【摘要】：目的構(gòu)建變異鏈球菌低p H感應(yīng)系統(tǒng),原位可視地檢測其所處環(huán)境的p H。方法通過聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和基因重組技術(shù),克隆得到唾液鏈球菌57.I的ureⅠ基因啟動子片段(pureⅠ)及綠色熒光蛋白(GFP)的編碼基因gfp,經(jīng)過酶切后將兩個基因片段連接融合,然后再經(jīng)雙酶切將融合片段與大腸桿菌-變異鏈球菌穿梭載體p DL278連接,構(gòu)建出重組質(zhì)粒p DL278-pureⅠ-gfp。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到變異鏈球菌UA159中,使用熒光顯微鏡觀察其在不同p H條件和不同處理時間的單位面積熒光強度。結(jié)果目的基因pureⅠ和gfp擴增片段大小分別為450 bp和717 bp,與預(yù)期大小相符。構(gòu)建的重組質(zhì)粒p DL278-pureⅠ-gfp測序結(jié)果與數(shù)據(jù)庫比對完全一致。重組變異鏈球菌低p H報告菌株P(guān)CR擴增片段與預(yù)期結(jié)果相符。在一定范圍內(nèi),變異鏈球菌低p H感應(yīng)系統(tǒng)單位面積熒光強度隨p H值的降低和處理時間的延長而增強。結(jié)論本研究成功構(gòu)建了變異鏈球菌低p H感應(yīng)系統(tǒng),同時驗證了唾液鏈球菌酸誘導(dǎo)啟動子pureⅠ能在變異鏈球菌中正常發(fā)揮功能,為今后研究菌斑生物膜中原位p H的動態(tài)變化提供了新方法。
[Abstract]:Objective to construct a low pH sensing system for Streptococcus mutans and to visually detect the pH of Streptococcus mutans in situ. Methods the promoter fragment of ure 鈪，

本文編號：2316137