【摘要】： 目的:通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究,探討胰島素控制下糖尿病大鼠功能性下頜前伸對(duì)顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨改建的影響,為尋求臨床上能否為糖尿病患者進(jìn)行正畸功能矯治提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)與理論基礎(chǔ)。 方法:1選擇體重50～60g的雄性3周齡SD大鼠120只,隨機(jī)分為三組,每組40只,即正常對(duì)照組(A組),糖尿病組(B組),胰島素治療組(C組);每組再隨機(jī)分為五小組,每小組8只,即0天、7天、14天、21天、30天組。B組、C組大鼠按85mg/Kg體重腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制備1型糖尿病模型, A組給予同等劑量的檸檬酸緩沖液腹腔注射。于注射72小時(shí)后尾靜脈取血,留取尿液標(biāo)本,分別測(cè)定血糖、尿糖,以血糖16.8mmol/L,尿糖(+++～++++),確定為糖尿病大鼠。從造模成功后第四天開(kāi)始,C組給予胰島素頸背部皮下注射0～4U/天以控制血糖,根據(jù)血糖尿糖情況調(diào)整用量,使隨機(jī)血糖范圍為8-10mmol/L。A組、B組給予同等劑量的生理鹽水注射。糖尿病模型成模10天后各組大鼠上裝置,以3%戊巴比妥鈉腹腔注射全麻下,上中切牙粘固矯治器。矯治器由上切牙冠套和斜面導(dǎo)板組成,斜面導(dǎo)板向舌側(cè)傾斜,與頜平面成25°角,就位粘固后,下切牙恰位于斜面導(dǎo)板唇面,且咬合時(shí)滑行至對(duì)刃或反頜關(guān)系,引導(dǎo)下頜前伸磨牙無(wú)咬合。所有大鼠均自由飲水和攝食,飼料為河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心配制的全價(jià)顆粒飼料,戴用矯治器后進(jìn)食清水泡軟的飼料。矯治器24小時(shí)戴用,戴用期間嚴(yán)密監(jiān)控大鼠的矯治器,如有損壞和脫落,及時(shí)戴用新矯治器。 2血糖測(cè)定:B、C組實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每天測(cè)定一次血糖,連續(xù)三次血糖不達(dá)標(biāo)的大鼠被剔除。處死前再次取血測(cè)定血糖,B組血糖16.8mmol/L,C組血糖10mmol/L的大鼠作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果測(cè)定對(duì)象。 3髁突組織切片制備:分別于粘固矯治器后0天、7天、14天、21天、30天將各小組血糖達(dá)標(biāo)的大鼠全麻下心臟放血處死。分別取雙側(cè)髁突,經(jīng)4%多聚甲醛4°C固定72小時(shí)后,用7%EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)脫鈣三周后,常規(guī)脫水,包埋,經(jīng)髁突正中矢狀面作矢狀連續(xù)切片,厚約6μm。經(jīng)常規(guī)HE染色和膠原及酸性粘多糖組織化學(xué)染色,觀察大鼠功能矯治后髁突軟骨改建情況。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法探測(cè)TGF-β1和VEGF在髁突軟骨中的含量及分布變化情況。 結(jié)果:1 HE染色切片觀察:A、B和C組髁突軟骨后份軟骨厚度均增加。A組軟骨厚度與C組無(wú)明顯差別,A、C組軟骨厚度大于B組。其中增殖層面積增加最明顯,肥大層和鈣化軟骨層也有不同程度的增加,纖維層無(wú)明顯改變。厚度在增殖層最早發(fā)生變化。各層軟骨厚度的變化以實(shí)驗(yàn)二周和三周最為明顯。 A、B和C組髁突軟骨前份軟骨厚度均減小。A組軟骨厚度與C組無(wú)明顯差別,B組軟骨厚度明顯小于A、C組。增殖層最早發(fā)生變化,但厚度變化集中在肥大層和鈣化軟骨層,面積明顯減少,增殖層減少幅度弱于肥大層和鈣化軟骨層,纖維層無(wú)明顯改變。各組軟骨厚度以實(shí)驗(yàn)第三周和第四周變化最為明顯。 2膠原染色結(jié)果觀察:A組、B組和C組髁突軟骨各層均有膠原藍(lán)綠色染色,并且在纖維層、肥大層的染色最深。0天、1周、2周時(shí)膠原染色有逐漸減弱趨勢(shì),各組間無(wú)顯著差異。A組、C組3周時(shí)增殖層,肥大層和鈣化軟骨層膠原染色變淺為淡綠色,A、C組間染色強(qiáng)度無(wú)明顯差異;B組3周時(shí)各軟骨層膠原染色強(qiáng)度較A、C組減弱更明顯。4周時(shí)A組肥大層和鈣化軟骨層膠原染色有加深趨勢(shì)。C組肥大層膠原染色有加深趨勢(shì),其余各層無(wú)明顯變化。B組各層染色無(wú)加深趨勢(shì),較3周時(shí)無(wú)明顯變化。 3酸性粘多糖染色結(jié)果觀察:A組、B組和C組酸性粘多糖染色主要見(jiàn)于基質(zhì)中,呈藍(lán)色,較多集中在肥大層。由增殖層到鈣化軟骨層基質(zhì)陽(yáng)性反應(yīng)逐漸增強(qiáng),骨小梁亦呈陽(yáng)性反應(yīng)。0天、1周、2周時(shí)染色呈減弱趨勢(shì),各組間無(wú)顯著差異。3周時(shí)A組,C組增殖層、肥大層和鈣化軟骨層染色變淡,分布不均,藍(lán)染區(qū)域減少。A、C組間無(wú)顯著差異。B組各層軟骨染色強(qiáng)度弱于A、C組。4周時(shí)A組增殖層、肥大層染色有輕度加深。C組肥大層染色有增加趨勢(shì)。A、C組無(wú)顯著差異。B組未呈現(xiàn)加深趨勢(shì),與3周時(shí)相似。 4 TGF-β1染色結(jié)果觀察:A組、B組和C組大鼠各層髁突軟骨細(xì)胞都有TGF-β1的免疫染色。各組均為肥大層陽(yáng)性最強(qiáng)。其次是增殖層和鈣化軟骨層。A組各層染色從1周起逐漸增強(qiáng),3周時(shí)染色最強(qiáng),4周出現(xiàn)回落趨勢(shì)。B組各層染色從1周起呈增強(qiáng)趨勢(shì),增加較平穩(wěn),未見(jiàn)回落,但染色強(qiáng)度低于A組,差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0. 01)。C組各層染色從2周起明顯增強(qiáng),4周時(shí)有輕度減弱。A,C組各層染色強(qiáng)度無(wú)明顯差異。 5 VEGF染色結(jié)果觀察:A組、B組和C組大鼠髁突軟骨細(xì)胞纖維層沒(méi)有VEGF表達(dá)。增殖層表達(dá)較弱,從增殖層到肥大層的上1/ 3表達(dá)逐漸增強(qiáng),肥大層的中1/ 3有高表達(dá),下1/ 3表達(dá)開(kāi)始減弱,鈣化軟骨層的表達(dá)較弱或沒(méi)有表達(dá)。A組各層VEGF染色從2周起逐漸增強(qiáng),3周時(shí)最高,4周出現(xiàn)下降趨勢(shì)。B組各層染色從2周起呈增強(qiáng)趨勢(shì),未見(jiàn)回落,染色強(qiáng)度低于A組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0. 05)。C組各層染色從3周起明顯增強(qiáng),染色強(qiáng)度低于A組,但高于B組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0. 05)。 結(jié)論:1本實(shí)驗(yàn)條件下,糖尿病大鼠髁突軟骨前份出現(xiàn)了明顯組織細(xì)胞萎縮消失,前后份軟骨修復(fù)改建速度較慢,提示進(jìn)行功能性下頜前伸的正畸治療應(yīng)慎重。 2胰島素控制下,糖尿病大鼠的髁突軟骨改建狀況明顯改善,功能性下頜前伸后可以達(dá)到有效治療效果。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R587.2;R783.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2620808