色觀察大鼠髁突軟骨組織形態(tài)學(xué)變化，測量軟骨厚度的改變和蛋白多糖（PG）的變化；通過real-time PCR研究PCNA，COL II，aggrecan，MMP-3，MMP-9，MMP-13以及TIMP-1mRNA水平的表達(dá)變化；通過免疫組織化學(xué)染色方法觀察COL II，MMP-3，MMP-9以及TIMP-1表達(dá)部位，通過計(jì)算陽性細(xì)胞百分比來研究軟骨中上述因子的表達(dá)變化，探討前牙反牙合不良修復(fù)體致咬合紊亂對(duì)大鼠髁突軟骨細(xì)胞異常增殖，軟骨基質(zhì)降解的影響。選取54只6周齡雌性SD大鼠（由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），體重140-160g，隨機(jī)、等量分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，各3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每組9只。適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行粘接單側(cè)前牙反牙合不良修復(fù)體的操作，造成實(shí)驗(yàn)性前牙咬合紊亂動(dòng)物模型，對(duì)照組不做任何處理，同樣條件下飼養(yǎng)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別于實(shí)驗(yàn)開始后第2、4和8周處死動(dòng)物，取左側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)（TMJ）常規(guī)脫鈣、石蠟包埋，進(jìn)行HE、甲苯胺藍(lán)以及免疫組化染色；取右側(cè)髁突凍存于-80o冰箱以備real-time PCR使用。結(jié)果如下： 1. HE染色：對(duì)照組髁突軟骨表面光滑連續(xù)，細(xì)胞排列整齊，依次分為纖維層、增殖層、肥大層和鈣化軟骨層。實(shí)驗(yàn)組髁突軟骨出現(xiàn)退變，表現(xiàn)為軟骨分層不清，細(xì)胞數(shù)目減少，細(xì)胞排列紊亂，8周時(shí)最為嚴(yán)重，9個(gè)關(guān)節(jié)中有3個(gè)出現(xiàn)明顯的無細(xì)胞區(qū)。病變區(qū)軟骨細(xì)胞發(fā)生凝固性壞死，胞核固縮，核染色質(zhì)濃縮，局部出現(xiàn)嗜均質(zhì)染色。 2.軟骨厚度變化：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)4周時(shí)髁突軟骨纖維層中1/3厚度增厚（P 0.05）；增殖層中1/3和后1/3厚度均比對(duì)照組增厚（P 0.05和P 0.01）；實(shí)驗(yàn)8周時(shí)肥大層中1/3和后1/3厚度均顯著變�。≒ 0.01）。實(shí)驗(yàn)4周時(shí)全層后1/3厚度比對(duì)照組增厚，其他組別間軟骨厚度無顯著性差異（P0.05）。 3.髁突軟骨細(xì)胞增殖活性及基質(zhì)表達(dá)變化：real-time PCR結(jié)果顯示，2周和4周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組PCNA mRNA表達(dá)低于對(duì)照組（P 0.05），8周時(shí)無顯著性差異；4周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組COL II mRNA表達(dá)低于對(duì)照組（P 0.05），2周和8周無顯著性差異；2周時(shí)實(shí)驗(yàn)組aggrecan mRNA表達(dá)高于對(duì)照組（P 0.05），而4周和8周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組表達(dá)均低于對(duì)照組（P 0.05）。免疫組化結(jié)果顯示PCNA主要表達(dá)于髁突軟骨的增殖層，，2周和4周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組PCNA陽性細(xì)胞率低于對(duì)照組（P 0.05），8周時(shí)無顯著性差異；COL II主要表達(dá)于髁突軟骨增殖層和肥大層，4周和8周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組COL II染色陽性區(qū)域少于對(duì)照組，2周時(shí)無顯著性差異。 4.甲苯胺藍(lán)染色顯示：對(duì)照組軟骨中蛋白多糖表達(dá)均勻一致，主要分布于增殖層和肥大層細(xì)胞外基質(zhì)，4周和8周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組蛋白多糖表達(dá)明顯低于對(duì)照組。 5.髁突軟骨中MMP-3，MMP-9，MMP-13和TIMP-1表達(dá)變化：real-time PCR結(jié)果顯示，4周和8周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組MMP-3mRNA表達(dá)均高于對(duì)照組（P 0.05），而2周時(shí)無顯著性差異；2周時(shí)實(shí)驗(yàn)組MMP-9mRNA表達(dá)高于對(duì)照組，4周時(shí)實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組（P 0.05），8周時(shí)無顯著性差異；2周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組MMP-13和TIMP-1mRNA表達(dá)高于對(duì)照組（P 0.05），而4周和8周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組中二者表達(dá)低于對(duì)照組（P 0.05，P 0.01）。免疫組化染色顯示：MMP-3主要表達(dá)于髁突軟骨肥大層，8周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組MMP-3陽性細(xì)胞率高于對(duì)照組（P 0.05），2周和4周時(shí)無顯著性差異；MMP-9主要表達(dá)于髁突軟骨肥大層，2周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組MMP-9陽性細(xì)胞率高于對(duì)照組（P 0.05），而4周時(shí)實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組（P 0.05），8周時(shí)無顯著性差異；TIMP-1主要表達(dá)于髁突軟骨增殖層和肥大層，2周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組TIMP-1陽性細(xì)胞率明顯高于對(duì)照組（P 0.01），4周和8周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組均低于對(duì)照組（P 0.01，P 0.05）。結(jié)論： 1.實(shí)驗(yàn)性單側(cè)前牙反牙合不良修復(fù)體可以導(dǎo)致大鼠髁突軟骨組織發(fā)生病理性改變，這種組織學(xué)變化程度隨不良修復(fù)體作用時(shí)間的延長而更加顯著，并導(dǎo)致髁突軟骨后部肥大層厚度變薄。 2.實(shí)驗(yàn)性單側(cè)前牙反牙合不良修復(fù)體可在不同的時(shí)間點(diǎn)提高M(jìn)MP-3，MMP-9，MMP-13和TIMP-1的表達(dá)水平，降低髁突軟骨基質(zhì)COL II和aggrecan的表達(dá)。
【圖文】：

不良修復(fù)體,實(shí)驗(yàn)性,單側(cè)