本文選題：髁突軟骨細胞　切入點：激活素受體樣激酶2　出處：《吉林大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:探討激活素受體樣激酶2對小鼠髁突軟骨細胞的增殖及其向軟骨方向分化的作用。方法:(1)采用1月齡C57雄性小鼠(體重約12-15 g),采取酶消化法提取髁突軟骨細胞,倒置顯微鏡觀察小鼠髁突軟骨細胞形態(tài)。(2)通過免疫組化染色方法檢測COLⅠ、aggrecan、COLⅡ的水平及其在細胞內(nèi)的分布。采用pellet方法培養(yǎng)髁突軟骨細胞,并誘導其向軟骨細胞分化。一方面提取細胞m RNA,采用實時定量RT-PCR方法檢測軟骨標志基因的表達(Sox9、ColⅡ、ColⅩ、ColⅠ),另一方面將細胞團塊切片進行HE及甲苯胺藍染色。(3)采用si RNA沉默小鼠髁突軟骨細胞中Alk2基因的表達。流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率,實時定量RT-PCR檢測沉默效率,確定最佳沉默條件。(4)轉(zhuǎn)染后1 d、2 d通過MTT法檢測髁突軟骨細胞的增殖,轉(zhuǎn)染后3 d、7 d通過實時定量RT-PCR方法檢測軟骨細胞標志基因的表達。結(jié)果:(1)倒置顯微鏡觀察體外培養(yǎng)的小鼠髁突軟骨細胞形態(tài),細胞呈多角星型。(2)第二代髁突軟骨細胞進行細胞爬片免疫組化染色顯示COLⅠ強陽性,aggrecan弱陽性,COLⅡ弱陽性。Pellet培養(yǎng)7 d后實時定量RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)ColⅡ、ColⅩ和ColⅠ表達上調(diào)。切片HE顯示pellet的表層似纖維細胞,形態(tài)扁平,表層下見大量圓形細胞似成熟軟骨細胞,球中心見大量缺氧及缺乏營養(yǎng)而至死的細胞團。切片甲苯胺藍染色發(fā)現(xiàn)其表層下的似成熟軟骨細胞樣細胞呈現(xiàn)異染色。從形態(tài)學、免疫表型和基因表達水平鑒定所分離的細胞是髁突軟骨細胞。(3)Lipo-si RNA轉(zhuǎn)染小鼠髁突軟骨細胞,流式檢測技術(shù)測轉(zhuǎn)染效率為77.27%。Lipo-Alk2-si RNA轉(zhuǎn)染細胞,實時定量RT-PCR測沉默效率為83%。(4)MTT結(jié)果顯示Alk2基因沉默后細胞數(shù)量增加,實時定量RT-PCR結(jié)果顯示Alk2基因沉默后軟骨細胞相關(guān)基因表達下調(diào),并有顯著統(tǒng)計學意義。結(jié)論:ALK2抑制小鼠髁突軟骨細胞的增殖,但是促進小鼠髁突軟骨細胞的成軟骨向分化。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of activin receptor-like kinase 2 (Activin receptor like kinase 2) on the proliferation and cartilage differentiation of mouse condylar chondrocytes.Methods the chondrocytes of condylar process were extracted by enzyme digestion from 1 month old C57 male mice (weight about 12-15 g).The morphology of mouse condylar chondrocytes was observed by inverted microscope. The level and distribution of COL 鈪，

本文編號：1722316