發(fā)布時間：2018-05-16 21:07

  本文選題：大鼠髁突軟骨細(xì)胞 + 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激�。� 參考：《南京大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：第一部分Salubrinal抑制ERS反應(yīng)對周期性牽張刺激誘導(dǎo)的大鼠,髁突軟骨細(xì)胞凋亡保護作用的研究[目的]研究Salubrinal對周期性牽張刺激誘導(dǎo)下的ERS介導(dǎo)的原代大鼠髁突軟骨細(xì)胞凋亡的保護作用。[方法]1.選取3周齡SD大鼠,取髁突軟骨進行原代培養(yǎng)。對第三代髁突軟骨細(xì)胞進行相關(guān)實驗。2.周期性張應(yīng)變刺激(cyclic strain, CS)為20%,0.5Hz,24h矩形波刺激。Salubrinal+CS組則需用40mol/L Salubrinal預(yù)處理30 mmin后再予以同樣的周期性張應(yīng)變刺激。實驗分為三組：對照組、周期性張應(yīng)變刺激組(CS組)、Salubrinal+CS組。采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率；采用RT-qPCR檢測ERS標(biāo)志分子GRP78、GRP94、CHOP、Caspase-12的mRNA水平改變,Western印跡法檢測GRP78、GRP94、CHOP、Caspase-12蛋白水平表達改變。[結(jié)果]1.20%周期性張應(yīng)變刺激處理大鼠髁突軟骨細(xì)胞24小時后,細(xì)胞凋亡率明顯上升(P0.05); Salubrinal+CS組細(xì)胞凋亡率較CS組顯著降低(P0.05)。2.20%周期性張應(yīng)變刺激誘導(dǎo)大鼠髁突軟骨細(xì)胞的ERS凋亡相關(guān)分子CHOP、 Caspase-12 mRNA水平表達升高,Caspase-12蛋白水平升高：Salubrinal可以逆轉(zhuǎn)這些變化。[結(jié)論]1.20%周期性張應(yīng)變刺激力可以誘導(dǎo)大鼠髁突軟骨細(xì)胞發(fā)生凋亡,ERS凋亡蛋白表達增加。2. Salubrinal可以通過抑制大鼠髁突軟骨細(xì)胞發(fā)生ERS,對20%周期性張應(yīng)變刺激誘導(dǎo)的凋亡起保護作用。第二部分Salubrinal抑制ERS反應(yīng)對低氧刺激誘導(dǎo)的大鼠髁突軟骨細(xì)胞凋亡保護作用的研究[目的]研究ERS抑制劑Salubrinal對低氧誘導(dǎo)刺激下大鼠髁突軟骨細(xì)胞(所有的軟骨細(xì)胞都特指大鼠髁突軟骨細(xì)胞)凋亡的保護作用。[方法]1.體內(nèi)實驗部分：選取6周齡SD大鼠,戴用特殊設(shè)計的矯形器(專利號：201120210396.4)對其髁突軟骨施加壓力刺激,單純加力組作用時間7天,Salubrinal預(yù)處理組則在加力關(guān)節(jié)腔局部注射Salubrinal。不戴矯形器的SD大鼠作為對照組,免疫組化檢測加力后髁突關(guān)節(jié)軟骨組織的缺氧誘導(dǎo)因子Hif-1α的表達改變。2.體外實驗部分：選取3周齡SD大鼠,取髁突軟骨進行原代細(xì)胞培養(yǎng),所有實驗均使用P3代髁突軟骨細(xì)胞。3.實驗分為三組：對照組、低氧刺激組、Salubrinal+低氧刺激組,其中低氧刺激為5%低氧24h和1%低氧30h兩組設(shè)計,Salubrinal的預(yù)處理需在低氧刺激前30min開始；流式細(xì)胞術(shù)檢測各組的細(xì)胞凋亡率。4.根據(jù)流式結(jié)果選取合適的低氧刺激強度處理細(xì)胞。采用RT-qPCR檢測各組細(xì)胞的ERS標(biāo)志分子GRP78、GRP94、CHOP、Caspase-12mRNA表達的改變,Western印跡法檢測各組細(xì)胞的ERS標(biāo)志分子GRP78、GRP94、CHOP、Caspase-12及Hif-1α蛋白表達的改變。[結(jié)果]1.大鼠髁突軟骨在壓應(yīng)力刺激作用下,缺氧誘導(dǎo)因子Hif-la的表達水平明顯上升(P0.05), Salubrinl預(yù)處理組較單純加力組Hif-la的表達水平明顯降低(P0.05)。2.5%低氧刺激24h后,大鼠髁突軟骨細(xì)胞凋亡率無明顯差異(P0.05)； 1%低氧刺激30h,大鼠髁突軟骨細(xì)胞凋亡上升,Salubrinal可緩解低氧刺激造成的大鼠髁突軟骨細(xì)胞凋亡。3.正常培養(yǎng)條件Hif-1α不表達,1%低氧刺激30h后Hif-1α儀蛋白表達,且Salubrinal預(yù)處理降低了缺氧引起的Hif-1α表達升高(P0.05)。1%低氧刺激30h后,大鼠髁突軟骨細(xì)胞中GRP78、GRP94、CHOP、Caspase-12的mRNA和蛋白表達水平顯著性升高(P0.05)。Salubrinal+1%低氧組軟骨細(xì)胞GRP78、GRP94、CHOP、Caspase-12的mRNA和蛋白水平上的表達較1%低氧組顯著降低(P0.05)。[結(jié)論]1.大鼠髁突關(guān)節(jié)軟骨在壓應(yīng)力刺激作用下處于缺氧狀態(tài)。2.1%低氧刺激作用30h可以誘導(dǎo)大鼠髁突軟骨細(xì)胞發(fā)生ERS,從而導(dǎo)致凋亡。3. Salubrinal可以通過抑制大鼠髁突軟骨細(xì)胞發(fā)生ERS,對體內(nèi)外低氧刺激誘導(dǎo)的凋亡起保護作用。
[Abstract]:In the first part , the protective effects of ERS reaction on the apoptosis of condylar cartilage cells induced by cyclic stretch stimulation were studied . The experimental results were as follows : 3 - week - old SD rats were selected to carry out primary culture of condylar cartilage .
The levels of GRP78 , GRP94 , CHOP and Caspase - 12 were detected by RT - qPCR . The levels of GRP78 , GRP94 , CHOP and Caspase - 12 were detected by Western blot . The protective effects of ERS on the apoptosis of condylar cartilage cells in rats induced by hypoxia were studied .
The expressions of GRP78 , GRP94 , CHOP , Caspase - 12 and Hif - 1偽 were detected by RT - qPCR . The expression levels of GRP78 , GRP94 , CHOP , Caspase - 12 and Hif - 1偽 protein in each group were significantly decreased by RT - qPCR ( P0.05 ) .
The expression of GRP78 , GRP94 , CHOP , Caspase - 12 mRNA and protein in condylar cartilage cells increased significantly ( P0.05 ) . By inhibiting the occurrence of ERS in the condylar cartilage cells of rats , the apoptosis of rat condylar cartilage cells induced by external hypoxic stimulation could be protected .
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R782

【共引文獻】

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本文編號：1898369