發(fā)布時(shí)間：2017-03-19 16:02

  本文關(guān)鍵詞：多被銀蓮花總皂甙誘導(dǎo)人涎腺腺樣囊性癌高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞凋亡過程中Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)是最常見的涎腺惡性腫瘤之一。因其浸潤性強(qiáng)和易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移而嚴(yán)重危害人類健康,因此探索新的預(yù)防治療方法,提高對涎腺腺樣囊性癌的療效,是廣大學(xué)者研究的熱點(diǎn)問題。多被銀蓮花(Anemone Raddeana Regel)是毛茛科銀蓮花屬植物的根莖。藥理活性研究發(fā)現(xiàn),多被銀蓮花提取物有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜及抗驚厥作用。我們前期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,多被銀蓮花總皂甙能夠抑制人涎腺腺樣囊性癌高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞(Adenoid cystic carcinoma of high pulmonary metastatic,ACC-M)的增殖,并能夠誘導(dǎo)其凋亡。目前Bcl-2家族成員Bcl-2及Bax蛋白在多被銀蓮花總皂甙誘導(dǎo)ACC-M細(xì)胞凋亡的過程中是否起重要作用,尚未見國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。本研究擬對體外培養(yǎng)的ACC-M細(xì)胞經(jīng)過多被銀蓮花總皂甙處理后,通過Western Blot方法,檢測Bcl-2和Bax不同時(shí)間點(diǎn)的含量,來驗(yàn)證多被銀蓮花總皂甙誘導(dǎo)ACC-M凋亡過程中Bcl-2家族成員Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)及意義,從而為治療腺樣囊性癌植物性化學(xué)新藥的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1材料1.1 ACC-M北京大學(xué)口腔醫(yī)院提供,建立于1995年。1.2多被銀蓮花總皂甙購買于石家莊樂仁堂藥店(產(chǎn)地為黑龍江省),于河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院經(jīng)溶解與溶劑萃取提純得到。2實(shí)驗(yàn)方法2.1藥液制備多被銀蓮花總皂甙用DMSO溶解制備成20mg/m L儲(chǔ)存液,于-20℃冰箱中保存,使用時(shí)用DMSO濃度小于0.001%的培養(yǎng)液稀釋。2.2細(xì)胞培養(yǎng)將10%胎牛血清和鏈霉素(100ug/m L)、青霉素(100U/m L)放入RPMI1640培養(yǎng)基,置于37℃、5%CO2、濕度飽和的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng),每24~48小時(shí)傳1代,用0.04%EDTA和0.25%胰蛋白酶(1:1)混合液消化并傳代。2.3細(xì)胞接種以及藥物處理用消化液將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞消化后制成4.0×106個(gè)/m L的細(xì)胞懸液,再將對照組、24h組、48h組、72h組,共四個(gè)培養(yǎng)瓶中分別接種2m L細(xì)胞懸液,存放于培養(yǎng)箱。經(jīng)過24小時(shí)細(xì)胞貼壁后,再進(jìn)行藥物處理。把20mg/m L的多被銀蓮花總皂甙儲(chǔ)存液稀釋成濃度為50ug/m L的溶液,從培養(yǎng)箱中取出貼壁后的細(xì)胞,把培養(yǎng)液丟棄,于24h,48h,72h各組中分別加入多被銀蓮花總皂甙溶液2m L(濃度為50ug/m L),對照組加入二甲基亞砜的RPMI1640培養(yǎng)液2m L(濃度為50ug/m L)。待藥物作用24、48、72小時(shí)后,提取各組細(xì)胞組織蛋白。2.4提取細(xì)胞組織蛋白將每一組細(xì)胞用PBS洗滌兩次,用消化液消化后制成細(xì)胞懸液,移入相應(yīng)EP管中。3000rmp,4℃,15分鐘離心。把上清液吸出,留沉淀,這一次用衡鹽溶液洗滌吹打,800rmp,離心5分鐘,再次把上清液吸出。往各組中分別加入400u L細(xì)胞裂解液,并震蕩均勻,放在冰上裂解約30分鐘。細(xì)胞裂解后離心15分鐘(4℃,13000rmp),結(jié)束后,提取上清液就是細(xì)胞蛋白,將細(xì)胞蛋白分別裝入相應(yīng)的EP管中,置于-80℃冰箱保存。2.5蛋白的定量本實(shí)驗(yàn)在波長為570nm下使用分光光度法測定測定各樣本吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合樣品的蛋白濃度。2.6采用western blot檢測Bax和Bcl-2的表達(dá)經(jīng)SDS--PAGE(電泳);轉(zhuǎn)膜;封閉;孵育;洗滌;將β-actin條帶作為作為對照,奧德賽掃描成像系統(tǒng)的進(jìn)行各波段灰度值測定,半定量測定。采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對結(jié)果進(jìn)行方差分析。3統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次,收集所得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果:Western Blot結(jié)果顯示:經(jīng)50ug/m L多被銀蓮花總皂甙處理后,ACC-M細(xì)胞中促凋亡Bax蛋白的表達(dá)量隨著藥物作用時(shí)間延長而增加,經(jīng)灰度值分析Bax蛋白的表達(dá)量與對照組相比:24h組的蛋白表達(dá)量增加了19.6%(P0.05),48h組的蛋白表達(dá)量增加了35.9%(P0.05),72h組的蛋白表達(dá)量增加了57.2%(P0.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí),Bcl-2蛋白的表達(dá)量隨藥物作用時(shí)間延長降低,經(jīng)灰度值分析Bcl-2蛋白的表達(dá)量與對照組相比:24h組的蛋白表達(dá)量降低了21.9%(P0.05),48h組的蛋白表達(dá)量降低了40.0%(P0.05),72h組蛋白表達(dá)量降低了45.2%(P0.05),均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,隨著多被銀蓮花總皂甙作用時(shí)間的延長,Bax/Bcl-2的比值逐漸增大,對照組比值為:0.42±0.009、0.43±0.012、0.43±0.010,無顯著性差異(P0.05);24小時(shí)組比值為:0.64±0.009;48小時(shí)組比值為:0.97±0.023;72小時(shí)組比值為:1.24±0.042,有顯著差異(P0.05)。結(jié)論:多被銀蓮花總皂甙誘導(dǎo)ACC-M細(xì)胞凋亡,與其能夠通過增加Bax蛋白的表達(dá),同時(shí)降低Bcl-2蛋白的表達(dá),導(dǎo)致Bax/Bcl-2蛋白比例增加有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：多被銀蓮花總皂甙 腺樣囊性癌 凋亡 Bcl-2 Bax
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.87
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-20
• 結(jié)果20-21
• 附圖21-24
• 附表24-25
• 討論25-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-31
• 綜述 Bcl-2 基因家族及其抑制劑與腫瘤治療研究進(jìn)展31-39
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 致謝39-40
• 個(gè)人簡歷40

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1 婁在祥;王洪新;;七種新鮮豆莢中總皂甙含量及凝集素活性的比較研究[J];食品科學(xué);2008年03期

2 嚴(yán)一字;李美善;何曉梅;吳基日;;桔梗不同種質(zhì)資源間總皂甙含量的差異[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年08期

3 叢學(xué)滋,秦孟根,王書安;苜蓿總皂甙的提取與分析[J];中藥通報(bào);1988年09期

4 黃桂東;鐘先鋒;吳龍奇;;山藥總皂甙的提取研究[J];農(nóng)產(chǎn)品加工(學(xué)刊);2006年11期

5 張敏;杜琳;黃桂東;鐘先鋒;;山藥總皂甙的提取研究[J];中藥材;2007年07期

6 俞闐;袁建;郝小燕;鞠興榮;麻浩;;酶標(biāo)儀三波長比色法定量測定大豆總皂甙[J];食品科學(xué);2007年12期

7 楊娜敬;路楊;董彬;秦振順;;軟膠囊中總皂甙的測定[J];中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2009年02期

8 孫俊華;阮秀蘭;劉瑩;;“甘茶蔓”橋料中}^股藍(lán)總皂甙含量的測定[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);1989年01期

9 劉健明，李國君;不同加工方法的人參在貯存期內(nèi)水分及總皂甙含量的變化[J];中國藥學(xué)雜志;1995年02期

10 孫連升，劉景東，劉良，叢月珠;醇提人參不同部位總皂甙純度測定[J];藥學(xué)實(shí)踐雜志;1996年04期

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1 張建中;張穎;李冬梅;張晶;門嵐;;人參果總皂甙治療糖尿病腎病患者蛋白尿的臨床研究[A];2006年中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病分會(huì)第十次全國糖尿病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

2 趙文莉;張立實(shí);李寧;;人參莖葉總皂甙抗疲勞作用的小鼠實(shí)驗(yàn)研究[A];“全國老年?duì)I養(yǎng)學(xué)術(shù)研討會(huì)”暨“四川省營養(yǎng)學(xué)會(huì)成立二十周年慶祝會(huì)”會(huì)議錄[C];2008年

3 趙文莉;王偉;張立實(shí);李寧;;人參莖葉總皂甙抗疲勞作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];“全國老年?duì)I養(yǎng)學(xué)術(shù)研討會(huì)”暨“四川省營養(yǎng)學(xué)會(huì)成立二十周年慶祝會(huì)”會(huì)議錄[C];2008年

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5 錢亦華;任惠民;胡海濤;劉勇;楊杰;陳新林;許杰華;周次想;;川續(xù)斷總皂甙對Alzheimer病細(xì)胞模型作用的研究[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

6 胡俊;沈中晨;翁新楚;;三七毛根總皂甙對動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂及主動(dòng)脈血管細(xì)胞黏附分子-1mRNA表達(dá)的影響[A];第九屆全國中藥和天然藥物學(xué)術(shù)研討會(huì)大會(huì)報(bào)告及論文集[C];2007年

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1 畢大偉;多被銀蓮花總皂甙對人涎腺腺樣囊性癌高肺轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

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5 張永強(qiáng);敗醬草總皂甙抗小鼠宮頸癌活性研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

6 謝獲;牛膝總皂甙對兔早期骨關(guān)節(jié)炎及PI3K/AKT通路的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2011年

7 王松柏;苜�？傇磉疤崛〖兓に嚨难芯縖D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2005年

8 方三華;參麥有效部位抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];浙江中醫(yī)學(xué)院;2003年

9 王婷;龍牙id木總皂甙對大鼠心肌缺血再灌注損傷sVCAM-1表達(dá)及MDA、SOD影響的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：256198