本文選題：rBMSCs + CGRP��； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景和目的:牙周病是口腔的常見(jiàn)疾病之一,是由牙菌斑引起的慢性炎癥,導(dǎo)致牙周組織的破壞甚至牙槽骨的嚴(yán)重吸收。隨著組織再生工程領(lǐng)域的深入研究,牙周組織再生技術(shù)得以提高,其中相關(guān)細(xì)胞因子及干細(xì)胞技術(shù)的研究已取得顯著成就,因牙周炎病因比較復(fù)雜,修復(fù)機(jī)制尚未明確,再生的牙周組織與健康生理性牙周組織相比不論從生理形態(tài)還是功能上都有較大的差距,臨床中很難實(shí)現(xiàn)健康生理性牙周組織的再生。降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)是一種神經(jīng)多肽物質(zhì),由37個(gè)氨基酸組成,因其有較多的重要調(diào)節(jié)作用且分布廣泛而在實(shí)驗(yàn)中作為人們研究的主要神經(jīng)肽物質(zhì)。大量研究證實(shí)CGRP可通過(guò)多種途徑調(diào)節(jié)骨組織生長(zhǎng)代謝,實(shí)現(xiàn)骨組織再生的功能。本課題組前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):在離斷下牙槽神經(jīng)的大鼠實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)中后期再生的骨質(zhì)較正常骨質(zhì)疏松,骨小梁也表現(xiàn)的較稀疏。CGRP作為神經(jīng)肽的主要物質(zhì)之一可通過(guò)多種途徑調(diào)節(jié)骨組織生長(zhǎng)代謝,實(shí)現(xiàn)骨組織再生的功能。針對(duì)以上臨床難題和理論基礎(chǔ)我們做了牙周組織再生的相關(guān)研究,借助于CGRP可促進(jìn)牙槽骨代謝,重點(diǎn)解決再生的牙周組織在生理形態(tài)及功能上最大程度接近于健康的牙周組織,為臨床中解決牙周炎引起的牙槽骨破壞實(shí)現(xiàn)生理性再生提供重要的理論基礎(chǔ)。方法:1.rBMSCs的分離培養(yǎng)及鑒定分離獲取Wistar大鼠股骨處全骨髓并培養(yǎng)傳代,獲得穩(wěn)定的第三代rBMSCs。Flow cytometer檢測(cè)表面標(biāo)志抗原,Oil red O、Alizarin Red染色檢測(cè)rBMSCs的成脂及成骨分化能力。2.rBMSCs高表達(dá)CGRP基因的構(gòu)建將重組慢病毒載體pLenO-DCE-CGRP與輔助包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞中,48h、72h后收集上清液,高速離心過(guò)濾后得到高滴度病毒液,置于-80℃?zhèn)溆�。慢病毒感染rBMSCs后檢測(cè)CGRP mRNA和蛋白的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)分為三組:CGRP組、Vector組、對(duì)照組。3.高表達(dá)CGRP對(duì)rBMSCs增殖和成骨分化的影響1)CCK-8、Flow cytometer檢測(cè)高表達(dá)CGRP對(duì)rBMSCs增殖能力的影響;2)Realtime PCR、Western Blot 檢測(cè) ALP(alkaline phosphatase,堿性磷酸酶)、BSP(bonesialoprotein,骨涎蛋白)、OPN(Osteopontin,骨橋蛋白)、Runx2(核心結(jié)合因子-2)mRNA和蛋白的表達(dá)水平;3)通過(guò)Alizarin Red染色測(cè)定三組rBMSCs的成骨分化能力。4)高表達(dá)CGRP促進(jìn)rBMSCs成骨分化的機(jī)制研究Western Blot檢測(cè)三組細(xì)胞OPG、RANKL的蛋白表達(dá)量,統(tǒng)計(jì)分析OPG/RANKL。結(jié)果:1.rBMSCs的分離培養(yǎng)及鑒定分離獲取Wistar大鼠股骨處全骨髓并培養(yǎng),細(xì)胞形態(tài)良好,大部分呈梭形,放射狀排列。Flow cytometer檢測(cè)第三代rBMSCs的表面標(biāo)志抗原-CD34、CD45、CD44、CD90,表達(dá)率依次為 0.3%、2.8%、92.3%、97.6%,符合 rBMSCs 表面標(biāo)志物表達(dá)的特性。Oil red O、Alizarin Red染色檢測(cè)成脂及成骨誘導(dǎo)后的rBMSCs,染色結(jié)果顯示都為陽(yáng)性。2.rBMSCs高表達(dá)CGRP基因的構(gòu)建病毒液感染rBMSCs后,相對(duì)于Vector組和對(duì)照組,CGRP組的CGRP蛋白及mRNA的表達(dá)量明顯升高(P0.05),而Vector組和對(duì)照組表達(dá)較弱且無(wú)明顯差異(P0.05)。3.高表達(dá)CGRP對(duì)rBMSCs增殖和成骨分化的影響CCK-8、Flow cytometer檢測(cè)結(jié)果均顯示CGRP組的rBMSCs增殖能力高于Vector組和對(duì)照組(P0.05);檢測(cè)三組細(xì)胞礦化誘導(dǎo)1w、2w后ALP、BSP、OPN、Runx2mRNA和蛋白的表達(dá)水平,檢測(cè)結(jié)果顯示:CGRP組較Vector組和對(duì)照組ALP、BSP、OPN和Runx2mRNA和蛋白在1w、2w時(shí)的表達(dá)量明顯增強(qiáng)(P0.05),Vector組和對(duì)照組無(wú)明顯差異(P0.05);rBMSCs成骨誘導(dǎo)4w后Alizarin Red染色CGRP組的礦化結(jié)節(jié)較其余兩組多(P0.05),其余兩組無(wú)顯著差異(P0.05)。高表達(dá)CGRP促進(jìn)rBMSCs成骨分化的機(jī)制研究:礦化誘導(dǎo)1w后三組rBMSCs OPG蛋白的表達(dá)量CGRP組高于Vector組和對(duì)照組;而RANKL蛋白的表達(dá)量CGRP組低于其他兩組;OPG/RANKL的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示CGRP組OPG/RANKL高于其他兩組(P0.05),其他兩組間OPG/RANKL無(wú)明顯差異(P0.05)。高表達(dá)CGRP基因可以通過(guò)調(diào)節(jié)OPG/RANKL促進(jìn)rBMSCs的成骨分化。結(jié)論:1.高表達(dá)CGRP基因可以促進(jìn)rBMSCs的增殖。2.高表達(dá)CGRP基因可以通過(guò)調(diào)節(jié)OPG/RANKL促進(jìn)rBMSCs的成骨分化。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : To study the effects of CGRP on the growth and metabolism of bone tissue and to realize the regeneration of bone tissue . The results showed that the expression of CGRP was 0.3 % , 2 . 8 % , 92 . 3 % and 97 . 6 % , and the expression of CGRP was 0 . 3 % , 2 . 8 % , 92 . 3 % and 97 . 6 % . There was no significant difference between the two groups ( P0.05 ) . There was no significant difference between the two groups ( P0.05 ) . The expression of OPG / RANKL in the three groups was higher than that in the other two groups ( P0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R781.4

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 秦明,黃裕新,王景杰,趙保民,高巍,王慶莉;EFFECT OF ELECTROACUPUNCTURE OF ZUSANLI ON PLASMA EGF, CGRP AND GASTRIC MUCOSA IN STRESS RATS[J];World Journal of Acupuncture-Moxibustion;2001年02期

2 李煒 ,鐘廣偉 ,祁敏 ,劉衛(wèi)平 ,王素娥 ,文玲波 ,徐琳蘭 ,陳欣 ,龍春香 ,李學(xué)文;ACUPUNCTURE TREATMENT OF MIGRAINE AND PLASMA CGRP AND SP CONTENT CHANGES[J];World Journal of Acupuncture-Moxibustion;2001年03期

3 劉繼峰,李久宏,翟寧,耿龍,宋芳吉;Study on the Relationship Between Neuropeptides,Acth,Cortisol and Polymyositis/Dermatomyositis[J];Chinese Medical Sciences Journal;2003年03期

4 石葛明,譚會(huì)兵,劉揚(yáng),劉樹(shù)鋒,郭安臣,萬(wàn)選才;5,7雙羥色胺對(duì)不同功能運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群調(diào)質(zhì)CGRP配布式樣的影響[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2000年03期

5 劉輝;王海峰;朱紅巖;仇為民;陳晶;;新生兒缺氧缺血性腦病血漿ET和CGRP測(cè)定及臨床意義[J];放射免疫學(xué)雜志;2007年06期

6 徐格;吳雪暉;許建中;周強(qiáng);;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面CGRP受體存在的研究[J];華南國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

7 徐格;許建中;周強(qiáng);吳雪暉;;CGRP對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖影響的研究[J];華南國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

8 周志超;陳元方;莫日根;鄭捷;羅文;侯雪;潘國(guó)宗;;人胰腺癌細(xì)胞降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)受體及其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響的研究[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);1993年06期

9 ;ELECTROPHYSIOLOGICAL EFFECTS OF CALCITONIN GENE-RELATED PEPTIDE ON NORMAL AND ISCHEMIC MYOCRDIUM[J];中國(guó)介入心臟病學(xué)雜志;1998年04期

10 孫紀(jì)新,吳待英,許順江,甄秀麗,劉雪琴,劉榮霞,李貴霞;CGRP在妊高征發(fā)病中的作用探討[J];醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐;1999年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 陳清泉;羅丹;王麗;張曉紅;李元建;;激動(dòng)辣椒素受體上調(diào)背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元細(xì)胞中CGRP的表達(dá)[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2006年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

2 于龍川;;CGRP與痛覺(jué)調(diào)節(jié)——十六年研究工作回顧與思索[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第23屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要文集[C];2010年

3 豐偉;田新華;莊再旺;林曉寧;魏峰;黃志純;孟晗;黃延林;陳陸馗;;降鈣素基因相關(guān)肽真核表達(dá)質(zhì)粒pLXSN-CGRP的構(gòu)建[A];2011中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

4 陳丁生;蔣瑾;逮波;朱麗霞;文琛;;藥針治療對(duì)糖尿病大鼠脊髓背角降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)影響的初步研究[A];第四屆全國(guó)糖尿�。ㄏ什。⿲W(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];1997年

5 王波濤;陳璧;胡大海;湯朝武;;大鼠腎上腺內(nèi)含降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)神經(jīng)的正常分布及燙傷時(shí)的改變[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1997年

6 曹志中;趙皿;;大鼠磨牙牙髓降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)陽(yáng)性神經(jīng)纖維在急性炎癥中的變化[A];全國(guó)第四次牙體牙髓病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1995年

7 諶峗;劉彥梅;郭鋒;陳根;陳臨溪;秦旭平;;Inhibitory effects of CGRP and ERK1/2 signal pathway on rat vascular smooth muscle cell proliferation: role of caveolae and caveolin-1[A];中南地區(qū)第八屆生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要匯編[C];2012年

8 謝文霞;楊建榮;陳勇;夏君慧;黃河;;腹針對(duì)頸性眩暈患者血漿ET-1、CGRP水平影響的研究[A];中國(guó)針灸學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下集）[C];2009年

9 謝文霞;楊建榮;陳勇;夏君慧;黃河;;腹針對(duì)頸性眩暈患者血漿ET-1、CGRP水平的影響[A];2011中國(guó)針灸學(xué)會(huì)年會(huì)論文集（摘要）[C];2011年

10 劉俊嶺;王友京;羅明富;陳淑萍;董曉彤;王雙昆;王淑斌;高永輝;;脊髓等組織及血漿NO和CGRP在針刺改善心肌缺血中的作用[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)心血管、呼吸和腎臟生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前3條

1 ;CGRP心血管作用研究進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

2 ;老年原發(fā)性高血壓與舒血管活性物質(zhì)的關(guān)系[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

3 余志平;機(jī)制不同各有所長(zhǎng)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 徐格;CGRP在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

2 張慧宇;CGRP在骨修復(fù)與炎癥性骨疾病中的生物學(xué)作用及機(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

3 周燕;CGRP對(duì)Pg-LPS誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞損傷的調(diào)控作用和機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

4 郭韌;CGRP介導(dǎo)人體內(nèi)硝酸酯類(lèi)藥物的藥理作用及與相關(guān)藥物代謝酶的關(guān)系[D];中南大學(xué);2009年

5 鄭求烈;補(bǔ)充復(fù)合中藥對(duì)運(yùn)動(dòng)大鼠心肌損傷標(biāo)志物及CGRP含量的影響[D];北京體育大學(xué);2013年

6 付紅敏;CGRP在高氧誘導(dǎo)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞損傷中的作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

7 于金錄;重組表達(dá)NT4-CGRP腺相關(guān)病毒的構(gòu)建及對(duì)雞胚血管痙攣的治療作用研究[D];吉林大學(xué);2011年

8 金大成;CGRP和NGF對(duì)全腦缺血再灌注大鼠腦組織的保護(hù)作用及機(jī)制[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2003年

9 商立軍;CGRP對(duì)正常及模擬缺血缺氧心肌鈣通道的作用及心肌細(xì)胞數(shù)學(xué)模型的仿真研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2000年

10 李先偉;CGRP在大鼠肺動(dòng)脈高壓血管重構(gòu)和博萊霉素誘導(dǎo)肺纖維化中的作用及機(jī)制[D];中南大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 曹瑩瑩;CGRP在初級(jí)感覺(jué)信息調(diào)制中的作用研究[D];石河子大學(xué);2009年

2 陳彥強(qiáng);肉毒毒素A對(duì)神經(jīng)源性疼痛大鼠行為學(xué)及脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元CGRP的影響[D];蘭州大學(xué);2015年

3 閆麗璇;糖尿病人SP、CGRP、cTnI、NE、Ach改變與術(shù)中心血管事件風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

4 張婷;CGRP對(duì)大鼠骨毮間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和成骨分化的影響[D];山東大學(xué);2015年

5 孫嵩;NGF調(diào)控CGRP表達(dá)促進(jìn)MG-63細(xì)胞增殖分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 趙上下;邵氏“五針?lè)ā睂?duì)哮喘模型大鼠CGRP、NGF影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];河南中醫(yī)學(xué)院;2015年

7 常坤鵬;人尿激肽原酶預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血后腦組織中CGRP、RAMP1及VEGF表達(dá)的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

8 全海燕;CGRP通過(guò)cAMP/PPARγ/eNOS途徑改善血管內(nèi)皮細(xì)胞胰島素抵抗[D];南華大學(xué);2015年

9 崔銀潔;截癱三聯(lián)針復(fù)合康復(fù)訓(xùn)練對(duì)脊髓損傷患者5-HT CGRP的影響[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2015年

10 歐云娜;治腸法對(duì)腸道菌群失調(diào)合并過(guò)敏性哮喘大鼠肺腸組織神經(jīng)肽SP、CGRP、VIP分泌機(jī)制的影響[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1951338