本文選題：RNA干擾 + BimS基因��； 參考：《實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志》2017年01期

【摘要】：目的:應(yīng)用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建BimS慢病毒RNA干擾載體,探討其感染效率和干擾效果。方法:針對(duì)人BimS設(shè)計(jì)3個(gè)干擾靶點(diǎn),將單鏈引物退火成雙鏈oligo序列,連接入AgeI和EcoRI雙酶切線性化載體中。將重組質(zhì)粒進(jìn)行病毒包裝、并且通過感染ACC-2細(xì)胞觀察其感染效率,定量PCR檢測(cè)其對(duì)BimS mRNA干擾效果。結(jié)果:PCR產(chǎn)物經(jīng)擴(kuò)增電泳后陽(yáng)性克隆得到337bp條帶,插入序列片段與DNA測(cè)序結(jié)果完全相符。重組慢病毒載體在293T細(xì)胞中包裝獲得滴度為2×10~8 TU/ml的病毒顆粒,MOI=20,轉(zhuǎn)染效率為85%。轉(zhuǎn)染pFU-GV-BmS-1組、pFU-GV-BmS-2組及對(duì)照組BmS mRNA相對(duì)表達(dá)水平分別為:0.743±0.025、0.466±0.023、1.266±0.042(組間兩兩比較,P0.05)。結(jié)論:BimS慢病毒RNA干擾載體構(gòu)建成功,并能高效感染ACC-2細(xì)胞及下調(diào)BmS mRNA表達(dá)。
[Abstract]:Objective: to construct BimS lentivirus RNA interference carrier by using RNA interference technique, and to explore its infection efficiency and interference effect. Methods: 3 interference targets were designed for human BimS. Single chain primers were annealed into double chain oligo sequences and joined into AgeI and EcoRI double enzyme tangential linearized carriers. The recombinant plasmid was packaged by the recombinant plasmid and infected by ACC-2 cells. The infection efficiency was observed and the interference effect on BimS mRNA was detected by quantitative PCR. Results: the 337bp bands were obtained by the positive clones of the PCR products after amplification electrophoresis. The inserted sequence fragments were completely consistent with the results of DNA sequencing. The recombinant lentivirus vector was packed in 293T cells to obtain 2 x 10~8 TU/ml virus particles, MOI=20, the transfection efficiency was 85%. transfection pF. The relative expression levels of BmS mRNA in group U-GV-BmS-1, group pFU-GV-BmS-2 and control group were 0.743 + 0.025,0.466 + 0.023,1.266 + 0.042 (22 comparison between groups, P0.05). Conclusion: the RNA interference vector of BimS lentivirus was constructed successfully, and it could efficiently infect ACC-2 cells and downregulate BmS mRNA table.
【作者單位】： 西安交通大學(xué)口腔醫(yī)院口腔頜面外科;
【基金】：陜西省社發(fā)攻關(guān)資助項(xiàng)目(編號(hào):2013k12-03-21)
【分類號(hào)】：R739.8

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本文編號(hào)：1942410