本文關鍵詞：對基因芯片中與淫羊藿苷促進牙周膜干細胞成骨分化相關長鏈非編碼RNA的初步驗證，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:淫羊藿苷是中國傳統(tǒng)中藥淫羊藿的有效提取成分,其化學結構和臨床效用已明確。中藥單體淫羊藿苷已被證實是有效的牙周膜干細胞成骨分化刺激因子。長鏈非編碼RNA(longnon-coding RNA,lnc RNA)是非編碼RNA(non-coding RNA,nc RNA)中長度大于200個核苷酸的調節(jié)性非編碼RNA。相關研究表明,由轉錄因子,染色體調控子和非編碼RNA組成的復雜網絡存在于多能干細胞中并參與調節(jié)再生與多向分化之間的平衡關系,lnc RNA在干細胞的增殖和分化過程中起到關鍵調節(jié)作用。通過分析人牙周膜干細胞在淫羊藿苷誘導前后的m RNA及l(fā)nc RNA表達譜,篩選出成骨分化相關的lnc RNA,并探討其可能的作用機制。材料和方法:利用流式細胞術鑒定原代人牙周膜干細胞;在此基礎上,采用茜素紅染色法驗證牙周膜干細胞的成骨分化能力;并運用茜素紅染色法,驗證h PDLSCs在最佳濃度的ICA誘導下的成骨效果;最后,通過基因芯片檢測獲取人牙周膜干細胞在最佳濃度淫羊藿苷誘導前后的基因表達譜和lnc RNA表達譜,篩選表達上調或下調超過2倍的lnc RNAs。分析差異性表達lnc RNAs的結構、功能及機制,結合芯片結果及文獻篩選出有研究價值的2條lnc RNAs,生物信息學預測上述lnc RNA的靶基因。通過q RT-PCR驗證芯片結果。結果:光學顯微鏡下可見茜素紅染色呈現橘紅色鈣結節(jié);將10-7mol/L淫羊藿苷誘導組合非誘導組的h PDLSC芯片結果比對,選取差異表達倍數2倍以上m RNA和lnc RNA構建差異表達譜,發(fā)現有117個m RNA和48個lnc RNA發(fā)生大于2倍的表達變化,m RNA中有78條上調,39條下調,lnc RNA中有39條上調,9條下調。利用生物信息學技術篩選出兩條懷疑與成骨相關的lnc RNA(lnc-COL14A1-1,lnc-USP25-2)并預測其靶基因。q RT-PCR結果驗證了差異表達m RNA和lnc RNA的表達水平與基因芯片結果一致。結論:經過分析芯片結果及q RT-PCR驗證,初步篩選出2個成骨相關lnc RNA:lnc-COL14A1-1,lnc-USP25-2,通過構建基因共表達網絡,檢索以上2個lnc RNA所在的子網絡所包含的m RNA,預測這2個lnc RNA可能參與淫羊藿苷促進牙周膜干細胞成骨分化的過程。
【關鍵詞】：牙周膜干細胞 長鏈非編碼RNA 基因芯片 成骨分化 淫羊藿苷
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R781.4
【目錄】：

• 縮略詞表3-4
• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 第一章 前言10-17
• 第二章 人牙周膜干細胞與淫羊藿苷誘導成骨分化細胞的培養(yǎng)及鑒定17-25
• 2.1 材料和方法17-22
• 2.1.1 細胞來源17-18
• 2.1.2 材料和儀器18-19
• 2.1.3 方法19-22
• 2.2 統(tǒng)計方法22
• 2.3 結果22-24
• 2.4 討論24
• 2.5 小結24-25
• 第三章 淫羊藿苷誘導人牙周膜干細胞成骨分化前后差異表達LNCRNA的篩選及驗證25-33
• 3.1 材料和方法25-27
• 3.1.1 細胞來源25
• 3.1.2 主要試劑25
• 3.1.3 實驗儀器設備25-26
• 3.1.4 方法26-27
• 3.2 統(tǒng)計方法27
• 3.3 結果27-31
• 3.3.1 樣品RNA質量檢測27
• 3.3.2 lnc RNA芯片結果27-30
• 3.3.3 RT-PCR驗證芯片結果及對uc001gla.2 和lnc-USP25-2 多時間點表達水平的檢測30-31
• 3.4 討論31-32
• 3.5 小結32-33
• 第四章 淫羊藿苷誘導人牙周膜干細胞成骨分化前后差異表達LNCRNA和MRNA的生物信息學分析33-40
• 4.1 引言33
• 4.2 材料和方法33-34
• 4.2.1 材料33
• 4.2.2 方法33-34
• 4.3 結果34-37
• 4.3.1 基因本體論分析結果34-35
• 4.3.2 靶基因Pathway分析35-36
• 4.3.3 Lnc RNA-m RNA共表達網絡分析36-37
• 4.4 討論37-39
• 4.5 小結39-40
• 第五章 全文總結40-41
• 參考文獻41-46
• 在學期間研究成果46-47
• 致謝47

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前8條

1 秦子順;殷麗華;王開娟;劉琪;程文曉;高鵬;孫可墨;鐘梅;余占海;;淫羊藿苷促進人牙周膜干細胞增殖及骨向分化的作用[J];華西口腔醫(yī)學雜志;2015年04期

2 高鵬;程文曉;王開娟;孫可墨;鐘梅;秦子順;殷麗華;余占海;;人參皂苷Rg1促進人牙周膜干細胞增殖及骨向分化[J];中國生物化學與分子生物學報;2015年01期

3 殷麗華;劉琪;余占海;秦子順;;牙周膜干細胞的生物學特性及其作為種子細胞在牙周組織工程中應用的研究進展[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2013年02期

4 趙連梅;紀昕;潘曉明;張倩;韓麗娜;單保恩;;淫羊藿苷(ICA)對化療后免疫抑制小鼠的免疫促進作用[J];中國免疫學雜志;2009年12期

5 李娌;王學美;;淫羊藿苷藥理作用研究進展[J];中國中藥雜志;2008年23期

6 江龍;朱亞琴;;改良組織塊法體外培養(yǎng)人牙周膜細胞和牙髓細胞[J];牙體牙髓牙周病學雜志;2008年04期

7 戴瑛,趙軍寧,戴萍;淫羊藿苷的免疫調節(jié)及抗腫瘤作用研究進展[J];四川生理科學雜志;2001年03期

8 孟煥新;;我國牙周病學的臨床現狀及思考[J];中華口腔醫(yī)學雜志;2008年05期

中國碩士學位論文全文數據庫 前1條

1 張森;淫羊藿苷對雌性大鼠垂體—性腺軸的影響[D];吉林大學;2006年

  本文關鍵詞：對基因芯片中與淫羊藿苷促進牙周膜干細胞成骨分化相關長鏈非編碼RNA的初步驗證，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：256442