【摘要】：背景及目的： 先天性唇腭裂是人類最常見的先天性畸形之一，在世界及我國都有較高的發(fā)病率，非綜合征性唇腭裂（NSCL/P），非綜合征性唇腭裂（NSCL/P），是指不伴發(fā)全身其他系統(tǒng)的器官畸形，且不屬于各種綜合征的唇裂、唇裂合并腭裂的先天性發(fā)育畸形的總稱，占所有唇腭裂畸形的85%-95%。葉酸為維生素B復(fù)合體之一，臨床普遍采用其預(yù)防先天性非綜合征性唇腭裂（NSCL/P）及脊柱裂等，但其對可能致病因素的拮抗作用的機制及量化分析尚未得到確切結(jié)論。本研究應(yīng)用BALB/C小鼠作為實驗動物，探索維甲酸誘導(dǎo)其發(fā)生腭裂的致畸條件，并檢測和分析其在葉酸干預(yù)下腭裂的胎鼠EPM細(xì)胞的增殖情況，探討葉酸作為保護因素對NSCL/P的作用機制，為葉酸用于預(yù)防NSCL/P提供一定的依據(jù)。 方法： 1、在孕鼠孕期第10天（GD10）時，按孕鼠體重50mg/kg管飼維甲酸，誘導(dǎo)胚胎腭裂模型，GD17剖宮取胎鼠，觀察腭裂情況，得出致畸率。 2、分別在GD14、GD17處死孕鼠，剖宮取胎鼠，應(yīng)用不完全消化法提取GD14、17的胚胎腭突間充質(zhì)細(xì)胞(EPM cells)進(jìn)行培養(yǎng)，制取細(xì)胞爬片，對細(xì)胞角蛋白、波形蛋白進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，，鑒定細(xì)胞并計算EPM cells陽性率。 3、在GD14、17的胚胎腭突EPM細(xì)胞中加入葉酸濃度為10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL的培養(yǎng)基，對照組培養(yǎng)基不含葉酸。采用四甲基偶氮唑鹽（3-(4,5-dimethythiazol-z-yl)-2,5-dipheny tetrazolium bromide, MTT）法檢測葉酸濃度的GD14、17的胚胎腭突EPM細(xì)胞連續(xù)8天的增殖能力，繪制細(xì)胞增殖曲線，對各組的增殖能力進(jìn)行比較。 結(jié)果： 1、在GD10管飼孕鼠50mg/kg維甲酸可致胎鼠腭裂畸形； 2、不完全消化法提純EMP細(xì)胞純度達(dá)到98%； 3、GD14的EMP細(xì)胞增殖受抑制，20μg/mL、40μg/mL濃度葉酸可拮抗這種抑制作用。 結(jié)論： 1、過量維甲酸可致小鼠腭裂畸形，腭突間充質(zhì)細(xì)胞增殖受抑制是其致畸機制之一； 2、葉酸可以拮抗維甲酸對小鼠GD14EPM細(xì)胞增殖的抑制作用。
[Abstract]:Background and objective: congenital cleft lip and palate is one of the most common congenital deformities in human beings. There is a high incidence of non-syndromic cleft lip and palate (NSCL/P) and non-syndromic cleft lip and palate (NSCL/P) in the world and in China. It refers to the cleft lip that does not accompany other system of the whole body, and does not belong to all kinds of syndrome cleft lip, cleft lip with cleft palate congenital development malformation, account for all cleft lip and palate deformity 85-95. Folic acid, one of the vitamin B complexes, is widely used to prevent congenital non-syndromic cleft lip and palate (NSCL/P) and spina bifida in clinic. In this study, BALB/C mice were used as experimental animals to explore the teratogenic conditions of retinoic acid induced cleft palate, and to detect and analyze the proliferation of fetal EPM cells induced by folic acid. To explore the mechanism of folic acid as a protective factor on NSCL/P, and to provide some basis for folic acid to prevent NSCL/P. Methods: 1. At the 10th day of pregnancy (GD10), the fetal cleft palate model was induced by feeding retinoic acid with 50mg/kg tube according to the body weight of pregnant rats. The fetal mice were removed by GD17, and the cleft palate was observed and the teratogenic rate was obtained. 2. The pregnant rats were killed in GD14,GD17, the fetal mice were taken from the uterus, the (EPM cells) of the embryonic palatine process mesenchymal cells of GD14,17 were extracted by incomplete digestion method, and the cell climbing slices were prepared, and the cytokeratin was obtained. Vimentin was stained by immunocytochemistry to identify the cells and calculate the positive rate of EPM cells. 3. The culture medium with folic acid concentration of 10 渭 g 路mL ~ (-1) or 20 渭 g 路mL ~ (-1) or 40 渭 g / mL ~ (-1) or 80 渭 g/mL was added to EPM cells of embryonic palatal process of GD14,17. The medium of control group was free of folic acid. The proliferation of EPM cells in embryonic palatine process of folic acid concentration GD14,17 was detected by 3- (4- (4-) -dimethythiazol-yl) -2- 5-dipheny tetrazolium bromide, MTT) assay for 8 days, and the cell proliferation curve was plotted. The proliferative ability of each group was compared. Results: 1) pregnant rats fed with 50mg/kg retinoic acid in GD10 tube could cause cleft palate malformation, 2the purity of EMP cells purified by incomplete digestion was 98%. 3The proliferation of EMP cells of GD14 was inhibited, and folic acid at 40 渭 g/mL concentration of 20 渭 g / mL could antagonize the inhibition. Conclusion: 1. Excessive retinoic acid can induce cleft palate malformation in mice, and the inhibition of proliferation of mesenchymal cells in palatal process is one of its teratogenic mechanisms; 2, folic acid can antagonize the inhibitory effect of retinoic acid on the proliferation of mouse GD14EPM cells.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R782.2

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本文編號：2413199