本文選題：黃芪多糖 + 高糖��； 參考：《濱州醫(yī)學(xué)院》2015年碩士論文

【摘要】：目的：探討高糖環(huán)境下不同濃度(5 mg/ml、0.5 mg/ml、0.05 mg/ml)的黃芪多糖(伯恩)對MC3T3-E1細胞增殖、分化和礦化的影響,并研究相關(guān)信號基因表達變化,以期了解黃芪多糖調(diào)節(jié)高糖環(huán)境下成骨細胞活性的作用機制。方法：小鼠胚胎成骨前體細胞(MC3T3-E1)于100 g/L胎牛血清的α-MEM培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),培養(yǎng)條件為5%CO2飽和濕度條件的恒溫(37℃)細胞培養(yǎng)箱,每2-3 d換液,細胞融合達90%以上后,行傳代操作。配制高糖培養(yǎng)基,分別取注射級黃芪多糖(伯恩)0.5 mg、0.05 mg、 0.005 mg加入100 ml的高糖培養(yǎng)基中,配制成5 mg/ml高濃度黃芪多糖(High-dose APS, HDA)、0.5 mg/ml中濃度黃芪多糖(Medium-dose APS, MDA)、0.05 mg/ml低濃度黃芪多糖(Low-dose APS,LDA)的高糖培養(yǎng)基；對照組采用單純的高糖培養(yǎng)基(High-glucose, HG)。通過MTT觀測實驗1、3、5天時各組MC3T3-E1細胞增殖情況；ALP試劑盒檢測第1、3、5、7天實驗各組MC3T3-E1細胞的堿性磷酸酶活性；茜素紅觀察實驗各組細胞在14、21天時鈣結(jié)節(jié)的數(shù)量與形態(tài)；實時熒光定量PCR觀察成骨活性相關(guān)Runx-2、OPN、OCN基因在實驗第3、7天得的表達情況；激光共聚焦顯微鏡觀察實驗早期各時間點的(3、6、9、12h)細胞超微骨架結(jié)構(gòu)。結(jié)果：高糖環(huán)境下,LDA組與MDA組更利于MC3T3-E1細胞的增殖,與HDA組和對照組差異明顯(P0.05=。但LDA組與MDA組組間差異不明顯。通過ALP試劑盒和茜素紅相對定量分析發(fā)現(xiàn),LDA組MC3T3-E1細胞的堿性磷酸酶活性和細胞礦化程度與礦化量均明顯優(yōu)于各實驗組與對照組,且差異顯著(P0.05)。RT-PCR數(shù)據(jù)顯示,高糖環(huán)境下0.05 mg/ml的黃芪多糖能顯著增加Runx-2、 OPN、OCN的表達,表達量明顯高于其余實驗各組(P0.05)。激光共聚焦觀察MC3T3-E1細胞骨架形態(tài),高糖環(huán)境中0.05 mg/ml的黃芪多糖更利于細胞內(nèi)纖維束的規(guī)則排列,并促進細胞骨架的伸展,增加MC3T3-E1細胞的粘附活性。結(jié)論：1、高糖環(huán)境不利于MC3T3-E1細胞的分化、礦化和骨活性基因Runx-2、OPN和OCN的表達,抑制細胞骨架的伸展與肌動蛋白纖維的排列。2、0.05mg/ml的黃芪多糖較其它濃度的黃芪多糖,更利于MC3T3-E1細胞的增殖、分化和礦化。3、高糖環(huán)境下,0.05mg/ml的黃芪多糖可通過更好地促進細胞肌動蛋白纖維骨架的成熟和伸展以及增加Runx-2、OPN、OCN的表達水平的機制,以逆轉(zhuǎn)高糖環(huán)境對MC3T3-E1細胞的不利影響,增強MC3T3-E1細胞的增殖、分化和礦化活性。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of Astragalus polysaccharide (Bern) at different concentrations of 5 mg / ml of astragalus on proliferation, differentiation and mineralization of MC3T3-E1 cells, and to study the changes of signal gene expression in high glucose environment, and to investigate the effects of different concentrations of Astragalus polysaccharide (Bern) on the proliferation, differentiation and mineralization of MC3T3-E1 cells. In order to understand the mechanism of astragalus polysaccharides regulating osteoblast activity in high glucose environment. Methods: mouse embryonic osteoblast precursor cells (MC3T3-E1) were cultured on 100g / L fetal bovine serum 偽 -MEM medium. The culture conditions were 5%CO2 saturated humidity constant temperature 37 鈩，

本文編號：1964273