發(fā)布時(shí)間：2020-04-05 16:23

【摘要】：齲病、外傷等原因引起的牙體缺損在臨床上很常見(jiàn)。復(fù)合樹(shù)脂粘結(jié)修復(fù)牙體缺損,無(wú)汞污染、磨除牙體組織少、美觀、具有良好的生物相容性,在臨床上已有廣泛應(yīng)用。牙本質(zhì)的結(jié)構(gòu)特殊,含有大量的有機(jī)物,且由于復(fù)合樹(shù)脂本身具有聚合收縮的特點(diǎn),因此不易在牙本質(zhì)上形成穩(wěn)定的粘結(jié),尤其是維持粘結(jié)的持久性能。復(fù)合樹(shù)脂與牙本質(zhì)粘結(jié)形成的基本機(jī)制是混合層的形成,膠原纖維是混合層中主要的有機(jī)成分,其完整性對(duì)維持穩(wěn)定的粘結(jié)起重要作用。近年來(lái)研究表明牙本質(zhì)中含有內(nèi)源性的溶膠原/液化明膠的活性,如果這種酶活性引起牙本質(zhì)膠原纖維的降解,會(huì)破壞混合層的完整性,不利于牙本質(zhì)粘結(jié)的持久性能,從而影響粘結(jié)修復(fù)的長(zhǎng)期臨床效果。酸蝕后牙本質(zhì)表面成分與粘結(jié)單體、復(fù)合樹(shù)脂成分所形成的粘結(jié)界面是牙本質(zhì)粘結(jié)最薄弱的部位,牙本質(zhì)表面粘結(jié)界面的適當(dāng)處理是牙本質(zhì)粘結(jié)修復(fù)成功的關(guān)鍵。本研究首先采用原子力顯微鏡(AFM)的研究方法,觀測(cè)牙本質(zhì)經(jīng)酸蝕后形成的有機(jī)質(zhì)層(膠原纖維)的形貌特征；在此基礎(chǔ)上,運(yùn)用AFM原位觀測(cè)外源性膠原酶與牙本質(zhì)膠原纖維的酶解試驗(yàn),以模擬牙本質(zhì)內(nèi)源性溶膠原活性,探索該反應(yīng)的特點(diǎn)；以及研究不同的外源性膠原酶抑制劑對(duì)上述酶解反應(yīng)的抑制。其次,以人離體牙為研究對(duì)象,運(yùn)用微拉伸粘結(jié)強(qiáng)度(μTBS)試驗(yàn)、掃描電鏡(SEM)的方法,研究牙本質(zhì)粘結(jié)中應(yīng)用外源性膠原酶抑制劑對(duì)牙本質(zhì)粘結(jié)強(qiáng)度以及粘結(jié)持久性的影響,推斷在實(shí)際粘結(jié)中抑制牙本質(zhì)內(nèi)源性的酶活性對(duì)粘結(jié)的影響,以此探討影響牙本質(zhì)粘結(jié)持久性的因素與機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮头椒ǎ?1、運(yùn)用AFM對(duì)牙本質(zhì)膠原纖維進(jìn)行成像研究。制備適合AFM觀察的牙本質(zhì)樣品,通過(guò)適當(dāng)?shù)奶幚?暴露牙本質(zhì)表層的膠原纖維網(wǎng),運(yùn)用AFM進(jìn)行掃描,形成清晰的膠原纖維形貌圖像。觀測(cè)牙本質(zhì)有機(jī)質(zhì)(膠原纖維)表面形貌特征,為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供研究平臺(tái)。 2、運(yùn)用AFM觀測(cè)牙本質(zhì)膠原纖維在膠原酶作用下的降解過(guò)程。牙本質(zhì)樣品經(jīng)酸蝕后置于AFM液體池中,注入配制的膠原酶Ⅰ、膠原酶Ⅱ混合溶液,運(yùn)用AFM在液體環(huán)境下原位連續(xù)掃描觀測(cè)膠原酶與牙本質(zhì)有機(jī)質(zhì)(主要是膠原纖維)的酶解反應(yīng)過(guò)程,記錄下實(shí)驗(yàn)過(guò)程的AFM掃描形貌變化特征,探索牙本質(zhì)膠原纖維在膠原酶作用下的微觀變化特點(diǎn)。 3、AFM觀測(cè)不同膠原酶抑制劑對(duì)膠原酶與膠原纖維反應(yīng)的抑制。以氯己定、卡托普利作為膠原酶抑制劑,運(yùn)用AFM觀測(cè)其對(duì)膠原酶Ⅱ與膠原纖維反應(yīng)過(guò)程的抑制作用。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果推斷膠原酶抑制劑抑制膠原酶酶解反應(yīng)的效果。 4、以人離體第三磨牙為研究對(duì)象,研究牙本質(zhì)粘結(jié)中應(yīng)用膠原酶抑制劑對(duì)粘結(jié)持久性的影響。離體牙去除冠方牙釉質(zhì),制備標(biāo)準(zhǔn)的牙本質(zhì)粘結(jié)面,酸蝕后,在粘結(jié)前應(yīng)用膠原酶抑制劑(葡萄糖酸氯己定),完成粘結(jié),復(fù)合樹(shù)脂分層充填,制備微拉伸試件,并進(jìn)行老化試驗(yàn)。運(yùn)用μTBS試驗(yàn)測(cè)定即刻μTBS以及經(jīng)6個(gè)月老化后的μTBS,并運(yùn)用SEM觀察粘結(jié)界面成分的變化,進(jìn)行對(duì)比研究,評(píng)價(jià)粘結(jié)中應(yīng)用膠原酶抑制劑的效果,及推斷相應(yīng)的機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、建立了運(yùn)用AFM對(duì)牙本質(zhì)膠原纖維進(jìn)行掃描成像的方法,獲得了清晰的膠原纖維AFM掃描圖像。牙本質(zhì)膠原纖維呈網(wǎng)狀,特征性的周期性橫紋結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn),運(yùn)用AFM軟件分析,膠原纖維周期性結(jié)構(gòu)寬度約為67nm。 2、運(yùn)用AFM原位觀察到了牙本質(zhì)有機(jī)質(zhì)(膠原纖維)在膠原酶Ⅰ、Ⅱ作用下的酶解過(guò)程。在膠原酶的作用下,牙本質(zhì)膠原纖維網(wǎng)隨時(shí)間的推移變化越來(lái)越明顯,處理后期纖維網(wǎng)變稀疏,最終暴露出與礦化牙本質(zhì)基底部相結(jié)合狀態(tài)的膠原纖維。通過(guò)該方法,可以觀察牙本質(zhì)基底部的微細(xì)結(jié)構(gòu)。 3、膠原酶Ⅱ能有效降解牙本質(zhì)有機(jī)質(zhì)(膠原纖維)。含有膠原酶Ⅱ的處理液處理的牙本質(zhì)表面形貌變化明顯,處理前大量的膠原纖維明顯成網(wǎng),處理6小時(shí)后膠原纖維的量明顯減少,暴露出大量的牙本質(zhì)礦物基底影像。 4、氯己定、卡托普利能抑制膠原酶Ⅱ的活性。含氯己定的膠原酶Ⅱ處理液、含卡托普利的膠原酶Ⅱ處理液分別與牙本質(zhì)有機(jī)質(zhì)(膠原纖維)作用,牙本質(zhì)有機(jī)質(zhì)(膠原纖維)的形貌在實(shí)驗(yàn)前后沒(méi)有發(fā)生明顯的變化。 5、牙本質(zhì)粘結(jié)中應(yīng)用膠原酶抑制劑(葡萄糖酸氯己定)能提高牙本質(zhì)粘結(jié)的持久性。未應(yīng)用膠原酶抑制劑的對(duì)照組制備的微拉伸試件,經(jīng)過(guò)6個(gè)月的水貯存老化后,粘結(jié)強(qiáng)度下降的程度更大,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。微拉伸試件斷裂面SEM的結(jié)果顯示,經(jīng)6個(gè)月水貯存老化后,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的斷裂類型有差別。未應(yīng)用膠原酶抑制劑的對(duì)照組斷裂部位多位于混合層的底部,膠原纖維的量明顯減少。 結(jié)論： 1、AFM是實(shí)時(shí)研究牙本質(zhì)膠原纖維的有效方法。能實(shí)時(shí)觀測(cè)牙本質(zhì)膠原纖維在膠原酶作用下的降解過(guò)程。 2、膠原酶Ⅱ能有效降解牙本質(zhì)有機(jī)質(zhì)(膠原纖維),而外源性的膠原酶抑制劑(氯己定、卡托普利)能抑制膠原酶Ⅱ的活性。 3、應(yīng)用膠原酶抑制劑(葡萄糖酸氯己定)能提高牙本質(zhì)粘結(jié)的持久性。
【圖文】：

圖3一1一3(5娜‘5腳)膠原酶n處理6小時(shí)，管間牙本質(zhì)中膠原纖維明顯減少，，可見(jiàn)大量礦物暴露影像(箭頭所指)。2.2圖3一2一1、2、3分別為含氯己定的膠原酶11液處理前、處理3小時(shí)及處理6小時(shí)后的AFM圖像，A為高度圖，B為相位圖。在處理前，管間牙本質(zhì)中膠原纖維、非膠原纖維的AFM影像特征與膠原酶n處理前(圖3一1一l)相似。含氯己定的膠原酶H液處理3小時(shí)后，管間牙本質(zhì)中膠原纖維多見(jiàn)，與處理前比較形貌變化不大(圖3一2一2)。含氯己定的膠原酶11液處理6小時(shí)后，管間牙本質(zhì)中膠原纖維多見(jiàn)，且膠原纖維較之處理前更清晰，可見(jiàn)少量暴露的礦物底部(箭頭所指)(圖3一2一3)0圖3一2一1(5林m義5林m)含氯己定膠原酶H液處理前，形貌特

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