【摘要】：目的:在新型種植體“鈦骨”表面固定殼聚糖涂層,并通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)此涂層對(duì)雪旺細(xì)胞早期粘附、增殖、分泌的影響。方法:通過(guò)交聯(lián)劑將殼聚糖固定在“鈦骨”表面,以制成“鈦骨”表面的殼聚糖涂層。將實(shí)驗(yàn)分為3組:以單純細(xì)胞組作為空白對(duì)照組(Blank),以普通鈦骨組(Tixos)作為陰性對(duì)照組,以殼聚糖涂層組(Tixos-CS)作為實(shí)驗(yàn)組。通過(guò)掃描電鏡(SEM)觀察實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組材料的表面結(jié)構(gòu);利用懸滴法檢測(cè)兩組材料的接觸角以確定其親水性;通過(guò)拉力測(cè)試儀檢測(cè)殼聚糖涂層與鈦骨表面的結(jié)合強(qiáng)度;通過(guò)體外浸泡實(shí)驗(yàn)組材料,每日稱(chēng)重,以測(cè)量其降解所需的時(shí)間。將材料與雪旺細(xì)胞共培養(yǎng),在12小時(shí)時(shí)通過(guò)DAPI染色的方法定性檢測(cè)細(xì)胞在材料表面粘附的量;在24小時(shí)時(shí)通過(guò)掃描電鏡觀察粘附與材料表面的細(xì)胞的形態(tài);于第1天、3天和5天通過(guò)CCK-8檢測(cè)材料對(duì)雪旺細(xì)胞增殖的影響;細(xì)胞與材料共培養(yǎng)后每日進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,直觀的觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài);在1天、2天和3天通過(guò)ELISA檢測(cè)雪旺細(xì)胞分泌NGF和GDNF的情況,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1.通過(guò)掃描電鏡觀察可見(jiàn)殼聚糖顆粒大小約為2-5μm左右,呈長(zhǎng)方形或多邊形,顆粒之間排列緊密,緊緊附著于鈦骨表面;2.殼聚糖涂層組(Tixos-CS)材料表面接觸角小于90°,表現(xiàn)為親水性;3.通過(guò)拉力測(cè)試檢測(cè),殼聚糖涂層能夠穩(wěn)定的粘附在鈦骨的表面;4.降解實(shí)驗(yàn)反映了涂層能夠勻速緩慢的降解,大概在第8天完成降解;5.人雪旺細(xì)胞與兩組材料共培養(yǎng)12小時(shí)DAPI染色結(jié)果顯示殼聚糖涂層組(Tixos-CS)細(xì)胞粘附數(shù)量多;6.共培養(yǎng)24小時(shí)后通過(guò)掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)可見(jiàn)殼聚糖涂層組(Tixos-CS)材料表面的細(xì)胞伸出的偽足更多更長(zhǎng),細(xì)胞伸展更充分;7.CCK-8檢測(cè)結(jié)果,在第1天、3天和5天殼聚糖涂層組(Tixos-CS)吸光度值均高于鈦骨組(Tixos);8.繪制生長(zhǎng)曲線可見(jiàn)鈦骨組(Tixos)細(xì)胞傳代后1-2天為生長(zhǎng)緩滯期,3-6天為快速生長(zhǎng)期,6天以后進(jìn)入平頂期;殼聚糖涂層組(Tixos-CS)第1天為生長(zhǎng)緩滯期,2-5天為快速生長(zhǎng)期,5天以后進(jìn)入平頂期;9.流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期,在第1天、3天,殼聚糖涂層組(Tixos-CS)中處于S+G2/M期的雪旺細(xì)胞百分比較鈦骨組(Tixos)增加;10.ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,第1天、2天和3天,殼聚糖涂層組(Tixos-CS)分泌的NGF和GDNF均高于鈦骨組(Tixos)。結(jié)論:1.在鈦骨表面固定的殼聚糖涂層具有一定的空間立體結(jié)構(gòu),涂層具有一定的機(jī)械強(qiáng)度,具有一定的穩(wěn)定性,可緩慢降解。2.殼聚糖涂層可以促進(jìn)雪旺細(xì)胞的粘附和增殖,并且能夠促進(jìn)雪旺細(xì)胞分泌NGF和GDNF
[Abstract]:Aim: to fix the chitosan coating on the surface of titanium implant, and to investigate the effect of chitosan coating on the early adhesion, proliferation and secretion of Schwann cells by cell experiments in vitro. Methods: chitosan was immobilized on the surface of titanium bone by crosslinking agent to make chitosan coating on the surface of titanium bone. The experiment was divided into three groups: pure cell group as blank control group, ordinary titanium bone group as negative control group and chitosan coated group as experimental group. The surface structure of the experimental group and the negative control group was observed by scanning electron microscope (SEM), the contact angle of the two groups was determined by hanging drop method, the binding strength of the chitosan coating and the titanium bone surface was measured by tensile force tester. The materials of experimental group were soaked in vitro and weighed daily to measure the time required for degradation. After co-culture with Schwann cells, the quantity of cell adhesion on the surface of the material was detected qualitatively by DAPI staining at 12 hours, and the morphology of the cells on the surface of the material was observed by scanning electron microscope at 24 hours. The effect of CCK-8 on the proliferation of Schwann cells was detected on the 1st day and 5th day, the cell count was carried out daily after co-culture with the material, the cell growth curve was drawn, and the growth state of the cells was observed intuitively. The secretion of NGF and GDNF in Schwann cells was detected by Elisa on day 1, day 2 and day 3, and analyzed statistically. Result 1. Scanning electron microscopy showed that the size of chitosan particles was about 2-5 渭 m, which was rectangular or polygon, closely arranged between particles, and tightly attached to the surface of titanium bone. The surface contact angle of chitosan coated group (Tixos-CS) is less than 90 擄, which is hydrophilic. The results of tensile test showed that the chitosan coating could adhere to the surface of titanium bone steadily. The degradation experiment showed that the coating could degrade at a uniform rate and slowly, and the degradation was completed on the 8th day. Human Schwann cells co-cultured with the two groups for 12 hours DAPI staining results showed that chitosan coated group (Tixos-CS) cell adhesion number of more than 6. After 24 hours of co-culture, the morphology of cells on the surface of chitosan coated group (Tixos-CS) was observed by scanning electron microscope. The absorbance values of the chitosan coated group (Tixos-CS) were higher than that of the titanium bone group (Tixos) on the 1st and 5th day. The growth curve showed that the growth retardation of Tixos cells was from 3 to 6 days after passage, and that of the chitosan coated group (Tixos-CS) from the first day to the first day was the slow growth period (2-5 days), the second day was the rapid growth period (5 days), and the latter was 9 days after the flattened stage. The growth curve showed that the growth retardation period of Tixos group was 3 to 6 days, and that of the chitosan coated group (Tixos-CS) was 2 to 5 days after rapid growth. The percentage of Schwann cells in the S G 2 / M phase in the chitosan coated group (Tixos-CS) was significantly higher than that in the titanium bone group (Tixos). The results of Elisa showed that the percentage of Schwann cells in the chitosan coated group (Tixos-CS) was significantly higher than that in the Tixos group. Both NGF and GDNF secreted by chitosan coated group (Tixos-CS) were higher than those of titanium bone group (Tixos). Conclusion 1. The chitosan coating fixed on the surface of titanium bone has a certain spatial stereoscopic structure, the coating has a certain mechanical strength, a certain stability, and can be degraded slowly. Chitosan coating can promote the adhesion and proliferation of Schwann cells, and promote the secretion of NGF and GDNF by Schwann cells.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R783.6

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 唐慧安,蘆小林,王成兵,安建平;殼聚糖在醫(yī)藥學(xué)方面的研究進(jìn)展[J];天水師范學(xué)院學(xué)報(bào);2005年02期

2 蔣寅;翟青;郭樺;譚輝;郭祀遠(yuǎn);;殼聚糖對(duì)鋅(鐵)離子的配位特性及其配合物的應(yīng)用[J];現(xiàn)代食品科技;2007年09期

3 羅曄;唐大川;羅海燕;葉苗;徐佳;;殼聚糖在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用研究[J];海峽藥學(xué);2009年05期

4 陽(yáng)元娥,羅發(fā)興;殼聚糖及其衍生物在醫(yī)藥上的應(yīng)用[J];上海生物醫(yī)學(xué)工程;2001年03期

5 李明春,辛梅華,王瓊,姚康德;殼聚糖膜及其改性膜的藥物釋放動(dòng)力學(xué)研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2001年01期

6 姚子昂,韓寶芹,劉萬(wàn)順,王文正,玄龍德;不同分子量殼聚糖膜性質(zhì)的研究[J];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào);2002年03期

7 邢桂榮,王敬湘;殼聚糖在醫(yī)藥領(lǐng)域的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥業(yè);2003年08期

8 李潔,李曉陵;殼聚糖在眼科臨床中的應(yīng)用[J];中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐;2004年10期

9 王令充;陳西廣;劉成圣;孟祥紅;劉晨光;賀軍;于樂(lè)軍;倪思亮;;醫(yī)用殼聚糖膜的性能及用途[J];中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年02期

10 董巖;張群正;李小玲;管偉偉;;殼聚糖在藥物載體中的應(yīng)用進(jìn)展[J];現(xiàn)代食品科技;2007年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 李玉紅;趙孔雙;宋超;韓英;;殼聚糖膜對(duì)幾種有機(jī)物的吸附和釋放過(guò)程的實(shí)時(shí)介電監(jiān)測(cè)[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十屆膠體與界面化學(xué)會(huì)議論文摘要集[C];2004年

2 曾淼;張廷安;呂國(guó)志;豆志河;劉燕;牛麗萍;趙秋月;王穎;;殼聚糖在冶金中的應(yīng)用[A];第十七屆（2013年）全國(guó)冶金反應(yīng)工程學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集（上冊(cè)）[C];2013年

3 史新元;譚天偉;;新型殼聚糖接觸鏡材料的研究[A];2002年材料科學(xué)與工程新進(jìn)展（下）——2002年中國(guó)材料研討會(huì)論文集[C];2002年

4 蔡萱;陳黎;沈新宇;童華;;殼聚糖凝膠有機(jī)模板對(duì)碳酸鈣晶型和聚集態(tài)的調(diào)控研究[A];第七屆中國(guó)功能材料及其應(yīng)用學(xué)術(shù)會(huì)議論文集（第4分冊(cè)）[C];2010年

5 李若慧;程艷玲;;殼聚糖在新型藥物制劑中的作用[A];2008全國(guó)功能材料科技與產(chǎn)業(yè)高層論壇論文集[C];2008年

6 楊媛;李立華;容建華;周長(zhǎng)忍;;新型生物降解交聯(lián)劑的制備及其在殼聚糖交聯(lián)膜中的應(yīng)用[A];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第六次會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2004年

7 李映苓;唐智杰;趙逸云;李學(xué)習(xí);;有序殼聚糖膜的制備及其對(duì)巖白菜素滲透性能研究[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第四屆有機(jī)化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

8 胡瑜;陳浩凡;;殼聚糖衍生物的應(yīng)用進(jìn)展[A];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程進(jìn)展——2007中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程聯(lián)合學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2007年

9 葉文婷;陳亞芍;潘欣;;利用陰極液相等離子體技術(shù)制備鈦基含鈣磷的殼聚糖膜[A];第十四屆全國(guó)等離子體科學(xué)技術(shù)會(huì)議暨第五屆中國(guó)電推進(jìn)技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)會(huì)議摘要集[C];2009年

10 王靖;盧欣;池萍;劉昌勝;;殼聚糖／聚肽共混膜的制備表征及性能研究[A];2005年上海市醫(yī)用生物材料研討會(huì)論文匯編[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 聶柳慧 韓永生;用殼聚糖膜作保鮮包裝材料的研究[N];中國(guó)包裝報(bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 黎小平;殼聚糖對(duì)乙酸誘導(dǎo)的直腸損傷和痔瘺切除術(shù)后創(chuàng)面的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張聰璐;離子液體中殼聚糖改性及改性材料的吸附性能研究[D];東北大學(xué);2014年

3 臧圣奇;生物降解復(fù)合材料聯(lián)合頜骨骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)不同類(lèi)型骨缺損修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 趙亮;殼聚糖及其衍生物作為藥物載體促骨再生作用的研究[D];吉林大學(xué);2016年

5 李蕾;靜電紡絲殼聚糖納米纖維膜的制備及對(duì)六價(jià)鉻離子吸附的研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院(過(guò)程工程研究所);2016年

6 馬士卿;殼聚糖不對(duì)稱(chēng)引導(dǎo)骨組織再生膜的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

7 翟曉娜;殼聚糖納米硒體系的制備及其物化特性和生物活性的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

8 姜瓊;新型復(fù)合殼聚糖水凝膠傷口敷料的制備及性能評(píng)價(jià)[D];安徽大學(xué);2017年

9 屈建;基于金屬離子配位作用增強(qiáng)殼聚糖三維材料的研究[D];浙江大學(xué);2011年

10 曹文靈;殼聚糖用于周?chē)窠?jīng)修復(fù)的基本科學(xué)問(wèn)題研究[D];清華大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 石偉健;殼聚糖/明膠基復(fù)合材料構(gòu)建與性質(zhì)研究[D];華南理工大學(xué);2015年

2 唐陽(yáng);季銨化殼聚糖基碘生物材料的制備及性能表征[D];上海工程技術(shù)大學(xué);2015年

3 姚藍(lán);殼聚糖—泛影葡胺微球的制備與性能研究[D];華南理工大學(xué);2015年

4 夏婷;新型殼聚糖載藥系統(tǒng)的制備及性能的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

5 巴格那;可注射性納米殼聚糖骨形成蛋白-2復(fù)合體用于大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎的效果研究[D];蘭州大學(xué);2015年

6 何瑩;靜電紡殼聚糖/聚己內(nèi)酯納米纖維膜對(duì)骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

7 孫賀春;新型抗菌材料CS-g-PEI的合成及性能研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

8 李曄;N-琥珀酰殼聚糖載siRNA抗腫瘤作用研究[D];南京理工大學(xué);2015年

9 覃王;殼聚糖基納米纖維多孔膜的制備及其對(duì)Cu~(2+)和Pb~(2+)吸附性能研究[D];福建師范大學(xué);2015年

10 剛曉敏;載藥的多尺度仿骨結(jié)構(gòu)殼聚糖/磷灰石復(fù)合材料[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2138895