發(fā)布時間：2020-04-02 04:05

【摘要】：目的通過生物信息學技術(shù)分析低強度超聲治療大鼠顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的相關(guān)機制,探尋治療顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的靶點基因。方法1、通過單側(cè)咬合創(chuàng)傷的方法建立大鼠顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎模型,分為對照組和實驗組,每組再分為4個亞組,即4周、8周、12周和16周;稱量、記錄大鼠體質(zhì)量變化,并運用組織病理學方法對模型進行驗證。2、低強度超聲對顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎模型大鼠進行治療,分為五組:對照組、恢復組、安慰劑組、治療組和創(chuàng)傷組,并運用組織病理學方法對軟骨病變進行評價。提取大鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨,運用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)檢測安慰劑組與治療組顯著差異表達的基因,對測序結(jié)果進行生物信息學分析,挑選部分基因結(jié)合實時熒光定量PCR及蛋白質(zhì)印記法驗證測序結(jié)果。結(jié)果1、通過單側(cè)咬合創(chuàng)傷方法成功建立了大鼠顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎模型,在實驗早期(第1、2周),咬合創(chuàng)傷對大鼠體質(zhì)量有較大影響,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。8周時,實驗組大鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨出現(xiàn)明顯的骨關(guān)節(jié)炎病變,對照組和實驗組的組織學評分分別為:4.33±0.52和8.67±1.67,P=0.000。2、低強度超聲對單側(cè)咬合創(chuàng)傷造成的骨關(guān)節(jié)炎有一定的治療作用,組織病理學研究發(fā)現(xiàn),治療組的組織破壞及蛋白多糖丟失程度均輕于安慰劑組。通過測序技術(shù)及生物信息學分析,發(fā)現(xiàn)了58個顯著差異基因,其中上調(diào)基因20個(治療組/安慰劑組),下調(diào)基因38個(治療組/安慰劑組)。通過生物信息學分析,挑選以下基因進行驗證。在m RNA水平驗證了ADAMTS-8、Per-2、Fndc-5、C1qa、C3、C5a R1、ItgαL、Itgb2、Serpine1、TNNC1受低強度超聲顯著調(diào)控;其中(與安慰劑組相比),低強度超聲上調(diào)Per-2、C1qa、C3、C5a R1、ItgαL、Itgb2、Serpine1的表達,下調(diào)ADAMTS-8、Fndc-5、TNNC1的表達(P0.05)。通過Western Blot進一步在蛋白水平驗證了低強度超聲顯著上調(diào)炎性大鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨中Per-2基因的表達,下調(diào)ADAMTS-8基因的表達。結(jié)論單側(cè)咬合創(chuàng)傷可以造成穩(wěn)定的大鼠顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎,低強度超聲對單側(cè)咬合創(chuàng)傷造成的骨關(guān)節(jié)炎有一定的治療作用。低強度超聲對TMJ-OA的治療作用可能與Per-2的上調(diào)和ADAMTS-8的下調(diào)有關(guān)。
【圖文】：

本實驗所有動物實驗操作均經(jīng)濟南軍區(qū)總醫(yī)院倫理委員會批準，，所有動物造模前均適應性飼養(yǎng)一周。用乙醚將大鼠深度麻醉，麻醉時間大約 3 分鐘，待麻醉顯效后，將大鼠仰位固定于自制固定裝置上，橡皮筋固定大鼠上頜門齒，下頜門齒用紗布條輕度拉開（最大張口度不超過 1.5cm）。小棉球清潔大鼠右側(cè)上頜第一磨牙后，酸蝕劑常規(guī)酸蝕，濕潤棉球徹底擦除酸蝕劑，手持吹耳球干燥酸蝕后的磨牙表面，并用干燥小棉球隔濕。涂布粘結(jié)劑，光固化樹脂將一小段正畸弓絲（長度約為大鼠上頜第一磨牙近遠中徑）固定于磨牙表面，咬合墊高大約 0.5mm。術(shù)后將大鼠單獨放置于紙箱中，嚴密觀察狀態(tài)，待正常活動后，放回籠中，自由飲食水。對照組大鼠未行咬合墊高及粘結(jié)正畸弓絲操作，其他操作同實驗組。咬合墊高操作結(jié)束后，在一周內(nèi)，每天檢查大鼠口內(nèi)咬合高點在位情況，一周后，每 3 天檢查一次。正畸弓絲脫落即再次粘結(jié)，每次檢查記錄在位情況。

分別在 0 周、1 周、2 周、3 周、4 周、8 周、12 周及實驗組大鼠體質(zhì)量。在同一時間點，采用獨立樣本 T 大鼠體質(zhì)量差異是否有統(tǒng)計學意義，在 1、2、8 周時間大于實驗組，且差異有統(tǒng)計學意義（P1=0.000;P2=0.003;P16 周時間點上，對照組大鼠體質(zhì)量仍呈現(xiàn)大于實驗組學意義（P3=0.145;P4=0.08;P12=0.26;P16=0.593）。對實數(shù)據(jù)進行析因方差分析，發(fā)現(xiàn)：在不同時間點的體質(zhì)量.50，P=0.000）；在實驗組和對照組之間的體質(zhì)量差異P=0.000）；在不同時間點及實驗分組之間不存在交互作用變化
【學位授予單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R782.6

【參考文獻】

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本文編號：2611425