發(fā)布時(shí)間：2020-04-08 17:20

【摘要】： 目的： 提取伴放線放線桿菌外膜蛋白,將不同濃度的外膜蛋白溶液作用于小鼠巨噬細(xì)胞,比較不同血清型伴放線放線桿菌外膜蛋白電泳結(jié)果的差別,觀察不同濃度的外膜蛋白對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞分泌IL-1β的影響。 方法： 1取3種不同血清型的伴放線放線桿菌粗糙型菌株D7S、SA716和SA1151,培養(yǎng)三天后觀察菌落生長(zhǎng)狀況。 2分別培養(yǎng)收集菌細(xì)胞,并配置菌細(xì)胞懸液,利用SDS-PAGE電泳和考馬斯藍(lán)染色方法記錄電泳條帶的分布。 3采用超聲破碎及超離心技術(shù)提取三種血清型伴放線放線桿菌的外膜蛋白,利用SDS-PAGE電泳和考馬斯藍(lán)染色技術(shù)分析鑒定三種外膜蛋白的分子量。 4使用三種不同濃度的外膜蛋白溶液刺激對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的小鼠巨噬細(xì)胞R264.7,設(shè)立空白對(duì)照組和3個(gè)不同濃度外膜蛋白實(shí)驗(yàn)組,分別在第12小時(shí)和第24小時(shí)時(shí)采用ELISA檢測(cè)每孔中IL-1β含量,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。spss11.5統(tǒng)計(jì)軟件分析不同濃度和不同作用時(shí)間IL-1β的差異。 結(jié)果： 1粗糙型伴放線放線桿菌在固體培養(yǎng)基下呈單獨(dú)、成對(duì)或是呈小團(tuán)生長(zhǎng),呈半透明圓形菌落,菌落邊緣不規(guī)則,緊密貼附在瓊脂表面。 2全細(xì)胞電泳圖發(fā)現(xiàn)三種菌株的蛋白帶在10～200Ku之間分布均勻一致,未見(jiàn)明顯差異。 3外膜蛋白電泳圖發(fā)現(xiàn)三種菌株有共同的6種蛋白帶,分子量分別是100、75、64、45、34、31Ku；SA1151和SA716存在共同的29Ku蛋白帶；D7S和SA716存在共同的27Ku蛋白帶；SA1151存在清晰的110Ku蛋白帶。 4三種不同濃度外膜蛋白溶液產(chǎn)生的IL-1β含量在作用時(shí)間為12小時(shí)時(shí)IL-1β含量有差異(P0.05),分別為120±4.36pg/ml,110±13.11pg/ml,150±17.69pg/ml；作用時(shí)間為24小時(shí)時(shí)IL-1β含量有差異(P0.01),分別為80±12.12pg/ml,280±19.31pg/ml,320±20.07pg/ml；不同作用時(shí)間下同種濃度外膜蛋白溶液產(chǎn)生IL-1β含量的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 1伴放線放線桿菌粗糙型菌株在含血液的固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好,37℃培養(yǎng)2～3天后,即可形成直徑約1mm的菌落。 2實(shí)驗(yàn)中3個(gè)血清型伴放線放線桿菌粗糙型菌株之間的全細(xì)胞電泳結(jié)果未觀察到明顯差異。 3從不同血清型伴放線放線桿菌粗糙型菌株之間的外膜蛋白電泳結(jié)果存在一定的差異。 4在一定濃度范圍內(nèi),不同濃度的伴放線放線桿菌外膜蛋白刺激小鼠巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的IL-1β含量不同,濃度越高產(chǎn)生的IL-1β含量越高。
【圖文】：

M:分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白;1:D7S外膜蛋白樣品;2:SA716外膜蛋白樣品;3:SAI巧1外膜蛋白;圖6:外膜蛋白電泳考馬斯蘭染色圖表2:作用時(shí)間12小時(shí)時(shí)IL一1含量濃度l林留ml(bl)10林留ml(b3)15林留ml(b31117Pg/m96Pg/m134Pg/m2125Pg/m122P留m169Pg/ml118Pg/ln112Pg/m147Pg/ml
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R780.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2619619