【摘要】：目的研究在不同pH培養(yǎng)條件下,變異鏈球菌菌株的sRNA SpR19及其潛在靶向的GroEL蛋白在不同致齲力菌株中的表達(dá)變化,探討其作為高致齲變異鏈球菌的分子鑒別標(biāo)志物的可能性。方法提取高致齲性變異鏈球菌的臨床分離株(菌株17)和低致齲性變異鏈球菌的臨床分離株(菌株5)的總RNA,建庫(kù)后進(jìn)行高通量測(cè)序獲得差異表達(dá)的sRNA;結(jié)合生物信息學(xué)與文獻(xiàn),挑選關(guān)鍵sRNA與蛋白進(jìn)行不同致齲菌株表達(dá)水平的研究:qRT-PCR驗(yàn)證目的sRNA SpR19在pH5.5和pH7培養(yǎng)條件下不同致齲能力菌株中的表達(dá)水平;合成變異鏈球菌GroEL蛋白抗原多肽并制備多克隆抗體,Western blotting鑒定不同pH培養(yǎng)條件下高、低致齲菌中GroEL的表達(dá)水平;qRT-PCR驗(yàn)證不同pH培養(yǎng)條件下不同致齲能力菌株GroEL的mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果生物信息學(xué)提示SpR19可能靶向GroEL的mRNA及上下游基因間區(qū);不同pH條件下,相較于低致齲菌,高致齲菌中sRNA SpR19表達(dá)下降(P0.05),而GroEL蛋白與mRNA高表達(dá)(P0.05),二者表達(dá)趨勢(shì)相反。結(jié)論不同pH條件培養(yǎng)的高致齲性變異鏈球菌中,sRNA SpR19均低表達(dá),GroEL的蛋白水平與RNA水平均存在高表達(dá),結(jié)合生物信息學(xué)分析提示sRNA SpR19可能通過靶向GroEL負(fù)調(diào)控變異鏈球菌的致齲能力。
[Abstract]:Objective to study the expression of sRNA SpR19 and its potential target GroEL protein in different cariogenic strains of Streptococcus mutans under different pH culture conditions, and to explore the possibility of using them as molecular markers for identification of Streptococcus mutans with high caries. Methods the total RNA, of the clinical isolates of Streptococcus mutans with high caries (strain 17) and the clinical isolates of Streptococcus mutans with low caries (strain 5) were obtained by high throughput sequencing. Combined with bioinformatics and literature, the key sRNA and protein were selected to study the expression level of different caries causing strains: qRT-PCR was used to verify the expression level of sRNA SpR19 in different cariogenic strains under pH5.5 and pH7 culture conditions. Streptococcus mutans GroEL protein antigen peptide was synthesized and polyclonal antibody, Western blotting was prepared to identify the GroEL expression level of high and low cariogenic bacteria under different pH culture conditions. QRT-PCR was used to test the mRNA expression level of different cariogenic strains GroEL under different pH culture conditions. Results Bioinformatics suggested that SpR19 might target the mRNA and the upstream and downstream regions of GroEL. Compared with low cariogenic bacteria, the expression of sRNA SpR19 in high cariogenic bacteria decreased (P0.05), but GroEL protein and mRNA were highly expressed (P0.05) under different pH conditions. Conclusion in Streptococcus mutans with high caries induced by different pH conditions, the expression of sRNA SpR19 is low, and the protein level of GroEL and RNA level are high. Combined with bioinformatics analysis, sRNA SpR19 may negatively regulate the cariogenic ability of Streptococcus mutans by targeting GroEL.
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院口腔科;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所;解放軍總后勤部第一門診部口腔中心;
【基金】：軍隊(duì)十二五面上項(xiàng)目(CWS12J126)
【分類號(hào)】：R780.2

【參考文獻(xiàn)】

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