本文選題：修復(fù)性牙本質(zhì) + 牙髓細(xì)胞　； 參考：《武漢大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：牙齒在受到外界嚴(yán)重的損傷刺激后,牙髓腔周圍的成牙本質(zhì)細(xì)胞死亡,牙髓細(xì)胞中的干細(xì)胞/祖細(xì)胞就會(huì)遷移到損傷部位,分化形成成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞,并分泌細(xì)胞基質(zhì),形成修復(fù)性牙本質(zhì)。目前,牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化的機(jī)制不是很清楚。 很多研究表明,P-catenin在牙齒的發(fā)育過程中起至關(guān)重要的作用。例如間充質(zhì)特異性敲除P-catenin使發(fā)育中的牙胚停滯于蕾狀期。并且有不少研究表明,牙齒發(fā)育和牙齒的修復(fù)再生存在許多共同調(diào)控機(jī)制。然而P-catenin在牙齒修復(fù)再生過程中的作用不清楚。有研究表明,在間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨,成軟骨,成脂肪分化過程中,p-catenin起重要作用。因此,P-catenin很可能調(diào)控修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化。 P-catenin能夠進(jìn)入細(xì)胞核與多種輔助因子(co-factors)共同啟動(dòng)靶基因的表達(dá)。其在不同的生物學(xué)過程中通過調(diào)控不同的靶基因產(chǎn)生不同的生物學(xué)效應(yīng)。不少研究表明,Runx2是成牙分化和成骨分化中重要的轉(zhuǎn)錄因子,它能啟動(dòng)成牙/成骨相關(guān)標(biāo)志基因的轉(zhuǎn)錄。從而調(diào)控成牙和成骨方向分化。研究表明,Runx2能正向調(diào)控DSPP基因的轉(zhuǎn)錄,從而促進(jìn)成牙分化。值得注意的是,Gaur et al.(2005)在小鼠MC3T3細(xì)胞系成骨分化的研究中報(bào)道β-catenin能夠結(jié)合Runx2的啟動(dòng)子區(qū)并且啟動(dòng)Runx2的表達(dá)。因此,我們推測(cè)β-catenin在牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化中的作用很可能是通過調(diào)控Runx2。 本研究重點(diǎn)探討：①β-catenin在大鼠修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中的表達(dá)規(guī)律。②β-catenin在人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程中的作用。③β-catenin是否通過Runx2促進(jìn)牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化。 第一部分P-catenin在大鼠修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中的表達(dá)規(guī)律研究 目的：觀察P-catenin在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中的表達(dá)分布,初步探討P-catenin是否參與修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程。 方法：采用24只Wistar雄性大鼠,對(duì)其上頜第一磨牙進(jìn)行MTA直接蓋髓術(shù),分別在0天、7天和14天處死大鼠,分離上頜骨,制作組織切片,HE染色觀察修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程,免疫組織化學(xué)染色分析P-catenin在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中的表達(dá)規(guī)律。 結(jié)果：直接蓋髓術(shù)后的第7天,修復(fù)性牙本質(zhì)形成于穿髓孔下方,β-catenin強(qiáng)表達(dá)于修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中穿髓孔下方的牙髓細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞,特別是圍繞在修復(fù)性牙本質(zhì)周圍的牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞,β-catenin呈強(qiáng)表達(dá),并且胞核著色較深。第14天,穿髓孔下方形成的修復(fù)性牙本質(zhì)橋?qū)⒋┧杩淄耆忾]。β-catenin的表達(dá)方式與術(shù)后7天基本一致,強(qiáng)表達(dá)在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中穿髓孔下方的牙髓細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞,并且胞核著色較深。 結(jié)論：β-catenin參與修復(fù)性牙本質(zhì)的形成過程,并且可能在牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程中起作用。 第二部分β-catenin在人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程中作用的研究 目的：觀察人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞分化過程中β-catenin的表達(dá)規(guī)律,并且進(jìn)一步觀察β-catenin抑制表達(dá)和β-catenin胞內(nèi)積聚對(duì)人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化的影響,探討β-catenin在人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程中的作用。 方法：利用β-磷酸甘油鈉、地塞米松和抗壞血酸誘導(dǎo)人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化,通過茜素紅染色,堿性磷酸酶活性及成牙本質(zhì)細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)鑒定人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化模型。通過Q-PCR和Western blot檢測(cè)β-catenin在人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程的表達(dá)規(guī)律。采用慢病毒介導(dǎo)的shRNA抑制β-catenin的表達(dá)和LiC1來促進(jìn)β-catenin的胞內(nèi)積聚,觀察抑制β-catenin的表達(dá)和促進(jìn)β-catenin的胞內(nèi)積聚后,礦化結(jié)節(jié)形成的改變及成牙本質(zhì)細(xì)胞分化相關(guān)基因表達(dá)的改變。 結(jié)果：在誘導(dǎo)人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程中,礦化結(jié)節(jié)形成,堿性磷酸酶的活性水平逐漸升高,成牙本質(zhì)細(xì)胞分化相關(guān)基因DSPP,DMP-1,BSP,OCN的表達(dá)顯著上調(diào)。在人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程中,β-catenin的基因及蛋白水平的表達(dá)都呈逐漸升高趨勢(shì)。慢病毒抑制β-catenin的表達(dá)后,礦化結(jié)節(jié)形成減少,成牙本質(zhì)細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)下降。LiC1促進(jìn)β-catenin的胞內(nèi)積聚后,礦化結(jié)節(jié)形成增加,成牙本質(zhì)細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)升高。 結(jié)論：β-catenin能夠促進(jìn)人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化。 第三部分P-catenin通過Runx2促進(jìn)牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化 目的：探討β-catenin在牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞分化過程中的作用機(jī)制,確定β-catenin是否通過調(diào)控Runx2的表達(dá)來調(diào)控牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化,并確定該機(jī)制是否也參與修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程。 方法：通過免疫組化檢測(cè)Runx2在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中的表達(dá)規(guī)律及β-catenin與Runx2在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中的定位關(guān)系。通過Q-PCR和Western blot檢測(cè)人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程中Runx2的動(dòng)態(tài)表達(dá)規(guī)律。觀察抑制β-catenin的表達(dá)或者促進(jìn)β-catenin的胞內(nèi)積聚后,Runx2的表達(dá)情況。通過ChIP實(shí)驗(yàn)檢測(cè)隨著牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程中,β-catenin對(duì)Runx2的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合率的改變。并且檢測(cè)抑制β-catenin的表達(dá)和促進(jìn)β-catenin的胞內(nèi)積聚對(duì)該結(jié)合率的影響。 結(jié)果：在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中,Runx2的表達(dá)與β-catenin的表達(dá)模式基本一致,并且Runx2和β-catenin共表達(dá)在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞和穿髓孔下方的牙髓細(xì)胞。在人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程中,Runx2的表達(dá)升高。抑制β-catenin的表達(dá),Runx2的表達(dá)受到抑制。相反,β-catenin的胞內(nèi)積聚能夠促進(jìn)Runx2的表達(dá)。免疫共沉淀的結(jié)果顯示,人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程中,β-catenin對(duì)Runx2啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合率增高。抑制β-catenin的表達(dá),β-catenin對(duì)Runx2啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合率降低。相反,β-catenin的胞內(nèi)積聚增加了β-catenin對(duì)Runx2啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合率。 結(jié)論：β-catenin能夠通過啟動(dòng)Runx2的表達(dá)促進(jìn)牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化。該機(jī)制可能在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中起作用。
[Abstract]:After being stimulated by external serious injury , the odontoblasts surrounding the pulpitis die , and the stem cells / progenitor cells in the dental pulp cells migrate to the injured site , differentiate into odontoblast - like cells and secrete the cell matrix to form the restorative dentin .

Many studies have shown that P - catenin plays an important role in the development of teeth . For example , P - catenin plays an important role in the development of teeth .

The study shows that Runx2 can regulate the transcription of DSPP gene by regulating the transcription of DSPP gene . The results show that Runx2 can regulate the transcription of DSPP gene and activate the expression of Runx2 .

This study focused on the expression of 尾 - catenin in the formation of rat dental pulp . 鈶，

本文編號(hào)：1790552