【摘要】：目的探討p38絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)在慢性牙周炎組織來源的牙周膜干細胞中的表達及其對炎癥微環(huán)境作用下牙周膜干細胞成骨分化能力的影響。方法 2012年10月至2013年5月收集中國人民解放軍總醫(yī)院口腔科因治療需要拔除的無齲前磨牙及慢性牙周炎牙齒,培養(yǎng)正常及炎癥微環(huán)境下的牙周膜干細胞(H-PDLSCs,P-PDLSCs)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗及實時定量PCR檢測腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-1β的分泌及基因表達量,免疫熒光檢測p38在細胞內(nèi)的表達,Western blot法檢測兩種細胞成骨誘導7 d后p38及磷酸化p38(p-p38)的表達。使用p38 MAPK特異性抑制劑SB-203580干擾后體外成骨誘導7 d,實時定量PCR檢測細胞成骨關(guān)鍵基因Runx2和堿性磷酸酶(ALP)的基因表達水平,成骨誘導21 d后茜素紅染色檢測PDLSCs的礦化結(jié)節(jié)形成情況。結(jié)果 P-PDLSCs的TNF-α和IL-1β分泌量均顯著高于H-PDLSCs(68.80±6.70比34.10±3.07,P=0.001;57.10±4.23比26.90±2.58,P=0.000)。P-PDLSCs中TNF-α的基因表達水平較H-PDLSCs上升1.4倍(P=0.011),IL-1β的基因表達水平也上升1.7倍(P=0.009)。P-PDLSCs的p38表達量高于H-PDLSCs;成骨誘導后兩種PDLSCs中的p-p38表達均升高,但p38表達水平有所降低。SB-203580干擾后PDLSCs的Runx2和ALP表達水平顯著降低(H-PDLSCs:P=0.044、0.036;P-PDLSCs:P=0.017、0.004),礦化結(jié)節(jié)形成數(shù)量減少。結(jié)論在慢性炎癥微環(huán)境中,p38 MAPK參與細胞的炎性反應,抑制p38后炎癥微環(huán)境作用下PDLSCs的成骨分化能力也被顯著抑制。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) in periodontal ligament stem cells derived from chronic periodontitis and its effect on osteogenic differentiation of periodontal ligament stem cells under inflammatory microenvironment. Methods from October 2012 to May 2013, periodontal ligament stem cells (P-PDLSCs) of periodontal ligament stem cells (H-PDLSCsPPDLSCs) were collected from the Department of Stomatology of the Chinese people's Liberation Army General Hospital in order to remove the teeth without caries and chronic periodontitis, and to culture the periodontal ligament stem cells (H-PDLSCsPPDLSCs) in normal and inflammatory environment. The secretion and gene expression of tumor necrosis factor (TNF) 偽 and interleukin (IL) 1 尾 were detected by enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) and real time quantitative PCR. The expression of p38 was detected by immunofluorescence. The expression of p38 and phosphorylated p38 (p-p38) were detected by Western blot. The expression of Runx2 and alkaline phosphatase (ALP), the key genes of osteogenesis, were detected by real-time quantitative PCR at 7 days after osteogenesis induction was induced by p38 MAPK specific inhibitor SB-203580. 21 days after osteogenesis induction, alizarin red staining was used to detect the formation of mineralized nodules in PDLSCs. Results the secretion of TNF- 偽 and IL-1 尾 in P-PDLSCs was significantly higher than that in H-PDLSCs (68.80 鹵6.70 vs 34.10 鹵3.07). The gene expression level of TNF- 偽 in P-PDLSCs was 1.4 times higher than that in H-PDLSCs (P0. 011). The gene expression level of IL-1 尾 also increased 1.7-fold (P0. 009). The expression of p38 in P-PDLSCs was higher than that in H-PDLSCs. After osteogenic induction, the expression of p-p38 increased, but the expression of p38 decreased. After SB-203580 interference, the expression of Runx2 and ALP in PDLSCs decreased significantly (H-PDLSCs0.044, 0.036). P-PDLSCs: P0.0170.004), the number of mineralized nodules decreased. Conclusion in chronic inflammatory microenvironment, p38 MAPK is involved in the inflammatory response of cells, and the osteogenic differentiation ability of PDLSCs under the action of p38 inflammatory microenvironment is also significantly inhibited.
【作者單位】： 中國人民解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院口腔科;北京軍區(qū)總醫(yī)院口腔科;中國人民解放軍總醫(yī)院老年口腔病科;中國人民解放軍總醫(yī)院口腔醫(yī)學研究所;
【基金】：國家自然科學基金(31200741) 中國博士后科研基金(2013M532108) 北京市科技新星計劃(Z14144000180000)~~
【分類號】：R780.2

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：2397154