本文選題：牙周炎 + 脂肪細(xì)胞��； 參考：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的模擬牙周炎致病因子對(duì)脂肪細(xì)胞致炎的過(guò)程,在體外培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞、誘導(dǎo)其向脂肪細(xì)胞分化,以牙齦卟啉單胞菌脂多糖Pg-LPS作用于脂肪細(xì)胞,觀察Pg-LPS對(duì)脂肪內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)標(biāo)志物GRP78、XBP1s的mRNA表達(dá)水平的影響,研究Pg-LPS對(duì)脂肪細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)的影響,從而為進(jìn)一步揭示牙周炎、脂肪組織炎癥,與胰島素抵抗和糖尿病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系奠定理論基礎(chǔ),和為臨床上治療、預(yù)防提供理論依據(jù)。方法1、誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化,油紅o染色鑒定細(xì)胞分化狀態(tài);2、將脂肪細(xì)胞分為空白對(duì)照組,LPS處理組兩組;空白對(duì)照組:加入等體積0.8%的牛血清白蛋白的無(wú)血清DEME培養(yǎng)液,7個(gè)時(shí)間點(diǎn)0,30min,1h,2h、4h、8h、12h取樣;LPS處理組:又分為4組,分別加入含有50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml 4個(gè)作用濃度的Pg-LPS和0.8%的牛血清白蛋白的無(wú)血清DEME培養(yǎng)液,分別處理細(xì)胞7個(gè)時(shí)間點(diǎn)0,30min,1h,2h、4h、6h、12h取樣;real-time PCR檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)標(biāo)志物GRP78、XBP1s的mRNA表達(dá)水平;結(jié)果1、誘導(dǎo)分化14d后,細(xì)胞在鏡下均可看到明顯脂滴,3T3-l1前脂肪細(xì)胞基本分化為脂肪細(xì)胞;2、加Pg-LPS 12小時(shí)后,對(duì)照組除個(gè)別死亡細(xì)胞漂浮未見明顯細(xì)胞凋亡情況,50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組各組均出現(xiàn)小面積細(xì)胞的凋亡細(xì)胞漂浮和團(tuán)塊集聚的情況;3、0-12h,對(duì)照組GRP78 mRNA表達(dá)水平均維持在較為恒定的基線水平;而實(shí)驗(yàn)組GRP78表達(dá)水平各濃度實(shí)驗(yàn)組均在加Pg-LPS干預(yù)早期,均出現(xiàn)比基線水平明顯的抬高,而到達(dá)峰值后回落至靠近基線水平上下:50ng/ml組在作用30min后表達(dá)水平逐步抬高,在1h時(shí)表達(dá)量達(dá)到峰值,于靠近2h時(shí)間點(diǎn)回落至接近基線水平;100ng/ml組在0-1h間GRP78 mRNA相對(duì)表達(dá)量逐步出現(xiàn)抬高,1h-2h明顯上抬達(dá)到峰值后于4h回落至基線水平附近。500ng/ml組在30min達(dá)到峰值后逐步回落,在接近2h時(shí)間點(diǎn)回落至基線水平。1000ng/ml組在0-1h間GRP78mRNA相對(duì)表達(dá)量逐步出現(xiàn)抬高,1h上抬達(dá)到峰值后于2h回落至基線水平附近。4、0-12h,對(duì)照組XBP1s mRNA表達(dá)水平均維持在較為恒定的基線水平;而實(shí)驗(yàn)組GRP78表達(dá)水平各濃度組均在加Pg-LPS干預(yù)早期,出現(xiàn)比基線水平明顯的抬高而到達(dá)峰值后回落至靠近基線水平:50ng/ml組在作用30min后表達(dá)水平逐步抬高,在1h時(shí)表達(dá)量達(dá)到峰值,于靠近2H時(shí)間點(diǎn)回落至基線水平以下;100ng/ml組在0-1h間XBP1s mRNA相對(duì)表達(dá)量逐步出現(xiàn)抬高,1h-2h明顯上抬達(dá)到峰值后于4h回落至基線水平附近。500ng/ml組在30min達(dá)到峰值后逐步回落,在接近1h時(shí)間點(diǎn)回落至基線水平。1000ng/ml組在0-1h間XBP1s mRNA相對(duì)表達(dá)量逐步出現(xiàn)抬高,1h上抬達(dá)到峰值后于2h回落至基線水平附近。結(jié)論:1、Pg-LPS可上調(diào)脂肪細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)水平,顯著升高脂肪細(xì)胞GRP78、XBP1s mRNA表達(dá)水平;2、GRP78、XBP1s mRNA表達(dá)水平和Pg-LPS作用的濃度和時(shí)間不存在相關(guān)性;3、Pg-LPS可能通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,啟動(dòng)脂肪細(xì)胞的凋亡機(jī)制;
[Abstract]:Objective to simulate the process of periodontitis pathogenicity factor (PDF) on adipocytes, culture 3T3-L1 preadipocytes in vitro, induce them to differentiate into adipocytes, and treat adipocytes with lipopolysaccharide (Pg-LPS) from porphyromonas gingivalis. To observe the effect of Pg-LPS on the expression of GRP78XBP1s mRNA in adipose endoplasmic reticulum stress, and to study the effect of Pg-LPS on endoplasmic reticulum stress in adipocytes, so as to further reveal periodontitis and adipose tissue inflammation. The relationship between insulin resistance and diabetes mellitus provides theoretical basis for clinical treatment and prevention. Methods 1. 3T3-L1 preadipocytes were induced to differentiate into adipocytes. The differentiation status of the cells was identified by oil red o staining. The adipocytes were divided into two groups: blank control group and LPS treated group. Blank control group: the control group was divided into 4 groups: the control group was treated with LPS for 12 hours by adding equal volume 0.8% bovine serum albumin (BSA) serum-free DEME culture medium. Four concentrations of Pg-LPS and 0.8% bovine serum albumin (BSA) were added to Pg-LPS and 0.8% bovine serum albumin (BSA) respectively. The mRNA expression level of GRP78 XBP1s was detected by real-time PCR. Results 1. After 14 days of differentiation, the adipocytes could be seen to differentiate into adipocytes before 3T3-l1. After 12 hours of Pg-LPS addition, the adipocytes could basically differentiate into adipocytes. There was no obvious apoptosis in the control group except individual dead cells floating. The experimental group was compared with the control group. The apoptotic cells floating and agglomeration of small area cells were observed in each group of experimental group for 30 ~ 12 hours, and the expression level of GRP78 mRNA in control group was maintained at a relatively constant baseline level, while the expression level of GRP78 in experimental group was at the early stage of Pg-LPS intervention, and the expression level of GRP78 in experimental group was at the early stage of Pg-LPS intervention. The expression level of 50 ng / ml / ml group increased gradually after the action of 30min, and reached the peak level at 1 h, and reached the peak level at 1 h. The relative expression of GRP78 mRNA in the 100ng / ml group decreased to close to the baseline level at close to 2 h. The relative expression of GRP78 mRNA gradually increased from 0 to 1 h and reached the peak value at 1h-2 h, then dropped to the baseline level at 4 h after reaching the peak level. The expression of GRP78 mRNA in the 100ng / ml group decreased gradually after the peak value of 30min reached the baseline level. The relative expression of GRP78 mRNA decreased to the baseline level at close to 2 h. The relative expression level of GRP78 mRNA in the control group was gradually elevated at 1 h and reached its peak value within 1 h, then dropped to the baseline level at 2 h, and the expression level of XBP1s mRNA in the control group was maintained at a relatively constant baseline level. In the experimental group, the expression of GRP78 increased significantly after the treatment with Pg-LPS, and then decreased to the baseline level (1: 50ng / ml). The expression level of GRP78 increased gradually after the treatment of 30min, and reached the peak level at 1 h. The relative expression of XBP1s mRNA in the 100ng / ml group decreased to the baseline level at the time point near 2H. The relative expression of XBP1s mRNA gradually increased from 0 to 1h and reached the peak value at 1h-2h, and then decreased to the baseline level at 4h after the peak value of 30min reached the peak. The relative expression of XBP1s mRNA decreased to the baseline level at close to 1h. The relative expression of XBP1s mRNA gradually increased to the peak at 1h and then decreased to the baseline level at 2h. Conclusion the stress level of endoplasmic reticulum (ER) in adipocytes can be upregulated by Pg-LPS, and the expression of GRP78 XBP1s mRNA in adipocytes is significantly increased. There is no correlation between the expression of GRP78 XBP1s mRNA and the concentration and time of Pg-LPS, which may be induced by endoplasmic reticulum stress. The mechanism of adipocyte apoptosis was initiated.
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R781.4

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本文編號(hào)：2014764