【摘要】：目的：通過膠原酶消化法體外分離培養(yǎng)人牙周膜細胞并構建細胞牽張應力加載模型，研究牽張應力對人牙周膜細胞NF-κB信號通路的影響及其與MMP-2表達的關系. 方法：①膠原酶消化法體外分離培養(yǎng)人牙周膜細胞，觀察人牙周膜細胞生物學特性，免疫組織化學對細胞進行抗角蛋白及抗波形蛋白抗體檢測判定其來源，并構建細胞牽張應力加載模型。 ②選取4-6代細胞，對細胞施加不同時間的12%周期性牽張應力，結合信號通路抑制劑及蛋白印跡的檢測方法，研究不同應力條件對人牙周膜細胞NF-κB、IκB、 MMP-2蛋白的表達、IKK激酶的活性及磷酸化水平的影響，及MMP-2在人牙周膜細胞中表達的可能的信號轉導通路。 結果：①膠原酶消化法體外成功分離培養(yǎng)人牙周膜細胞，免疫組織化學鑒定其來源可靠；應用多通道細胞牽張應力加載系統(tǒng)成功構建人牙周膜細胞體外培養(yǎng)-力學刺激模型。 ②蛋白印跡結果顯示：人牙周膜細胞受到12%形變率的周期性牽張應力作用時，，NF-κB信號通路被激活， p-IKK磷酸化程度升高，與對照組相比均具有顯著性差異（P0.05）。PDTC組, NF-κB蛋白、p-IKK表達明顯降低，與12h組相比具有顯著性差異（P0.05）。對照組胞漿I-κBα蛋白有較強的表達，加力后，胞漿I-κBα蛋白發(fā)生磷酸化并降解表達顯著降低與對照組相比具有顯著差異（P0.05），加入PDTC后，胞漿I-κBα蛋白表達增加，與12h相比差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 ③蛋白印跡結果顯示：當牙周膜細胞受到12%形變率的周期性牽張應力作用時，MMP-2蛋白的表達增加，與對照組相比具有顯著性差異（P0.05），12h時MMP-2蛋白表達最高。NF-κB通路抑制劑PDTC可抑制機械牽張應力作用下牙周膜細胞MMP-2表達的增加，與單純加力組相比差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 結論：①采用膠原酶消化法成功的分離培養(yǎng)人牙周膜細胞并構建hPDLCs-力學刺激模型。 ②12%形變率的周期性牽張應力作用于牙周膜細胞時，NF-κB通路被激活，胞漿I-κBα蛋白表達水平的降低，I-κBα降解是NF-κB信號通路激活的機制之一。 ③12%形變率的周期性機械牽張應力可誘導人牙周膜細胞MMP-2的表達增加，從而影響牙周組織細胞外基質代謝同時機械牽張應力可通過NF-κB通路影響MMP-2蛋白的表達。
[Abstract]:Aim: to study the effect of distraction stress on the NF- 魏 B signaling pathway of human periodontal ligament cells and its relationship with the expression of MMP-2 in vitro by collagenase digestion and to construct a model of tensile stress loading in human periodontal ligament cells. Methods: human periodontal ligament cells were cultured by collagenase digestion in vitro and the model of tensile stress loading was constructed. 鏂規(guī)硶: 1 鑳跺師 閰

本文編號：2455739