本文選題：乏氧 + 叉頭蛋白P��； 參考：《吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)》2017年03期

【摘要】：目的:觀察乏氧對人口腔鱗狀細胞癌(OSCC)細胞中叉頭蛋白P3(FOXP3)表達的影響,闡明乏氧調(diào)控FOXP3表達的表觀遺傳學(xué)機制。方法:選取人OSCC細胞株FaDu和OECM-1細胞,常氧和乏氧條件下培養(yǎng)18h。采用實時定量PCR方法檢測細胞中FOXP3mRNA的相對表達水平,Western blotting法檢測FaDu和OECM-1細胞中FoxP3蛋白表達水平,染色質(zhì)免疫沉淀-定量PCR(ChIP-qPCR)法檢測FOXP3基因啟動子上組蛋白修飾H3K4乙�；�(H3K4ac)、H3K4三甲基化(H3K4me3)和H3K27三甲基化(H3K27me3)水平。采用組蛋白去乙�；�3(HDAC3)基因沉默的FaDu細胞,以實時定量PCR和ChIP-qPCR法檢測FaDu細胞中HDA3mRNA相對表達水平和FOXP3mTNA表達抑制率。結(jié)果:與常氧條件比較,乏氧條件下FaDu和OECM-1細胞中FOXP3 mRNA相對表達水平均明顯降低,分別下降65.6%(P0.01)和75.7%(P0.01);Western blotting檢測,乏氧條件下FaDu和OECM-1細胞中FOXP3蛋白表達水平明顯低于常氧條件下;染色質(zhì)免疫沉淀實驗,與常氧條件比較,乏氧條件下FaDu細胞中FOXP3基因啟動子上的H3K4ac和H3K4me3水平明顯降低(P0.01),而H3K27me3水平無明顯差異。與無HDAC3基因沉默的FaDu細胞比較,HDAC3基因沉默的FaDu細胞中缺氧誘導(dǎo)的FOXP3啟動子上H3K4ac和H3K4me3表達抑制率明顯降低(P0.05),缺氧誘導(dǎo)的FOXP3mRNA相對表達抑制率降低(P0.05)。結(jié)論:乏氧可通過HDAC3介導(dǎo)的FOXP3基因啟動子上H3K4ac水平下調(diào)而抑制OSCC細胞中FOXP3的表達。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of hypoxia on the expression of forkhead protein P3FXP3 in human oral squamous cell carcinoma (OSCC) cells and to elucidate the epigenetic mechanism of hypoxia regulating the expression of FOXP3. Methods: human OSCC cell lines FaDu and OECM-1 were cultured for 18 h under normoxic and hypoxic conditions. The relative expression level of FOXP3mRNA was detected by real-time quantitative PCR assay and the expression of FoxP3 protein in FaDu and OECM-1 cells was detected by Western blotting assay. Chromatin immunoprecipitation-quantitative PCRP-qPCRmethod was used to detect the levels of histone modified H3K4 acetylated H3K4 H3K4acactyl (H3K4 trimethylated H3K4me3) and H3K27 trimethylated h3K27me3 (H3K27me3) on the promoter of FOXP3 gene. FaDu cells silenced by histone deacetylase 3 (HDAC3) gene were used to detect the relative expression of HDA3mRNA and the inhibition rate of FOXP3mTNA expression in FaDu cells by real-time quantitative PCR and ChIP-qPCR. Results: compared with normoxic conditions, the relative expression of FOXP3 mRNA in FaDu and OECM-1 cells decreased significantly under hypoxia, and decreased by 65.6% (P 0.01) and 75.7% (P 0.01), respectively. The expression of FOXP3 protein in FaDu and OECM-1 cells under hypoxia was significantly lower than that under normoxic condition. In chromatin immunoprecipitation assay, compared with normoxic conditions, the levels of H3K4ac and H3K4me3 on the promoter of FOXP3 gene in FaDu cells were significantly lower than those under normoxic conditions, but there was no significant difference in H3K27me3 level. Compared with FaDu cells without HDAC3 gene silencing, the inhibition rate of H3K4ac and H3K4me3 expression on FOXP3 promoter induced by hypoxia was significantly lower than that of FaDu cells without HDAC3 gene silencing, and the relative expression inhibition rate of FOXP3mRNA induced by hypoxia was lower than that of FaDu cells induced by hypoxia. Conclusion: hypoxia can inhibit the expression of FOXP3 in OSCC cells by down-regulating the level of H3K4ac on the promoter of FOXP3 gene mediated by HDAC3.
【作者單位】： 浙江省腫瘤醫(yī)院放療科十九病區(qū);杭州師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助課題(81301850) 浙江省教育廳科研項目資助課題(Y201328812)
【分類號】：R739.8

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本文編號：1904728