本文選題：黃芪多糖 + 高糖��； 參考：《濱州醫(yī)學(xué)院》2015年碩士論文

【摘要】：目的：探討高糖環(huán)境下不同濃度(5 mg/ml、0.5 mg/ml、0.05 mg/ml)的黃芪多糖(伯恩)對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞增殖、分化和礦化的影響,并研究相關(guān)信號(hào)基因表達(dá)變化,以期了解黃芪多糖調(diào)節(jié)高糖環(huán)境下成骨細(xì)胞活性的作用機(jī)制。方法：小鼠胚胎成骨前體細(xì)胞(MC3T3-E1)于100 g/L胎牛血清的α-MEM培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)條件為5%CO2飽和濕度條件的恒溫(37℃)細(xì)胞培養(yǎng)箱,每2-3 d換液,細(xì)胞融合達(dá)90%以上后,行傳代操作。配制高糖培養(yǎng)基,分別取注射級(jí)黃芪多糖(伯恩)0.5 mg、0.05 mg、 0.005 mg加入100 ml的高糖培養(yǎng)基中,配制成5 mg/ml高濃度黃芪多糖(High-dose APS, HDA)、0.5 mg/ml中濃度黃芪多糖(Medium-dose APS, MDA)、0.05 mg/ml低濃度黃芪多糖(Low-dose APS,LDA)的高糖培養(yǎng)基；對(duì)照組采用單純的高糖培養(yǎng)基(High-glucose, HG)。通過(guò)MTT觀測(cè)實(shí)驗(yàn)1、3、5天時(shí)各組MC3T3-E1細(xì)胞增殖情況；ALP試劑盒檢測(cè)第1、3、5、7天實(shí)驗(yàn)各組MC3T3-E1細(xì)胞的堿性磷酸酶活性；茜素紅觀察實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞在14、21天時(shí)鈣結(jié)節(jié)的數(shù)量與形態(tài)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR觀察成骨活性相關(guān)Runx-2、OPN、OCN基因在實(shí)驗(yàn)第3、7天得的表達(dá)情況；激光共聚焦顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)早期各時(shí)間點(diǎn)的(3、6、9、12h)細(xì)胞超微骨架結(jié)構(gòu)。結(jié)果：高糖環(huán)境下,LDA組與MDA組更利于MC3T3-E1細(xì)胞的增殖,與HDA組和對(duì)照組差異明顯(P0.05=。但LDA組與MDA組組間差異不明顯。通過(guò)ALP試劑盒和茜素紅相對(duì)定量分析發(fā)現(xiàn),LDA組MC3T3-E1細(xì)胞的堿性磷酸酶活性和細(xì)胞礦化程度與礦化量均明顯優(yōu)于各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組,且差異顯著(P0.05)。RT-PCR數(shù)據(jù)顯示,高糖環(huán)境下0.05 mg/ml的黃芪多糖能顯著增加Runx-2、 OPN、OCN的表達(dá),表達(dá)量明顯高于其余實(shí)驗(yàn)各組(P0.05)。激光共聚焦觀察MC3T3-E1細(xì)胞骨架形態(tài),高糖環(huán)境中0.05 mg/ml的黃芪多糖更利于細(xì)胞內(nèi)纖維束的規(guī)則排列,并促進(jìn)細(xì)胞骨架的伸展,增加MC3T3-E1細(xì)胞的粘附活性。結(jié)論：1、高糖環(huán)境不利于MC3T3-E1細(xì)胞的分化、礦化和骨活性基因Runx-2、OPN和OCN的表達(dá),抑制細(xì)胞骨架的伸展與肌動(dòng)蛋白纖維的排列。2、0.05mg/ml的黃芪多糖較其它濃度的黃芪多糖,更利于MC3T3-E1細(xì)胞的增殖、分化和礦化。3、高糖環(huán)境下,0.05mg/ml的黃芪多糖可通過(guò)更好地促進(jìn)細(xì)胞肌動(dòng)蛋白纖維骨架的成熟和伸展以及增加Runx-2、OPN、OCN的表達(dá)水平的機(jī)制,以逆轉(zhuǎn)高糖環(huán)境對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞的不利影響,增強(qiáng)MC3T3-E1細(xì)胞的增殖、分化和礦化活性。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of Astragalus polysaccharide (Bern) at different concentrations of 5 mg / ml of astragalus on proliferation, differentiation and mineralization of MC3T3-E1 cells, and to study the changes of signal gene expression in high glucose environment, and to investigate the effects of different concentrations of Astragalus polysaccharide (Bern) on the proliferation, differentiation and mineralization of MC3T3-E1 cells. In order to understand the mechanism of astragalus polysaccharides regulating osteoblast activity in high glucose environment. Methods: mouse embryonic osteoblast precursor cells (MC3T3-E1) were cultured on 100g / L fetal bovine serum 偽 -MEM medium. The culture conditions were 5%CO2 saturated humidity constant temperature 37 鈩，

本文編號(hào)：1964273