本文關(guān)鍵詞：CXCR4調(diào)控口腔鱗狀細(xì)胞癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響腫瘤轉(zhuǎn)移的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《天津醫(yī)科大學(xué)》 2013年

CXCR4調(diào)控口腔鱗狀細(xì)胞癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響腫瘤轉(zhuǎn)移的實驗研究

王博  

【摘要】：第一部分CXCR4、β-catenin及EMT相關(guān)因子在口腔鱗癌中的表達(dá)及與臨床病理的關(guān)系 目的 檢測CXCR4、β-catenin及EMT相關(guān)因子在口腔鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與非轉(zhuǎn)移組中表達(dá)的差別,探討它們與臨床病理特征之間的關(guān)系及CXCR4與β-catenin及EMT相關(guān)因子表達(dá)的相關(guān)性。 方法 應(yīng)用免疫組化SP法檢測CXCR4、β-catenin及EMT相關(guān)因子在60例口腔鱗癌中的的表達(dá),應(yīng)用x2或Fish確切概率法分析各指標(biāo)與口腔鱗癌患者臨床病理之間關(guān)系,Spearman相關(guān)性分析CXCR4與β-catenin及EMT相關(guān)因子的相關(guān)性。 結(jié)果 1. CXCR4、N-cadherin、Twist、Snail在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)高于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組；而β-catenin、E-cadherin在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)組的表達(dá)低于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 2. CXCR4及Twist在中、低分化中高表達(dá),β-catenin的膜表達(dá)在T1期中高表達(dá)(P0.05)。 3. β-catenin的表達(dá)與CXCR4呈負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)為-0.497；Twist、Snail、 N-cadherin的表達(dá)與CXCR4呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為0.256、0.300、0.333(P0.05)。 結(jié)論 EMT在口腔鱗癌的淋巴轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用,CXCL12/CXCR4生物學(xué)軸可能作用于EMT的某個環(huán)節(jié),并調(diào)控其發(fā)生。 第二部分CXCR4調(diào)控口腔鱗狀細(xì)胞癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響腫瘤轉(zhuǎn)移的體外實驗研究 目的 利用RNAi技術(shù)沉默CXCR4在人舌癌細(xì)胞Tscca中的表達(dá),觀察干擾后Tscca細(xì)胞遷移侵襲能力、凋亡及經(jīng)典Wnt通路主要蛋白表達(dá)情況的變化。 方法 1.質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將CXCR4siRNA轉(zhuǎn)染至Tscca細(xì)胞,用RT-PCR檢測siRNA對CXCR4的抑制作用。 2.應(yīng)用劃痕實驗觀察CXCR4基因沉默后Tscca細(xì)胞遷移能力的變化。 3.應(yīng)用Transwell侵襲小室法觀察CXCR4基因沉默后Tscca細(xì)胞侵襲能力的變化。 4.應(yīng)用Annexin V檢測CXCR4基因沉默后Tscca細(xì)胞凋亡情況。 5. Western blot檢測CXCR4基因沉默后Tscca細(xì)胞中經(jīng)典Wnt信號通路中主要蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果 1. RT-PCR結(jié)果證明siRNA對CXCR4的表達(dá)有明顯抑制作用(P0.05)。 2.劃痕實驗證明CXCR4基因沉默后Tscca細(xì)胞遷移能力明顯下降。 3. Transwell侵襲實驗證明CXCR4基因沉默后Tscca細(xì)胞侵襲能力明顯降低(P0.001)。 4. Annexin V檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染CXCR4siRNA細(xì)胞凋亡率明顯升高(P0.05)。 5. Western blot發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染CXCR4siRNA后細(xì)胞MMP-2、MMP-9和N-cadherin表達(dá)水平降低,而E-cadherin蛋白表達(dá)水平升高,(P0.001)。 結(jié)論 1. CXCR4基因沉默能夠抑制人舌鱗癌細(xì)胞Tscca的遷移侵襲能力,CXCR4在舌鱗癌轉(zhuǎn)移中起重要作用。 2. CXCR4基因沉默能夠顯著抑制經(jīng)典Wnt通路中相關(guān)基因MMP-2、MMP-9和N-cadherin的表達(dá),而顯著提高E-cadherin的表達(dá),CXCR4可通過調(diào)控經(jīng)典Wnt通路參與舌鱗癌EMT的發(fā)生。 第三部分CXCR4調(diào)控口腔鱗狀細(xì)胞癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響腫瘤轉(zhuǎn)移的體內(nèi)實驗研究 目的 探討轉(zhuǎn)染CXCR4siRNA的人舌鱗癌細(xì)胞Tscca對裸鼠種植性腫瘤生長抑制及經(jīng)典Wnt通路相關(guān)因子表達(dá)情況的影響。 方法 1.建立裸鼠舌鱗癌皮下動物模型。 2.瘤內(nèi)注射lipofectamine2000和CXCR4siRNA混合物,動態(tài)觀察腫瘤生長情況,檢測經(jīng)典Wnt通通路成員等蛋白水平的表達(dá)變化。 結(jié)果 1.成功建立裸鼠舌鱗癌皮下動物模型。 2.和對照組相較,CXCR4siRNA治療組腫瘤生長抑制,腫瘤體積差別顯著；應(yīng)用免疫組化法檢測腫瘤標(biāo)本發(fā)現(xiàn),CXCR4表達(dá)水平敲除后,MMP-2、 MMP-9、N-cadherin蛋白表達(dá)水平降低,而E-cadherin蛋白表達(dá)水平升高。 結(jié)論 1.裸鼠皮下舌鱗癌模型應(yīng)用lipofectamine2000介導(dǎo)CXCR4siRNA治療,同樣敲除CXCR4表達(dá),抑制經(jīng)典Wnt通路的活性,上調(diào)E-cadherin表達(dá),與體外試驗結(jié)果一致。 2. CXCR4可成為抑制口腔鱗癌轉(zhuǎn)移的有效靶點。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.85
【目錄】：

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本文編號：225597