本文關鍵詞：羊膜干細胞源性髁突軟骨細胞特征性鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《遵義醫(yī)學院》 2016年

羊膜干細胞源性髁突軟骨細胞特征性鑒定

楊曄  

【摘要】：目的:采用Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng),誘導人羊膜間充質干細胞(HAMSCs)向髁突軟骨樣細胞分化,建立軟骨細胞種子庫,為顳下頜關節(jié)骨關節(jié)病的治療探索新的途徑。方法:1.采用機械分離和二步酶消化法分離乳兔髁突軟骨細胞(MCCs),差速貼壁法純化細胞,鏡下觀察細胞形態(tài)學特征,HE染色、甲苯胺藍染色、Ⅱ型膠原免疫組化染色鑒定MCCs。2.MCCs和HAMSCs以4:1的比例分別置于Transwell培養(yǎng)皿的上、下室,誘導培養(yǎng)7d、14d、21d,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、甲苯胺藍染色、Ⅱ型膠原免疫組化染色鑒定誘導后細胞,并計算平均陽性染色面積。結果:1.原代MCCs細胞為短梭、多角形,呈鋪路石狀生長,并逐漸聚集成簇,細胞生長周期約10d;二代MCCs細胞呈多角形、三角形,細胞質紫紅染,細胞核藍染,呈橢圓形或圓形,可見1-2個核仁;甲苯胺藍染色見細胞質均勻藍染,可見藍紫色異染顆粒,細胞核深藍染;Ⅱ型膠原免疫組化染色可見細胞質棕褐色異染顆粒,細胞核復染后呈深藍染;生長周期縮短為5d。2.Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)中,誘導組共培養(yǎng)7d,下層細胞仍呈長梭狀,甲苯胺藍和Ⅱ型膠原免疫組化染色偶見異染顆粒;共培養(yǎng)14d,下層細胞形態(tài)多樣,甲苯胺藍染色和Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色可見細胞內異染顆粒逐漸增多;共培養(yǎng)21d,下層細胞呈多角形,類MCCs樣形態(tài),甲苯胺藍染色和Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色呈陽性;對照組細胞未見異染顆粒。3.Ⅱ型膠原平均陽性染色面積,MCCs組為35.8%,誘導組下層細胞平均陽性染色面積隨共培養(yǎng)時間延長逐漸增加,至21天達到33.6%,與MCCs組比較無明顯差異(P0.05);對照組下層細胞平均陽性染色面積僅為1.4%,與MCCs組和誘導組比較有明顯差異(P0.05)。結論:1.通過兩次酶消化法可以獲得高質量的MCCs。2.應用Transwell共培養(yǎng)體系可以誘導HAMSCs向MCCs分化。3.應用Transwell共培養(yǎng)體系誘導HAMSCs向軟骨樣細胞的最佳共培養(yǎng)時間為21d。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R782
【目錄】：

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  本文關鍵詞：羊膜干細胞源性髁突軟骨細胞特征性鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：205126