發(fā)布時(shí)間：2018-11-09 19:01

【摘要】：目的:氟是一種在人體成長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中必需的微量元素。但長(zhǎng)期通過(guò)飲食攝入過(guò)量的氟可引起硬組織的慢性病變,主要表現(xiàn)為氟斑牙和氟骨癥。歷年來(lái)有大量的關(guān)于氟與硬組織的研究,其關(guān)注點(diǎn)較多地集中在氟中毒所致病變的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制方面。多數(shù)文獻(xiàn)均證實(shí)氟能夠增強(qiáng)成骨細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的增殖及礦化能力。而目前在對(duì)如何促進(jìn)牙周組織再生的組織工程技術(shù)研究中,較少關(guān)注氟元素的利用。本研究將不同濃度的氟化鈉(NaF)添加入體外培養(yǎng)的人牙周膜細(xì)胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)中,觀察其對(duì)hPDLCs增殖及礦化能力的影響,為臨床治療過(guò)程中將氟添加入牙周藥物來(lái)促進(jìn)牙槽骨恢復(fù)提供一定的基礎(chǔ)研究依據(jù)。方法:從門診上收集因正畸等治療需求而拔除的健康前磨牙、第三磨牙,從根中1/3刮取的牙周膜組織中分離、培養(yǎng)并鑒定hPDLCs;通過(guò)細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒(cell-counting kit-8,CCK-8)測(cè)定不同濃度的NaF對(duì)hPDLCs增殖能力的影響,并選取三組無(wú)毒害作用的濃度用于礦化能力的觀察實(shí)驗(yàn);使用第4～6代hPDLCs,配制NaF終濃度為1 × 10-5、5 × 10-4和1 × 10-3 mol/L的礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)基,以無(wú)氟的礦化誘導(dǎo)組為對(duì)照,通過(guò)堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性檢測(cè)、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和茜素紅染色及鈣結(jié)節(jié)定量檢測(cè)法測(cè)定不同濃度NaF對(duì)hPDLCs礦化能力的影響。本研究采用SPSS20.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的單因素方差分析,數(shù)據(jù)均用Mean±SD表示,P0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1、成功從牙周膜組織中分離培養(yǎng)出hPDLCs,且細(xì)胞形態(tài)正常,狀態(tài)良好;免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定表明細(xì)胞成分較單一,細(xì)胞可靠,可用于后續(xù)試驗(yàn)。2、細(xì)胞活力檢測(cè)結(jié)果表明,NaF終濃度在5× 10-5、1 × 10-4、5× 10-4mol/L時(shí)均能提高h(yuǎn)PDLCs的增殖能力,且5 × 10-4 mol/L的濃度組可以觀察到最佳的促進(jìn)細(xì)胞增殖能力的效應(yīng)(P0.05)。從各濃度中篩選出三組對(duì)細(xì)胞無(wú)毒害作用的終濃度,用于礦化實(shí)驗(yàn),以不含氟的細(xì)胞組為對(duì)照。3、堿性磷酸酶活性檢測(cè)結(jié)果表明,添加NaF孵育14 d后,與對(duì)照組相比,NaF終濃度為1×10-5mol/L實(shí)驗(yàn)組的堿性磷酸酶染色陽(yáng)性面積最大(P0.05),由此可知1 × 10-5 mol/L的NaF能顯著提高ALP活性;qRT-PCR的數(shù)據(jù)則根據(jù)各實(shí)驗(yàn)分組的時(shí)間監(jiān)測(cè)點(diǎn)、指標(biāo)等因素表現(xiàn)出較大的變化,未能觀察到較為一致的劑量-效應(yīng)關(guān)系;茜素紅染色及鈣結(jié)節(jié)定量檢測(cè)法結(jié)果表明,添加不同濃度NaF培養(yǎng)細(xì)胞28 d后,1 × 10-5mol/L的NaF終濃度添加組中可觀察到較多的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量,且萃取染料定量檢測(cè)結(jié)果也提示1× 10-5mol/L的NaF實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比鈣含量顯著增多(P0.05)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)證實(shí)當(dāng)NaF終濃度為5×10-5、1×10-4、5×10-4 mol/L時(shí)能明顯促進(jìn)hPDLCs的增殖能力;而在礦化誘導(dǎo)條件下,NaF終濃度為1× 10-5 mol/L時(shí)能進(jìn)一步提高h(yuǎn)PDLCs的ALP活性和促進(jìn)礦化結(jié)節(jié)的形成。因此我們可以認(rèn)為往牙周生物制劑中加入適量氟可以促進(jìn)hPDLCs的增殖及礦化能力,有一定程度的促進(jìn)受損牙周組織再生的發(fā)展前景。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R781.4

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本文編號(hào)：2321292