【摘要】： 本課題組前期研究結(jié)果表明,實(shí)驗(yàn)性咬合紊亂可以導(dǎo)致髁突軟骨出現(xiàn)明顯的病理性改建。軟骨內(nèi)成骨是軟骨重要的生理性改建活動(dòng)之一,期間軟骨細(xì)胞要經(jīng)歷增殖、成熟、肥大以及最終凋亡等階段。PTHrP及其受體PTH1R以及Sox9正是參與軟骨生長(zhǎng)發(fā)育的重要的生長(zhǎng)調(diào)控因子。PTHrP通過(guò)調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞分化和成熟的正確比率來(lái)調(diào)控軟骨內(nèi)成骨的正常進(jìn)程,如果軟骨細(xì)胞只增殖不成熟、不肥大,骨的生長(zhǎng)將止于軟骨形成階段,而如果軟骨細(xì)胞加速成熟和肥大,會(huì)造成軟骨發(fā)育不良,這兩種骨發(fā)育畸形的情況都與PTHrP及其受體PTH1R的精密調(diào)控有著密切的聯(lián)系。Sox9在軟骨發(fā)育初期起到至關(guān)重要的作用,如果間充質(zhì)細(xì)胞凝集前失活Sox9,軟骨的發(fā)育就會(huì)出現(xiàn)障礙。本研究是對(duì)本課題組所建實(shí)驗(yàn)性咬合紊亂大鼠的下頜髁突軟骨中Sox9、PTHrP及其受體PTH1R等物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè),探討這些大分子物質(zhì)在大鼠髁突病理性改建活動(dòng)中的表達(dá)變化及其重要意義。 40只8周齡雌性SD大鼠,隨機(jī)、等量分為實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組,適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后,實(shí)驗(yàn)組采用正畸方法以左側(cè)上頜、右側(cè)下頜第一、二磨牙為支抗,推第三磨牙向遠(yuǎn)中移動(dòng),造成實(shí)驗(yàn)性咬合紊亂。空白對(duì)照不做任何處理,同環(huán)境下飼養(yǎng)直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。分別在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第4、8周后取材,利用HE染色觀察大鼠髁突軟骨的形態(tài)學(xué)變化,利用免疫組化方法、RT-PCR分別檢測(cè)Sox9、PTHrP、PTH1R等物質(zhì)蛋白和mRNA水平的變化情況。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1.對(duì)照組髁突軟骨表面光滑連續(xù),可分為纖維層、增殖層、肥大層和鈣化軟骨層,各層細(xì)胞排列整齊,界限清晰。實(shí)驗(yàn)組大鼠髁突軟骨出現(xiàn)明顯的凝固性壞死、軟骨細(xì)胞數(shù)目明顯減少、胞核固縮、局部嗜均質(zhì)染色等退行性變(3/20個(gè)髁突出現(xiàn)典型變化),且實(shí)驗(yàn)組大鼠髁突軟骨后部厚度較對(duì)照組明顯增厚(P0.05)。 3.免疫組化染色結(jié)果:PTHrP主要表達(dá)于髁突軟骨肥大層,胞漿呈棕色深染,其受體PTH1R主要表達(dá)于髁突軟骨肥大層,細(xì)胞膜呈棕色深染。與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組軟骨退變區(qū)域的PTHrP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)以及PTH1R陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均顯著減少;Sox9主要分布于髁突軟骨肥大層,細(xì)胞核呈棕色深染,實(shí)驗(yàn)組軟骨退變區(qū)域的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組也顯著減少。 4.RT-PCR結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組8周組髁突軟骨中的PTHrP、PTH1R、Sox9的mRNA水平均較對(duì)照組明顯下降。由此得出以下結(jié)論: 1.推一側(cè)上頜、對(duì)側(cè)下頜第三磨牙向遠(yuǎn)中所致的漸進(jìn)性咬合紊亂可導(dǎo)致雌性大鼠髁突軟骨發(fā)生病理性改建。 2.作為軟骨生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)程中的重要調(diào)節(jié)因子,PTHrP及其受體PTH1R以及Sox9均參與了漸進(jìn)性咬合紊亂所致的大鼠髁突軟骨的改建活動(dòng)。
【圖文】：

圖 1-1 用正畸橡皮圈（ ）推第三磨牙向遠(yuǎn)中移動(dòng)的示意圖M1：第一磨牙 M2：第二磨牙 M3：第三磨牙1.3 標(biāo)本處理分別于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始 4、8 周后，深度麻醉（1%戊巴比妥 1ml/只）下，打開(kāi)胸腔，經(jīng)主動(dòng)脈插管分別灌注生理鹽水（200ml/只）和多聚甲醛（40g/L,400ml/只），整體取出雙側(cè) TMJ，于 40g/L 的多聚甲醛中后固定 12 小時(shí)，krinstense 液中脫鈣一周，常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片（厚約 6um）。蘇木素-伊紅（HE）染色，光鏡觀察。1.4 軟骨厚度測(cè)量在 Leica DM2500 顯微鏡下，應(yīng)用 Leica qwin 軟件采集圖像并測(cè)量。首先將髁突軟骨與骨的交界線長(zhǎng)度等分為前、中、后三部分，再將各部分進(jìn)行 4 等分，以每部分內(nèi)的三個(gè)等分點(diǎn)為測(cè)量點(diǎn)，，測(cè)量軟骨全層厚度。以三

相比對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組后部增厚（P=0.020）,中部，前部無(wú)差異（P>0.05）。根據(jù)兩樣本的 t 檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn) 8 周組髁突軟骨后部厚度明顯增厚（P<0.05），4 周組增厚不明顯（P>0.05）。（圖 1-2）
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R783

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2592883