本文選題：唾液腺 + 腺樣囊性癌　； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的: 唾液腺腺樣囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma, SACC）是唾液腺最為常見的惡性腫瘤之一，發(fā)生于唾液腺的任何部位。腫瘤惡性程度高，容易沿神經(jīng)、血管浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，術(shù)后常復(fù)發(fā)，也可發(fā)生肺、骨、腦和肝等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。由于腫瘤的惡性生物學(xué)行為，直接威脅患者生命，目前術(shù)后尚無有效的治療方法。 B淋巴細(xì)胞瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2, bcl-2）基因是一種抑制細(xì)胞凋亡的癌基因，在眾多凋亡相關(guān)基因中bcl-2是目前最受關(guān)注的基因之一。定位于人的濾泡性淋巴瘤和正常B淋巴細(xì)胞染色體18號(hào)21區(qū)，含3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子，可編碼26kD的bcl-2α和22kD的bcl-2β兩種蛋白，其中bcl-2α是抑制凋亡作用發(fā)揮的主要蛋白，為線粒體膜的整合蛋白。它最先是在人類濾泡型淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)，被認(rèn)為是人類濾泡型淋巴瘤的細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)志，但后來研究發(fā)現(xiàn)，它在人類腫瘤中有廣泛意義。在許多腫瘤組織中，bcl-2基因的表達(dá)水平通常會(huì)發(fā)生改變，它與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)。 RANi（RNA interference）即RNA干擾，是目前應(yīng)用較廣的一種基因研究技術(shù)，是由外源或內(nèi)源的雙鏈RNA（double strand RNA, dsRNA）導(dǎo)入細(xì)胞而引起的與dsRNA同源的mRNA降解，從而抑制其相應(yīng)的基因表達(dá)。RNAi具有高特異性、高效性、高穩(wěn)定性、可遺傳性、可擴(kuò)散性和濃度時(shí)間依賴性等特點(diǎn)。利用RNAi技術(shù)，，在RNA水平特異性抑制特定基因的表達(dá)，使特定基因獲得功能性喪失，從而成為研究基因功能的良好工具。 本實(shí)驗(yàn)采用RNA干擾（RNAi）技術(shù)特異性沉默人唾液腺腺樣囊性癌SACC-83細(xì)胞中的bcl-2基因，探討基因沉默后SACC-83細(xì)胞的形態(tài)變化及凋亡情況。 方法： 1重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定：武漢淅瑪生物技術(shù)公司受本實(shí)驗(yàn)室委托，設(shè)計(jì)并構(gòu)建重組腺病毒包裹的shRNA-bcl-2，使用雙酶切進(jìn)行鑒定。 2細(xì)胞培養(yǎng)：采用含15%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)人唾液腺腺樣囊性癌細(xì)胞株SACC-83。 3細(xì)胞轉(zhuǎn)染及滴度測(cè)定：將腺病毒介導(dǎo)的shRNA真核表達(dá)載體shRNA-bcl-2（沉默組）和shRNA-HK（陰性對(duì)照）轉(zhuǎn)染SACC-83細(xì)胞，沉默其bcl-2基因的表達(dá)（最佳腺病毒滴度MOI為腺病毒

本文編號(hào)：1799309