本文選題：甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子- + 持續(xù)表達�。� 參考：《華西口腔醫(yī)學雜志》2014年04期

【摘要】：目的建立腭裂相關(guān)基因甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-2(TTF-2)轉(zhuǎn)基因小鼠模型,利用轉(zhuǎn)基因動物模型研究TTF-2基因的活動規(guī)律和表達模式發(fā)生變化時對腭突發(fā)育過程產(chǎn)生的影響。方法采用聚合酶鏈反應法擴增C57BL/6J小鼠基因組TTF-2基因,將其定向插入pBROAD3-mcs載體,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pBROAD3-TTF-2,利用顯微注射技術(shù)把線性化表達載體注射到受精卵的雄原核中,建立TTF-2轉(zhuǎn)基因小鼠。利用特異引物聚合酶鏈反應和Southern blot方法鑒定轉(zhuǎn)基因小鼠的基因型,采用免疫組織化學法檢測TTF-2基因在轉(zhuǎn)基因小鼠腭突組織中的表達。結(jié)果共注射原核期受精卵982枚,發(fā)育為2-細胞胚胎的580枚,均移植入48個假孕受體昆明白小鼠中,得到胎鼠68只。提取基因組DNA,發(fā)現(xiàn)有13只轉(zhuǎn)基因陽性的胎鼠。免疫組織化學法檢測顯示TTF-2在轉(zhuǎn)基因小鼠腭突中持續(xù)表達。結(jié)論通過顯微注射法使外源基因pBROAD3-TTF-2整合入小鼠基因組中,成功建立了腭突持續(xù)表達TTF-2的轉(zhuǎn)基因小鼠模型,其表現(xiàn)型為腭裂。
[Abstract]:Objective to establish a transgenic mouse model of cleft palate related gene thyroid transcription factor-2 TTF-2, and to study the effect of TTF-2 gene activity and expression pattern on the development of palatine process by transgenic animal model. Methods the genomic TTF-2 gene of C57BL/6J mice was amplified by polymerase chain reaction and inserted into the pBROAD3-mcs vector. The recombinant expression plasmid pBROAD3-TTF-2 was constructed. The linearized expression vector was injected into the male prokaryotic cells of fertilized eggs by microinjection technique. TTF-2 transgenic mice were established. The genotypes of transgenic mice were identified by specific primer polymerase chain reaction (PCR) and Southern blot method. The expression of TTF-2 gene in palatine process of transgenic mice was detected by immunohistochemistry. Results A total of 982 fertilized eggs were injected into Kunming white mice with 48 pseudopregnant receptors, and 68 fetal mice were obtained. Genomic DNA was extracted and 13 transgenic fetal mice were found. Immunohistochemical staining showed that TTF-2 was expressed continuously in the palatal process of transgenic mice. Conclusion the transgenic mouse model of persistent expression of TTF-2 in palatine process was successfully established by microinjection of exogenous gene pBROAD3-TTF-2 into the mouse genome, and the phenotype was cleft palate.
【作者單位】： 廣州市第一人民醫(yī)院口腔科;口腔疾病研究國家重點實驗室華西口腔醫(yī)院(四川大學);口腔疾病研究國家重點實驗室華西口腔醫(yī)院(四川大學)唇腭裂外科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(30171020)
【分類號】：R782.2

【參考文獻】

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【共引文獻】

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【二級參考文獻】

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本文編號：1881786