【摘要】：背景:牙齒的生物礦化是一種非經(jīng)典的離子介導(dǎo)途徑的礦化模式。礦物分子在非膠原蛋白基質(zhì)(non-collagenous proteins,NCPs)的穩(wěn)定作用下形成無定形磷酸鈣(amorphous calcium phosphate,ACP)的納米前驅(qū)體,即納米無定形磷酸鈣,具有較低界面能的Ca2(HPO4)32-的團(tuán)簇。隨后ACP進(jìn)入到脫礦的膠原纖維上,在NCPs的誘導(dǎo)下,聚集相變?yōu)榫w,有序地排列在脫礦膠原上。按照這種"自下而上"的礦化形式,最終達(dá)到纖維間和纖維內(nèi)的礦化。而仿生礦化技術(shù)就是模仿生物自然礦化的過程,將納米無定形磷酸鈣前驅(qū)相用合適的方式回填在牙本質(zhì)膠原纖維上。這種自下而上的再礦化方式不依賴籽晶成核,是牙本質(zhì)再礦化的可行辦法。在這個自下而上礦化的過程中,必須要考慮到牙本質(zhì)小管的滲透性。大量研究證實(shí),牙本質(zhì)滲透液的形成會影響修復(fù)材料與牙本質(zhì)的結(jié)合。牙本質(zhì)粘結(jié)通過對表層牙本質(zhì)酸蝕使膠原纖維暴露,使樹脂粘結(jié)獲得更大的微機(jī)械固位力。但由于髓內(nèi)壓的存在,牙本質(zhì)小管不斷向外滲出液體,暴露的膠原纖維內(nèi)纖維間存在大量水分。從近髓到近釉牙骨質(zhì)界,牙本質(zhì)小管的數(shù)量從45000/mm2降低至20000/mm2,小管直徑也從2.37μm降至0.63μm。在釉牙骨質(zhì)界附近,牙本質(zhì)小管占牙本質(zhì)總面積的1%,到了近髓處,小管面積可達(dá)22%,這意味著水的含量也從1%升到22%。這些水分不能被樹脂單體完全替代,導(dǎo)致了混合層微滲漏的出現(xiàn)和膠原纖維降解老化的現(xiàn)象。仿生礦化技術(shù)的目的是在混合層中樹脂稀疏,水分豐富的區(qū)域完成纖維內(nèi)和纖維間的再礦化,提高樹脂-牙本質(zhì)粘結(jié)的效果。這個過程必然也是在人體正常生理牙髓壓力存在的條件下進(jìn)行的,是否也和樹脂粘結(jié)一樣會因牙本質(zhì)滲透性的影響而受到抑制,亦或是基本不受牙本質(zhì)滲透性溢出的組織液的影響,仍能達(dá)到?jīng)]有模擬生理牙髓壓力條件下的礦化效果,我們不得而知�；谘辣举|(zhì)滲透性對仿生礦化臨床應(yīng)用可能產(chǎn)生的影響,本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了模擬施加人體生理牙髓壓力下礦化和不施加壓力下分別礦化脫礦牙本質(zhì)面的研究,觀察兩者礦化程度的差異,用以探索體外模擬人體牙髓壓力下牙本質(zhì)滲透性對仿生礦化的影響,進(jìn)而為仿生礦化技術(shù)在臨床應(yīng)用可能面臨的問題提供研究準(zhǔn)備。目的:本實(shí)驗(yàn)旨在研究體外模擬生理牙髓壓力條件下產(chǎn)生的牙本質(zhì)滲透性對仿生礦化產(chǎn)生的影響,研究其與無牙髓壓力下礦化的差異,判斷滲透性是否對礦化進(jìn)程存在抑制作用,并探討其影響礦化的機(jī)理。方法:實(shí)驗(yàn)分為三組:空白對照組,為脫礦牙本質(zhì),n=6;對照組,為正常礦化不同天數(shù)的不施加體外模擬生理牙髓壓力的礦化牙本質(zhì),n=18;實(shí)驗(yàn)組,為礦化不同天數(shù)的體外模擬牙髓壓力下的礦化牙本質(zhì),n=18。對照組和實(shí)驗(yàn)組在Id,4d,7d時取樣,樣品與空白對照組樣品一起在超薄切片機(jī)(Boeckeler Instruments,Tucson,USA)上切取表面的1mm厚的牙本質(zhì)片,脫水,干燥,固定,最后將所有樣本保存在真空干燥箱內(nèi)24h。將所有牙片噴金60s,在掃描電鏡(scanning electronmicroscope,SEM)30KV下分別觀察不同樣本的牙本質(zhì)橫截面和縱截面的膠原網(wǎng)形貌;然后將樣本用環(huán)氧樹脂包埋,用硬組織切片機(jī)以垂直于再礦化層的方向切片,制備得70-90納米厚的薄片,置于銅網(wǎng)上,在透射電鏡(transmission electron microscope,TEM)加速電壓80KV下觀察再礦化情況。結(jié)果:透射電鏡(TEM)下,相同的礦化時間后,對照組再礦化層比實(shí)驗(yàn)組更厚,且最終對照組礦化7天時已全層礦化,實(shí)驗(yàn)組則還未達(dá)到。掃描電鏡(SEM)下,隨著礦化時間的增加,對照組和實(shí)驗(yàn)組牙本質(zhì)表面的膠原纖維直徑明顯變粗。在礦化相同的時間下,對比對照組和實(shí)驗(yàn)組,可以發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組牙本質(zhì)小管內(nèi)的膠原纖維直徑比對照組更細(xì),且膠原分布更加稀疏。在縱截面上,可以發(fā)現(xiàn)在礦化相同時間下,對照組牙本質(zhì)小管內(nèi)的再礦化膠原層厚度明顯大于實(shí)驗(yàn)組的再礦化膠原層厚度。結(jié)論:體外施加模擬生理牙髓壓力下,牙本質(zhì)滲透性持續(xù)產(chǎn)生的水分降低了鈣磷濃度,反應(yīng)產(chǎn)生的ACP顆粒直徑變大,總自由能降低,相變?yōu)镠AP的速度變慢,使HAP在脫礦膠原纖維上結(jié)晶區(qū)域擴(kuò)張速度變慢,延緩了仿生礦化的進(jìn)程。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R780.2

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本文編號：2451840