本文選題：髁突軟骨細(xì)胞 + 雌二醇��； 參考：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：[目的]髁突軟骨細(xì)胞(mandibular condylar chondrocyte,MCC)的增殖、分化是髁突適應(yīng)性改建的基礎(chǔ)。研究表明,髁突軟骨是雌激素作用的靶器官,雌激素可與相應(yīng)受體特異性結(jié)合,從而發(fā)揮一系列生物學(xué)效應(yīng)。雌激素對MCC增殖分化的影響及作用機(jī)制尚不清楚,因此,本課題通過建立SD大鼠MCC體外培養(yǎng)模型,評估雌二醇(Estradiol,E2)對MCC增殖分化的影響,為研究E2對MCC的生物學(xué)特性及顳下頜關(guān)節(jié)疾病的發(fā)病機(jī)制提供一定的理論依據(jù)。[方法]分離出生1-3d的SD大鼠雙側(cè)髁突軟骨,采用胰酶和Ⅱ型膠原酶聯(lián)合消化的方法獲取MCC進(jìn)行體外培養(yǎng),建立MCC體外培養(yǎng)模型。通過倒置顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,采用甲苯胺藍(lán)染色和Ⅱ型膠原免疫組化染色對MCC進(jìn)行鑒定;取第 2 代 MCC,加入 10-12mol/L、10-9mol/L、10-6mol/L 的 E2(設(shè)置添加PBS為空白對照組),MTT法及流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)分別檢測在24h、48h、72h,MCC的增殖及細(xì)胞周期的變化;運(yùn)用RT-PCR技術(shù)檢測不同濃度E2誘導(dǎo)72h后,MCC中 Sox9、Co12αl、Runx2mRNA 的表達(dá)變化。[結(jié)果]1.原代MCC約24h貼壁完成,呈三角形、多角形,7d長滿瓶底,單層呈“鋪路石”狀。傳代后,細(xì)胞形態(tài)均一,貼壁時(shí)間縮短,約5d可長滿瓶底。傳至第4代以后,成纖維樣細(xì)胞比例逐漸增加,細(xì)胞開始出現(xiàn)去分化現(xiàn)象;傳至第6-7代,細(xì)胞完全去分化,呈“樹枝”狀、“魚群”狀。第2代MCC生長曲線呈S型,甲苯胺藍(lán)染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色均呈陽性。2.不同濃度 E2 作用 MCC24h、48h、72h,10-12mol/L 及 10-9mol/LE2 促進(jìn) MCC的增殖,以10-9mol/L促進(jìn)作用最強(qiáng),10-6mol/LE2抑制MCC的增殖,并且促進(jìn)/抑制作用隨時(shí)間的延長而更加顯著。作用24h,隨E2濃度的增高,S期及G2/M期細(xì)胞比例逐漸增高,GO/G1期細(xì)胞比例逐漸降低;隨作用時(shí)間的增長,S期,G2/M期比例逐漸降低,G0/G1期比例漸增高,發(fā)生GO/G1期阻滯。3.不同濃度 E2 作用 72h,MCC Sox9mRNA 的表達(dá)量,10-9mol/L 組及 10-12mol/L組高于對照組,10-6mol/L組Sox9 mRNA表達(dá)量低于對照組。其中,10-9mol/L組與對照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其余兩組與對照組相比,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Col2α1 mRNA的表達(dá)量,實(shí)驗(yàn)組與對照組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Runx2 mRNA的表達(dá)量,10-9mol/L和10-12mol/L組均低于對照組,10-6mol/L組高于對照組。其中,10-9mol/L組與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余兩組與對照組相比,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。[結(jié)論]1.應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)方法建立MCC體外培養(yǎng)模型成功有效。從原代細(xì)胞純化及防止細(xì)胞去分化角度考慮,宜選用第2代或第3代MCC。2.E2對MCC的增殖具有濃度和時(shí)間效應(yīng)關(guān)系,其機(jī)制與E2對MCC細(xì)胞周期的調(diào)控有關(guān)。3.E2通過調(diào)節(jié)Sox9及Runx2的表達(dá)介導(dǎo)MCC的成熟分化;適宜濃度的E2對維持軟骨細(xì)胞表型具有一定意義;隨濃度的增加,可能對促進(jìn)MCC成熟肥大化起到一定作用。
[Abstract]:[objective] the proliferation and differentiation of condylar chondrocyteal cells (mandibular condylar chondrocyteus) are the basis of condylar adaptive remodeling. It has been shown that condylar cartilage is the target organ of estrogen, and estrogen can bind to the corresponding receptor, thus exerting a series of biological effects. The effect of estrogen on the proliferation and differentiation of MCC is not clear. Therefore, the effect of estradiol E 2 on the proliferation and differentiation of MCC was evaluated by establishing a rat model of MCC culture in vitro. It provides a theoretical basis for studying the biological characteristics of MCC and the pathogenesis of temporomandibular joint disease. [methods] bilateral condylar cartilage was isolated from SD rats born 1 to 3 days. MCC was obtained by combined digestion of trypsin and collagenase 鈪，

本文編號：2074611