本文關(guān)鍵詞：純鈦表面加載RGD多肽的體外實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《安徽醫(yī)科大學(xué)》 2015年

純鈦表面加載RGD多肽的體外實(shí)驗(yàn)研究

徐基亮  

【摘要】：目的鈦種植體與骨界面之間形成的骨結(jié)合,是種植修復(fù)成功的關(guān)鍵。本研究擬先在純鈦表面采用兩步陽(yáng)極氧化法形成雙層蜂窩狀Ti O2納米管,然后用聚多巴胺處理納米管表面,同時(shí)向外接枝偶聯(lián)RGD多肽,構(gòu)建Ti O2納米管-聚多巴胺-RGD多肽生物活性層,體外評(píng)價(jià)該活性層對(duì)小鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的黏附、增殖和分化的影響,以期為鈦種植體表面生物改性提供新的思路。材料與方法1,鈦片預(yù)處理及制備Ti O2納米管:厚度0.25 mm的純鈦箔片加工成直徑為12 mm的鈦片,金相砂紙(800目到7000目)逐級(jí)打磨拋光至鏡面狀,丙酮、乙醇、去離子水中依次超聲清洗20min,氮?dú)饬髦写蹈�。繼而將上述鈦片放入盛有88 mmol/L氟化銨的乙二醇電解液中,鈦片作陽(yáng)極,石墨作陰極,分兩步陽(yáng)極氧化:第一步先在60伏電壓下通電2.5小時(shí),取出鈦片放入去離子水中,超聲震蕩去除鈦片表面陽(yáng)極化形成的氧化膜;第二步改在12伏電壓下通電40分鐘,取出鈦片,去離子水中超聲清洗至溶液澄清,氮?dú)饬髦写蹈?備用。2,多巴胺修飾及加載RGD多肽:電化學(xué)修飾后的鈦片,浸泡于50ml、2mg/ml多巴胺溶液中12小時(shí),避光,保持周圍氣流通暢。取出修飾后的鈦片,去離子水中反復(fù)沖洗去除表面未聚合殘余的多巴胺,室溫下自然晾干。將上述鈦片再浸泡于30ml、200mg/ml RGD多肽溶液中,37℃恒溫?fù)u床上12小時(shí),取出處理后的鈦片,去離子水中反復(fù)沖洗去除表面未結(jié)合牢固殘余的多肽,室溫下自然晾干。3,實(shí)驗(yàn)分組:打磨拋光的鈦片作為光滑組,陽(yáng)極氧化處理的鈦片作為Ti O2納米管組,在Ti O2納米管基礎(chǔ)上多巴胺浸泡修飾的鈦片作為多巴胺組,通過多巴胺接枝偶聯(lián)RGD多肽的鈦片作為RGD多肽組。4,表面形貌和元素組成檢測(cè):采用場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡(FESEM)、X射線光電子能譜(XPS)對(duì)各組鈦片進(jìn)行表面形貌和元素組成分析。5,體外細(xì)胞學(xué)評(píng)價(jià):體外將修飾后鈦試件與小鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng),評(píng)價(jià)Ti O2納米管-聚多巴胺-RGD多肽活性層對(duì)BMSCs的黏附、增殖和分化的影響。結(jié)果1,FESEM顯示,光滑組表面比較粗糙,有清晰可見的的劃痕;Ti O2納米管組表面為蜂窩狀多孔的Ti O2納米管,外管為六邊形,內(nèi)、外管直徑分別在約20、160nm;多巴胺組表面納米管管徑部分變窄或被封閉;RGD多肽組表面可見散落顆粒狀的RGD多肽,部分進(jìn)入納米管中。2,細(xì)胞粘附:光滑組細(xì)胞生長(zhǎng)一般,胖梭形,鋪展較局限。Ti O2納米管組細(xì)胞鋪展較開,但是細(xì)胞之間的觸角較少。多巴胺組和RGD多肽組細(xì)胞生長(zhǎng)鋪展良好,細(xì)梭形,細(xì)胞伸出的觸角較多,且RGD多肽組細(xì)胞之間接觸比多巴胺組更多。3,細(xì)胞增殖:4組在第1天增值活力有增加的趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與光滑組比較,Ti O2納米管組,多巴胺組,RGD多肽組在第3天和第5天增殖活力增加差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05);與Ti O2納米管組、多巴胺組分別比較,RGD多肽組在第3天和第5天增殖活力增加差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05)。4,細(xì)胞分化:4組在第3天和第5天AKP活力有增加的趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第7天時(shí),與光滑組比較,Ti O2納米管組,多巴胺組和RGD多肽組AKP活力增加差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05);與Ti O2納米管組和多巴胺組分別比較,RGD多肽組AKP活力增加差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05)。結(jié)論在純鈦表面能構(gòu)建出Ti O2納米管-聚多巴胺-RGD多肽生物活性層,在體外細(xì)胞培養(yǎng)中該活性層能促進(jìn)細(xì)胞的黏附、增殖和分化,表現(xiàn)出良好的生物相容性,這種鈦表面功能化修飾法可望用于改善鈦種植體表面生物活性,可望提高骨結(jié)合,但尚需動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R783.1
【目錄】：

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