本文選題：低強度超聲 + IL-1β�。� 參考：《山東大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:本實驗的目的是探究低強度超聲作用于體外白介素1β因子刺激下大鼠顳下頜軟骨細胞中Wnt/β-catenin信號通路的變化,以及LIPUS對顳下頜軟骨細胞的骨保護作用。方法:取4周齡Wistar大鼠髁突軟骨細胞,于體外培養(yǎng)。在無菌的條件下,取雙側髁突組織,用含有雙抗的PBS,沖洗、剝離髁突軟骨,反復剪切至1mm3大小,首先在37℃環(huán)境下用0.25%濃度的胰蛋白酶消化30分鐘,然后37℃振蕩加入濃度為0.2%的Ⅱ型膠原酶,1-2小時消化完后、分離原代軟骨細胞并培養(yǎng),原代軟骨細胞生長、形態(tài)變化,通過每天用倒置光學顯微鏡觀測,并用細胞形態(tài)學、Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色、Ⅱ型膠原免疫熒光染色方法,來鑒定培養(yǎng)結果。隨機將髁突軟骨細胞第二代分為四組,分別用0、1、5、1Ong/mlIL-1β處理48小時,對各組之間 Wnt3a、β-catenin、GSK3β、p-GSK3β、DKK1、Ⅱ型膠原、AGG蛋白和mRNA表達量進行檢測,并篩選出能造成髁突軟骨細胞炎性狀態(tài)的IL-1β最佳濃度和檢測IL-1β改變對于Wnt/β-catenin通路的不同影響;取已鑒定的髁突軟骨細胞P2隨機分為五組:對照組,細胞不做任何處理;IL-1β組,10ng/mlIL-1β 處理 48 小時;LIPUS 組,10ng/mlIL-1β 處理 48 小時后 LIPUS每天處理20分鐘,共七天�？瞻踪|粒+LIPUS組:10ng/mlIL-1β處理48小時,提前48小時加入空載質粒后LIPUS每天處理20分鐘,共七天。siRNA+LIPUS組:10ng/mlIL-1β處理48小時,提前48小時加入DKK1干擾質粒siRNA后LIPUS每天處理20分鐘,共七天。分別用western blotting檢測各組之間Wnt3a、β-catenin、GSK3β、p-GSK3β、DKK1、Ⅱ型膠原、AGG 的蛋白表達量;qRT-PCR檢測各組 Wnt3a、β-catenin、GSK3β、p-GSK3β、DKK1、Ⅱ型膠原、AGG mRNA表達量;倒置熒光顯微鏡觀測siRNA對于軟骨細胞的轉染情況。結果:(1)消化髁突,提取軟骨細胞接種,觀察見細胞呈形態(tài)規(guī)則、小圓形。一天后,細胞多數(shù)貼壁,鏡下觀察可呈多邊形或者星形;5天后,可觀察到"鋪路石"樣。經一次傳代后,細胞貼壁的速度明顯變快,勻稱分布;據(jù)我們觀察在4代以內,軟骨細胞增殖速率較快。在此以后,髁突軟骨細胞呈長梭形,出現(xiàn)"去極化"現(xiàn)象,生長速度加快。胞漿內可見有棕黃色顆粒和紅色熒光顆粒,通過Ⅱ型膠原免疫細胞化學和細胞免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)。(2)1Ong/mlIL-1β降低髁突軟骨細胞Ⅱ型膠原和AGG表達的效果最明顯,對于Wnt/β-catenin通路有顯著促進作用,同時DKK1表達升高。(3)低強度超聲干預炎性髁突軟骨細胞后,collagenⅡ、AGG表達水平明顯升高,Wnt3a、β-catenin、GSK3β下降,DKK1表達升高;低強度超聲干預并加入DKK1干擾RNA后,DKK1,collagenⅡ、AGG表達水平下降,Wnt3a、β-catenin、GSK3β表達升高。結論:低強度超聲通過抑制Wnt/β-catenin信號通路并且刺激細胞外基質的產生,一定程度上阻斷并抑制了骨關節(jié)炎退行性變化,對骨關節(jié)炎有潛在的治療保護作用。本實驗增強了低強度超聲對于骨關節(jié)炎的潛在骨保護作用的認識理解,并且需要更多的臨床研究用于證實這一效果,為臨床治療TMJ-OA提供新方式。
[Abstract]:Objective : To investigate the changes of Wnt / 尾 - catenin signaling pathway in rat temporo - mandibular cartilage cells induced by low - intensity ultrasound and to investigate the effect of LIPUS on the bone protection of temporo - mandibular cartilage cells . The expressions of Wnt3a , 尾 - catenin , GSK3 尾 , p - GSK3 尾 , DKK1 , 鈪，

本文編號：1815447