本文關(guān)鍵詞：針對變異鏈球菌的人源STAMP（C16LL-37）的生物學特性，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘭州大學》 2016年

針對變異鏈球菌的人源STAMP（C16LL-37）的生物學特性

車春曉  

【摘要】：齲病是最為常見的口腔慢性進行性感染性的疾病。變異鏈球菌(Streptococcus mutans,s.mutans)為齲病主要的致病菌。因此,減少變異鏈球菌的增殖對阻斷齲病的發(fā)生及發(fā)展具有重大意義。特異性靶向抗菌肽(Specifically targeted antimicrobial peptides,STAMPs)由靶向定位區(qū)域(KH)、抗菌區(qū)域(AMP)和(或)連接體區(qū)域組成,其可通過KH區(qū)域增高目標細菌表面抗菌肽的濃度,使其殺傷效力及動態(tài)性能全面提升。至今,LL-37是人體內(nèi)僅被發(fā)現(xiàn)的一種具備α-螺旋結(jié)構(gòu)的Cathelicidins抗菌肽,廣泛分布于皮膚、口腔、精液及創(chuàng)傷部位等,具備極高的生物安全性,且不易導致病原菌發(fā)生抗性突變,為新一種抗生素設(shè)計及合成的理想原料。此外,已有研究者以變異鏈球菌(非)依賴感受態(tài)刺激肽(Competence stimulating peptide,CSP)C端16個氨基酸序列(TFFRLFNRSFTQALGK)即CSPC16作為STAMP的KH區(qū)域,成功地合成了具備靶向特異性的新型抗生素。因此,本研究擬以變異鏈球菌CSP的C端16個氨基酸序列(CSPC16)為KH區(qū)域,以人源抗菌肽LL-37的整條氨基酸序列為AMP區(qū)域,兩者通過連接體(-GGG-)連接,合成人源特異性靶向抗菌肽C16LL-37并對其相關(guān)生物學特性進行研究。方法:通過標準固相合成技術(shù)(Fmoc保護法)合成人源抗菌肽LL-37、CSPC16(變異鏈球菌感受態(tài)刺激肽(Competence stimulating peptide,CSP)C端16個氨基酸組成的多肽)及二者的重組多肽C16LL-37;以LL-37、CSPC16及其它四種細菌(Actinomyces viscosus,A.viscosus ATCC 15987、Escherichia coli,E.coli ATCC25922、Staphylococcus aureus,S.aureus ATCC 4356、Lactobacillus acidophilus,L.acidophilus ATCC 25923)為對照組,采用平板菌落計數(shù)法檢測C16LL-37的抗菌活性及其對S.mutans的靶向性;通過掃描電子顯微鏡(Scanning electron microscope,SEM)觀察C16LL-37作用后S.mutans的細胞形態(tài)學變化。結(jié)果:1、C16LL-37的最小抗菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC)為16μM,最小殺菌濃度(Minimum bactericidal concentration,MBC)為64μM;2、以濃度為64μM的C16LL-37作用于S.mutans 30mins時,細菌存活率為3.46%,60、120mins時細菌存活率為0,其它四種細菌于三個時間點的存活率均大于60%(與S.mutans相比有差異,P0.05);3、利用SEM觀察,C16LL-37(32μM)作用后,部分S.mutans出現(xiàn)形態(tài)不規(guī)則改變、胞膜粗糙、胞漿外溢或細胞裂解現(xiàn)象。結(jié)論:本研究合成(標準固相合成法)的特異性靶向抗菌肽C16LL-37對S.mutans具備顯著的靶向特異性及較強的抗菌活性;C16LL-37可通過損傷S.mutans細胞膜,使細胞內(nèi)物質(zhì)溢出,導致其裂解死亡。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R781.1
【目錄】：

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