【摘要】：目的:濃縮生長(zhǎng)因子是2006年由Sacco發(fā)明用于促進(jìn)軟硬組織修復(fù)的富有多種特性的新一代血漿提取物,主要為組織工程提供生長(zhǎng)因子。但是膜狀的CGF不能在誘導(dǎo)骨組織再生手術(shù)中充當(dāng)合格的屏障膜,因?yàn)镃GF在體內(nèi)兩周內(nèi)降解。因此并不能為GBR提供足夠的時(shí)間和空間。本研究通過(guò)熱壓技術(shù)提高了膜狀CGF的抗溶解性,并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明其能否充當(dāng)合格的屏障膜,為下一步相應(yīng)的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:第一部分制備熱壓CGF:將離心完成的CGF取出后用干紗布?jí)焊煞湃虢?jīng)過(guò)紫外消毒的偏二乙烯薄膜(微波爐保鮮膜)后放于兩個(gè)已經(jīng)調(diào)好設(shè)定溫度的熱熨斗,加熱加壓一段時(shí)間,制成熱壓CGF。第二部分體外降解實(shí)驗(yàn):由6個(gè)男性成年志愿者在同一天每人采集5個(gè)CGF樣本。樣本根據(jù)加熱溫度和時(shí)間分為對(duì)照組(未處理CGF)實(shí)驗(yàn)組組A1(90℃加熱2秒)組B1(90℃加熱5秒)組C1(90℃加熱10秒)組D1(120℃加熱2秒)。將樣本放于經(jīng)過(guò)消毒的人工唾液當(dāng)中并置于37℃水浴中,記錄最后降解所需天數(shù)。所有數(shù)據(jù)結(jié)果錄入spss22.0進(jìn)行分析,使用單因素方差分析方法并進(jìn)一步采用Tukey HSD檢驗(yàn)行組間兩兩比,P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。體內(nèi)降解試驗(yàn)將12只大白兔分為4組。全麻后在腹部植入CGF膜和熱壓CGF.分別在第1,2,3,4周處死。將CGF膜連同鄰近的結(jié)締組織一同取材后,進(jìn)行HE以及Masson染色。第三部分生物活性實(shí)驗(yàn):6名男志愿者同一日采集5個(gè)樣本。將對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組組A2(90℃加熱2秒)組B2(90℃加熱5秒)組C2(90℃加熱10秒)組D2(120℃加熱2秒)放入離心管后加入5ml α-MEM培養(yǎng)液中置于37℃恒溫箱中使生長(zhǎng)因子釋放。在1,7,14,21天抽取其5ml培養(yǎng)液,并更換新5ml培養(yǎng)液。采集的培養(yǎng)液置于-80℃中保存。最后使用ELISA測(cè)量PDGF-AB以及TGF-beta的含量。數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析并進(jìn)一步采用Tukey HSD檢驗(yàn)行組間兩兩比較,P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。第四部分GBR手術(shù):8只新西蘭大白兔從頸靜脈采血離心后熱壓獲得CGF屏障膜。全麻后,消毒術(shù)區(qū),剪毛后沿頭皮矢狀切開(kāi)4cm,分離表皮肌肉骨膜。使用6mm直徑環(huán)鋸鉆在左右兩側(cè)對(duì)稱制備6mm骨缺損。制備完成后放置β-TCP植骨材料行常規(guī)GBR。熱壓組使用熱壓屏障膜,膠原膜組使用Lyoplant(?)作為屏障膜,對(duì)照組只放β-TCP,空白組不做任何處理。術(shù)后每天給予抗感染治療。在術(shù)后第6周,動(dòng)物安樂(lè)死。用牙科高速手機(jī)分離顱骨,并將采集后的標(biāo)本放于4%多聚甲醛固定,并進(jìn)行Micro-CT及組織形態(tài)分析。所有數(shù)據(jù)結(jié)果錄入spss22.0進(jìn)行分析,使用單因素方差分析方法并進(jìn)一步采用Tukey HSD檢驗(yàn)行組間兩兩比,P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:1制備熱壓CGF隨著加熱溫度升高,在時(shí)間一定的情況下CGF膜由淡黃變白;在加熱溫度一定的條件下,時(shí)間越長(zhǎng)CGF膜由淡黃變白。在90℃加熱10秒和120℃加熱2秒的條件下CGF膜發(fā)生皺縮變硬。2降解實(shí)驗(yàn)體外降解實(shí)驗(yàn):對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組A1,組B1,組C1,組D1標(biāo)本所需降解時(shí)間有差異。體內(nèi)降解實(shí)驗(yàn):CGF膜在體內(nèi)2周內(nèi)完全降解,熱壓CGF膜可以保持相對(duì)完整的形態(tài)達(dá)3周以上且熱壓處理后生物相容性并沒(méi)有喪失。3 ELISA實(shí)驗(yàn)對(duì)照組在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上都與實(shí)驗(yàn)組均有顯著性差異。不論實(shí)驗(yàn)組還是對(duì)照組都在在第一天釋放了大量的生長(zhǎng)因子。熱壓處理90℃處理2s組累計(jì)釋放了相當(dāng)于正常CGF 52.20%的PDGF-AB以及62.3%的TGF-β。90℃處理5s組累計(jì)釋放了相當(dāng)于正常CGF 45.00%的PDGF-AB以及47.6%的TGF-β。90℃處理10s組累計(jì)釋放了相當(dāng)于正常CGF 13.9%的PDGF-AB以及21.3%的TGF-β。120℃處理2s組累計(jì)釋放了相當(dāng)于正常CGF 10.6%的PDGF-AB以及21.4%的TGF-β。4 GBR術(shù)后成骨情況空白組:缺損區(qū)主要由纖維結(jié)締組織構(gòu)成,缺損周圍可見(jiàn)少量新骨生成但未見(jiàn)明顯成骨反應(yīng)。對(duì)照組:缺損區(qū)成骨活躍,可見(jiàn)缺損周圍及遠(yuǎn)離缺損處均有成骨,但在缺損處可見(jiàn)大量結(jié)締組織侵入膠原膜組:與空白組相比纖維結(jié)締組織侵入較少,在手術(shù)邊界的植骨材料周圍可見(jiàn)新骨形成。在遠(yuǎn)離手術(shù)邊界處可觀察到鈣化骨形成。在植骨材料空泡中可以觀察到破骨細(xì)胞包繞植骨材料,植骨材料周圍形成薄的編織骨,可見(jiàn)形成血管。熱壓組:與空白組相比纖維結(jié)締組織侵入較少,可在手術(shù)邊界和遠(yuǎn)離手術(shù)邊界處觀察到鈣化骨組織形成.而且可在植骨材料周圍觀察到大量的成骨活性,可見(jiàn)大梁編織骨形成。結(jié)論:1熱壓CGF可以顯著延長(zhǎng)CGF的降解時(shí)間2熱壓CGF具有良好的生物相容性3熱壓處理的CGF生物活性下降4熱壓CGF可以充當(dāng)GBR手術(shù)中的屏障膜
[Abstract]:OBJECTIVE: Concentrated growth factor (CGF) is a new generation of plasma extract invented by Sacco in 2006 to promote soft and hard tissue repair. It mainly provides growth factors for tissue engineering. But membrane-like CGF can not act as a qualified barrier membrane in induced bone regeneration surgery because CGF can not be degraded within two weeks in vivo. In order to provide enough time and space for GBR, this study improved the solubility of membranous CGF by hot pressing technology, and proved whether it can act as a qualified barrier membrane through animal experiments, providing experimental basis for the next corresponding clinical treatment. A hot-pressed CGF was prepared by adding ultraviolet-disinfected vinylidene dioxide film (microwave oven film) to two hot irons with set temperature and pressing for a period of time. Group A1, group B1, group C1, group C1, group D1, group D1, group C1, group C1, group C1, group C1, group D1, group D1, group D1, group C1, group B1, group B1, group B1, group C1, group C1, group D1, group D1, group D1, group CGF, group A1 (untreated group CGF), group A1, group A1 (untreated group CGF), group A1, group A1 (untreated group CGF), group A1 (untreated group Twelve rabbits were divided into four groups by in vivo degradation test. After general anesthesia, CGF membranes were implanted into abdomen and hot-pressed CGF were sacrificed at week 1, 2, 3 and 4, respectively. CGF membranes were taken together with adjacent connective tissue and stained with HE and Masson. Sexual experiment: Six male volunteers collected five samples on the same day. Control group A2 (heating at 90 for 2 seconds) group B2 (heating at 90 for 5 seconds) group C2 (heating at 90 for 10 seconds) group D2 (heating at 120 for 2 seconds) were put into a centrifugal tube and added to a 5 ml alpha-MEM culture medium in a 37 C thermostat to release the growth factor. The data were analyzed by one-way ANOVA and further compared by Tukey HSD test. P 0.05 was statistically significant. Part IV GBR operation: 8 New Zealand white rabbits were centrifuged from jugular vein. After general anesthesia, the epidermal muscles and periosteum were dissected by sagittal incision along the scalp for 4 cm. 6 mm diameter trephine was used to prepare 6 mm bone defect symmetrically on the left and right sides. After 6 weeks, the animals were euthanized. The skulls were separated by dental high-speed mobile phone and fixed with 4% paraformaldehyde. All the data were entered into SPSS 22.0 for analysis. The skulls were then fixed with 4% paraformaldehyde. The factor variance analysis and Tukey HSD test showed that there was a significant difference between the two groups. Results: 1. The CGF films prepared by hot pressing changed from yellowish to white with the increase of heating temperature and time, and the CGF films changed from yellowish to white with the increase of heating temperature and heating temperature. The degradation time of CGF membrane in vitro was different between control group and experimental group A1, group B1, group C1, and group D1. In vivo degradation experiment: CGF membrane was completely degraded within 2 weeks in vivo, and the biocompatibility of CGF membrane could be maintained for more than 3 weeks after hot pressing treatment. There was no loss. 3 There was significant difference between the control group and the experimental group at each time point. Both the experimental group and the control group released a lot of growth factors on the first day. PDGF-AB equivalent to 45.00% of normal CGF and 47.6% of TGF-beta.90 6550 In the control group, there were active osteogenesis in the defect area, and osteogenesis in the defect area and far away from the defect, but a large number of connective tissue invaded the collagen membrane in the defect area. New bone formation can be seen. Calcified bone formation can be observed far from the surgical boundary. Osteoclasts wrapped around the graft material can be observed in the vacuole of the graft material. Thin woven bone around the graft material can be seen to form blood vessels. The fibrous connective tissue invasion is less in the hot pressing group than in the blank group, and can be seen at the surgical boundary and far away from the surgical boundary. The formation of calcified bone tissue was observed at the site of the graft, and a large amount of osteogenic activity was observed around the graft material. The formation of trabecular braided bone was observed. Conclusion: 1 Hot pressing CGF can significantly prolong the degradation time of CGF; 2 Hot pressing CGF has good biocompatibility; 3 Hot pressing CGF has good biocompatibility; 4 Hot pressing CGF can act as a barrier membrane in GBR surgery.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R783.1

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本文編號(hào)：2231263