本文選題：舌鱗狀細(xì)胞癌 + miR-149��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究背景:舌鱗狀細(xì)胞癌是常見的口腔惡性腫瘤。臨床上通常采用手術(shù)為主綜合治療,但死亡率仍然維持在較高水平。從基因水平探索舌鱗癌發(fā)生和發(fā)展機(jī)制,有可能在提高舌鱗癌患者的治愈率、降低死亡率等方面具有十分重要的科學(xué)意義。miR-149在多種不同類型的實(shí)體惡性腫瘤中具有抑癌基因的功能,SP1在包括胃癌、胰腺癌等惡性腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)量均異常增高,且SP1高表達(dá)的患者其預(yù)后情況通常較差,這兩者在舌癌中的研究還相對較少,所以希望通過研究miR-149和SP1在舌惡性腫瘤中的表達(dá)及及兩者關(guān)系在舌癌發(fā)生和發(fā)展過程中的作用,為舌惡性腫瘤的治療提供一些新的思路。目的本研究擬檢測miR-149在舌鱗癌患者腫瘤組織中的表達(dá),探討其與患者臨床病例參數(shù)的相關(guān)性,分析miR-149的表達(dá)對舌鱗癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移過程可能發(fā)生的影響,探究miR-149信號活化對于舌鱗癌細(xì)胞中SP1表達(dá)的調(diào)控作用及對舌鱗癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,有利于了解舌鱗癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制,同時(shí)為舌鱗癌的臨床診斷以及靶向治療提供依據(jù)。方法(1)采集2014.1-2014.9期間我院口腔頜面外科舌鱗癌手術(shù)患者癌組織樣本及相應(yīng)癌旁組織樣本,共62例。熒光定量PCR檢測上述組織樣本中miR-149的表達(dá)并分析其與患者臨床參數(shù)的相關(guān)性。(2)構(gòu)建miR-149mimic質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染Tca8113和CAL-27細(xì)胞。熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中miR-149的表達(dá)。MTT法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖情況,流式細(xì)胞術(shù)分別檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡情況,Transwell小室法檢測細(xì)胞侵襲能力。(3)采用生物學(xué)軟件分析miR-149的靶基因并篩選、構(gòu)建野生型和突變型SP1質(zhì)粒載體分別與miR-149 mimic共轉(zhuǎn)染Tca8113和CAL-27細(xì)胞,雙熒光素酶檢測試劑盒驗(yàn)證miR-149是否靶向調(diào)控SP1基因的3'UTR。熒光定量 PCR 和 western blot 法檢測轉(zhuǎn)染 miR-149 mimic 后 Tca8113 和 CAL-27細(xì)胞中SP1 mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果(1)熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示舌鱗癌組織中miR-149的表達(dá)量明顯低于癌旁相應(yīng)正常組織(P0.01)。(2)熒光定量PCR檢測結(jié)果表明,成功構(gòu)建miR-149過表達(dá)Tca8113和CAL-27細(xì)胞系。轉(zhuǎn)染miR-149 mimic后Tca8113和CAL-27細(xì)胞增殖率明顯低于相應(yīng)對照組(P0.01)、侵襲細(xì)胞數(shù)量明顯低于對照組(P0.05)、細(xì)胞凋亡率明顯高于對照組(P0.01)。細(xì)胞周期檢測G1/G0期細(xì)胞所占比例明顯高于對照組(P0.05),而S期細(xì)胞比例則顯著低于對照組(P0.05)。(3)SP1被預(yù)測為miR-149的靶基因,其在SP1上所綁定的位置位于miR-149的 3'UTR 區(qū)域。轉(zhuǎn)染 miR-149 mimic 后 Tca8113 和 CAL-27 細(xì)胞中 SP1 mRNA的表達(dá)量均明顯低于對照組(P=0)、SP1蛋白的表達(dá)量均明顯低于對照組(P0.05)。結(jié)論miR-149在舌鱗癌組織中呈低表達(dá),且其表達(dá)量與舌鱗癌患者的組織學(xué)分級、臨床分期以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。miR-149能夠通過直接抑制SP1蛋白的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)對舌鱗癌細(xì)胞增殖、侵襲以及細(xì)胞周期調(diào)控等一系列生物學(xué)過程的影響。
[Abstract]:Background: tongue squamous cell carcinoma is a common oral malignant tumor. Surgery is usually used in clinical treatment, but the mortality rate is still at a high level. To explore the mechanism of occurrence and development of squamous cell carcinoma of tongue at the gene level may improve the cure rate of patients with squamous cell carcinoma of tongue. It is of great scientific significance to reduce mortality. MiR-149 has the function of suppressor gene in various types of solid malignant tumors. The expression of SP1 in malignant tumor cells, including gastric cancer and pancreatic cancer, is abnormally high. The prognosis of patients with high expression of SP1 is usually poor, and there are relatively few studies on the expression of miR-149 and SP1 in malignant tumor of tongue, and the relationship between miR-149 and SP1 in the carcinogenesis and development of tongue cancer, so we hope to study the role of miR-149 and SP1 in the carcinogenesis and development of tongue cancer. To provide some new ideas for the treatment of malignant tumor of tongue. Objective to investigate the expression of miR-149 in the tumor tissue of tongue squamous cell carcinoma (SCC), and to explore the correlation between miR-149 expression and clinical parameters, and to analyze the effect of miR-149 expression on the proliferation and metastasis of tongue squamous cell carcinoma (LSCC) cells. To investigate the effect of miR-149 signal activation on the expression of SP1 and the biological behavior of tongue squamous cell carcinoma cells, it is helpful to understand the mechanism of development of tongue squamous cell carcinoma, and to provide the basis for clinical diagnosis and targeted therapy of tongue squamous cell carcinoma. Methods A total of 62 patients with oral and maxillofacial squamous cell carcinoma of tongue were collected from January to April 2014.The samples of cancer tissues and adjacent tissues were collected. The expression of miR-149 was detected by fluorescence quantitative PCR and the correlation between miR-149 and clinical parameters was analyzed. The miR-149 mimic plasmid was constructed and transfected into Tca8113 and CAL-27 cells. The expression of miR-149 in transfected cells was detected by fluorescence quantitative PCR. MTT assay was used to detect the proliferation of transfected cells. Cell cycle and apoptosis were detected by flow cytometry. The wild-type and mutants SP1 plasmids were cotransfected with miR-149 mimic into Tca8113 and CAL-27 cells, respectively. The expression of SP1 mRNA and protein in Tca8113 and CAL-27 cells after transfection of miR-149 mimic was detected by fluorescence quantitative PCR and western blot. Results the results of fluorescence quantitative PCR showed that the expression of miR-149 in tongue squamous cell carcinoma was significantly lower than that in adjacent normal tissue (P0.01U. 2) the results of fluorescence quantitative PCR showed that miR-149 overexpression Tca8113 and CAL-27 cell lines were successfully constructed. After transfection of miR-149 mimic, the proliferation rate of Tca8113 and CAL-27 cells was significantly lower than that of control group (P 0.01), the number of invasive cells was significantly lower than that of control group (P 0.05), and the apoptosis rate of Tca8113 and CAL-27 cells was significantly higher than that of control group. The percentage of cells in G _ 1 / G _ 0 phase was significantly higher than that in control group (P _ (0.05), while the proportion of S phase cells was significantly lower than that of control group (P _ (0.05) P _ (0.05). The target gene was predicted to be miR-149. The binding position on SP1 was located in the 3UTR region of miR-149. After transfection of miR-149 mimic, the expression of SP1 mRNA in Tca8113 and CAL-27 cells was significantly lower than that in control group. Conclusion the expression of miR-149 is low in tongue squamous cell carcinoma, and its expression level is closely related to histological grade, clinical stage and distant metastasis of tongue squamous cell carcinoma. MiR-149 can directly inhibit the expression of SP1 protein to realize the proliferation of tongue squamous cell carcinoma cells. A series of biological processes, such as invasion and cell cycle regulation.
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.86

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本文編號：2001146