本文選題：T2DM　切入點(diǎn)：大鼠　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：研究背景 隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展和對(duì)于疾病發(fā)病機(jī)理的不斷研究,慢性炎癥受到廣泛關(guān)注。糖尿病和牙周炎均為多發(fā)高發(fā)的慢性疾病,慢性炎癥是二者聯(lián)系的紐帶。牙周炎是由牙周局部菌斑生物膜作為始動(dòng)因素,以牙周組織破壞,牙槽骨吸收和病理性深牙周袋作為主要特征,以牙齒脫落為最終結(jié)局的一種慢性疾病。越來越多研究發(fā)現(xiàn),牙周炎作為局部慢性炎癥,可能通過多種途徑影響全身其它系統(tǒng)的功能,促進(jìn)多種慢性疾病的發(fā)生發(fā)展。 目前,大量研究表明慢性牙周炎和全身系統(tǒng)的多種疾病相關(guān),其中與II型糖尿病(type2diabetes mellitus T2DM)的關(guān)系是研究的熱點(diǎn)。II型糖尿病是一種以胰島素抵抗,胰島素敏感性下降為主要特征的內(nèi)分泌代謝性疾病,晚期多種并發(fā)癥可以累及全身多臟器多系統(tǒng)。由于II型糖尿病具有高發(fā)病率、高死亡率和高致殘率的特征,因此被世界衛(wèi)生組織列為的嚴(yán)重影響人類健康的三大疾病之一。II型糖尿病和慢性牙周炎具有相同危險(xiǎn)因素和遺傳背景,高齡、吸煙、心血管疾病、白細(xì)胞功能障礙和精神壓力因素均為兩種慢性疾病的共有的危險(xiǎn)因素。研究證實(shí)II型糖尿病能夠促進(jìn)牙周炎的發(fā)生,是其重要促進(jìn)因素；慢性牙周炎可加重機(jī)體全身炎癥狀態(tài),長(zhǎng)期局部的炎癥造成機(jī)體的炎癥應(yīng)激狀態(tài),促進(jìn)全身炎癥因子水平升高及胰島素抵抗,不利于血糖控制；長(zhǎng)期的低度炎癥狀態(tài)導(dǎo)致體內(nèi)的炎癥信號(hào)分子水平升高,機(jī)體的各臟器進(jìn)行一些適應(yīng)炎癥狀態(tài)的功能改變,最終導(dǎo)可能致內(nèi)環(huán)境失衡發(fā)生系統(tǒng)性疾病。 脂代謝異常是Ⅱ型糖尿病的一個(gè)重要表現(xiàn),主要為血脂的異常和脂肪堆積異常,是機(jī)體一種慢性炎癥狀態(tài),具有內(nèi)分泌功能的脂肪細(xì)胞可釋放大量的脂肪細(xì)胞因子,在局部或全身發(fā)揮其生物學(xué)活性,調(diào)控能量代謝,參與免疫炎癥反應(yīng),促進(jìn)Ⅱ型糖尿病胰島素抵抗的發(fā)生。同時(shí),血脂異常是心血管疾病的重要危險(xiǎn)因素,能大大增加糖尿病患者發(fā)生心血管意外的風(fēng)險(xiǎn)。 本研究通過檢測(cè)糖尿病復(fù)合牙周炎的人群,在控制牙周局部炎癥因素后,血清中脂代謝指標(biāo)的改變情況及脂代謝因子的改變情況,探討牙周炎癥對(duì)于糖尿病機(jī)體脂代謝及相關(guān)脂肪細(xì)胞因子的影響；為探討初步機(jī)制,利用自發(fā)性非胰島素依賴的大鼠模型(OLETF大鼠),建立復(fù)合牙周炎動(dòng)物模型,排除混雜因素的干擾,通過檢測(cè)牙周炎癥對(duì)Ⅱ型糖尿病脂肪組織炎癥及血脂代謝的影響,初步探討牙周炎癥對(duì)于脂肪組織影響的可能機(jī)制,為牙周炎與Ⅱ型糖尿病的相互關(guān)系建立實(shí)驗(yàn)平臺(tái),提供理論基礎(chǔ)。 第一章牙周基礎(chǔ)治療對(duì)于牙周炎伴糖尿病患者的脂代謝影響 目的 通過對(duì)糖尿病伴牙周炎患者人群采用牙周基礎(chǔ)治療控制牙周局部炎癥,分析患者血脂以及炎癥因子水平的改變,以探討牙周局部炎癥對(duì)糖尿病機(jī)體脂代謝影響。 方法 利用本課題組前期收集的92名Ⅱ型糖尿病合并牙周炎患者,在牙周基礎(chǔ)治療前后,收集牙周局部相關(guān)指標(biāo)、血清及其相關(guān)資料。將患者在采用隨機(jī)數(shù)字表按照2：1分為原治療分和對(duì)照組,然后進(jìn)一步按照牙周炎的嚴(yán)重程度分層分為：廣泛性重度牙周炎(SP)和一般牙周炎(CP)。采集術(shù)前口腔數(shù)據(jù)和血清后,治療組接受牙周基礎(chǔ)治療,對(duì)照組不做任何處理,術(shù)后3個(gè)月復(fù)診再次采集口腔數(shù)據(jù)及血清。牙周基礎(chǔ)治療包括：口腔衛(wèi)生宣傳教育,全口齦上潔治術(shù),齦下刮治術(shù)和根面平整,拔除無法保留的患牙和調(diào)牙合；所有基礎(chǔ)治療均由同一名有經(jīng)驗(yàn)的牙周醫(yī)師完成。 牙周檢查指標(biāo)如下：牙周袋探針深度(PD),附著喪失(AL)；探針出血(BOP)；菌斑指數(shù)(PLI)。血清采集后立刻上自動(dòng)生化儀(ACA)檢測(cè)：空腹血糖、糖化血紅蛋白(HbAlc);總甘油三酯(TG)；總膽固醇(TC)；低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)。血清采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)：脂肪酸結(jié)合蛋白4(FABP4)、脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)和脂聯(lián)素(Adiponectin)。 同一指標(biāo)治療前后兩次的差值作為統(tǒng)計(jì)的指標(biāo),采用2×2的析因設(shè)計(jì)的方差分析統(tǒng)計(jì)比較整體差異,兩組間單因素?cái)?shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；同一處理因素兩個(gè)不同水平之間以及同一水平不同處理因素之間的比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。 結(jié)果 92名患者以2：1隨機(jī)分配,治療組60人,對(duì)照組32人,然后按照牙周炎癥程度進(jìn)一步將兩組患者分層。 治療組人群在牙周治療后牙周局部情況明顯改善,探診出血位點(diǎn)比例(-22.46±16.90),牙菌斑比例(0.38±0.36)、牙周袋探診深度大于4mm位點(diǎn)的百分率(-7.61±10.50)、附著喪失小于5mm位點(diǎn)比例(-5.28±9.66)均出現(xiàn)了明顯改。對(duì)照組亦出現(xiàn)一定程度的改善；與對(duì)照組相比,治療組各指標(biāo)改善顯著優(yōu)于對(duì)照組。提示牙周基礎(chǔ)治療能夠顯著改善糖尿病患者的牙周局部炎癥狀況。 治療組人群的HbAlc在治療3個(gè)月后出現(xiàn)了下降(-0.20±1.01),對(duì)照組人群HbAlc在3個(gè)月后出現(xiàn)了上升(0.49±1.22),方差分析表明兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=8.121,p=0.005)；牙周基礎(chǔ)治療后,不同程度的牙周炎患者的HbAlc下降有所不同,重度牙周炎患者中治療組相對(duì)于對(duì)照組有降低的趨勢(shì)(t=-1.890,P=0.065),但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.133,P0.716)。 甘油三酯水平(TG)在治療3個(gè)月后,治療組出現(xiàn)了下降(-0.38±0.90),對(duì)照組也出現(xiàn)不同程度的下降(-0.11±0.67)；方差分析表明雖然治療組和對(duì)照組之間沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=2.293,P0.134)但是牙周基礎(chǔ)治療對(duì)于炎癥程度不同的患者TG改變的水平不同,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=4.621P=0.034)；在重度牙周炎癥患者中,牙周治療比對(duì)照處TG水平顯著降低(t=-2.241,P=0.030)；同時(shí),治療組內(nèi),重度牙周炎癥患者TG降低顯著多于輕度患者(t=-2.774,P=0.007)。 試驗(yàn)中總膽固醇水平治療組出現(xiàn)了降低(-0.25±0.77),對(duì)照組也出現(xiàn)了降低(-0.45±1.56)；方差分析表明牙周基礎(chǔ)治療對(duì)于炎癥程度不同的患者總膽固醇改變的水平不同,在重度炎癥人群中治療組比對(duì)照組降低更多,但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-1.367,P=0.179)；在輕度炎癥人群中治療組比對(duì)照組下降明顯減少(t=2.197,P=0.033)。在治療組中重度炎癥人群降低水平多于輕度炎癥人群(t=-2.134,P=0.037)；在對(duì)照組中炎癥輕重兩組間沒有差異(t=1.496,P=0.145)。 高密度脂蛋白水平在實(shí)驗(yàn)中治療組出現(xiàn)了下降(-0.07±0.29),對(duì)照組也出現(xiàn)了下降了(-0.23±±0.35),不同炎癥程度的患者對(duì)于治療的反應(yīng)并沒有明顯的差異(F=2.012,P=0.160),但是治療組的高密度脂蛋白水平降低少于對(duì)照組(F=4.794,P=0.031)。在重度炎癥患者中治療組高密度脂蛋白濃度降低少于對(duì)照組(t=2.560,P=0.014),在輕度炎癥患者中沒有發(fā)現(xiàn)治療分組差異(t=0.543,P=0.590)。 低密度脂蛋白膽固醇水平中,治療組(-0.12±0.95)和對(duì)照組(-0.22±±1.17)在干預(yù)后出現(xiàn)了輕微下降,輕度炎癥人群出現(xiàn)了下降,但是牙周基礎(chǔ)治療對(duì)于牙周炎癥程度不同的人群之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.223,P=0.638)。 對(duì)于患者的炎癥反應(yīng)超敏C反應(yīng)蛋白患者干預(yù)后均有不同程度降低但是治療分組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(-0.40±1.15vs-0.17±0.79,F=1.043,,P=0.310),但是牙周炎癥程度不同的患者治療的效果不同(F=4.555,P=0.036),。重度牙周炎患者治療后超敏C反應(yīng)蛋白降低水平要高于輕度炎癥患者(t=-2.249,P=0.028),在重度炎癥患者中牙周基礎(chǔ)治療相對(duì)于對(duì)照能夠明顯降低超敏C反應(yīng)蛋白的水平(t=-2.604,P=0.013),這個(gè)結(jié)果在輕度炎癥患者中沒有見到(t=0.902,P=0.372)。 血清因子中FABP4水平在治療后三月都出現(xiàn)了上升,治療組(6.44±12.45),對(duì)照組(17.54,±22.32),治療組比對(duì)照組上升少(F=9.946,P=0.002)并且牙周基礎(chǔ)治療上升的幅度,在炎癥程度不同的患者間也有不同(F=5.420,P=0.022)。在重度炎癥患者中牙周基礎(chǔ)治療組上升幅度小于對(duì)照組(t=-3.184,P=0.006)；而在輕度炎癥患者中接受牙周基礎(chǔ)治療沒有發(fā)現(xiàn)明顯差異(t=-0.562,P=0.577)。脂聯(lián)素和脂多糖結(jié)合蛋白在因素間都沒有差異。 結(jié)論 1.牙周基礎(chǔ)治療能顯著改善II型糖尿病伴牙周炎患者的牙周局部炎癥。 2.牙周干預(yù)能夠改善II型糖尿病伴牙周炎患者的糖化血紅蛋白水平,提示牙周局部炎癥的控制可以在一定程度上改善機(jī)體糖代謝狀況。3.牙周基礎(chǔ)治療能夠在一定程度上影響糖尿病患者的血脂代謝。 第二章牙周炎對(duì)于OLETF糖尿病大鼠胰島素抵抗的影響 目的 通過利用OLETF大鼠建立糖尿病復(fù)合牙周炎模型,觀察牙周炎對(duì)于糖尿病大鼠胰島素抵抗及糖尿病發(fā)生發(fā)展的影響,為探討牙周炎對(duì)糖尿病大鼠脂肪功能及血脂代謝影響的病理機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 方法 (1)建模及分組：自發(fā)性2型糖尿病OLETF大鼠(0組),4周齡,雄性,30只；同種系同周齡糖耐量正常的LETO大鼠(L組)作為模型對(duì)照,雄性,20只。每4周行一次口服糖耐量試驗(yàn)監(jiān)測(cè)。在36周齡時(shí),有26只OLETF大鼠達(dá)到IGT期。將到達(dá)IGT期OLETF大鼠隨機(jī)分為兩組,一組附加牙周炎(0CP(+)組)(n=13),另外一組對(duì)照(O CP(-)組)(n=13)；LETO大鼠也隨機(jī)分為兩組,一組附加牙周炎(L CP(+)組)(n=l0),另一組為正常對(duì)照(L CP(-)組)(n=l0)。 (2)實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型的建立：全麻下結(jié)扎左、右上頜第一磨牙(molar1,M1)及第二磨牙(molar2, M2),并在結(jié)扎絲線涂抹四種牙周常見致病菌混懸液。每周檢查絲線,有脫落者及時(shí)重新結(jié)扎并涂菌。 (3)數(shù)據(jù)收集及指標(biāo)檢測(cè)：每4周監(jiān)測(cè)一次OGTT.體重,觀察其體重和血糖的變化。并在36周齡、46周齡和56周齡時(shí),尾靜脈采血測(cè)定其血清胰島素水平的動(dòng)態(tài)變化并計(jì)算糖尿病人胰島素抵抗穩(wěn)態(tài)模型(Homeostasis model assessment-insulin resistance HOMA-IR)值。 (4)樣本采集及模型評(píng)估：56周齡時(shí),處死所有實(shí)驗(yàn)大鼠,采集血清檢測(cè)大鼠血脂水平；收集組織樣本,頜骨樣本采用Micro-CT掃描,觀察牙周炎骨喪失情況,記錄牙槽骨體積喪失比率和骨高度喪失。 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：四組之間的整體比較采用2×2析因設(shè)計(jì)資料的方差分析,兩組間單因素?cái)?shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；同一處理因素兩個(gè)不同水平之間以及同一水平不同處理因素之間的比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。不同時(shí)間段多次測(cè)量的指標(biāo),總體各組和組內(nèi)都用用重復(fù)測(cè)量的方差分析。同一時(shí)間同一組內(nèi)有無干預(yù)的比較用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。 結(jié)果 口內(nèi)檢查：牙周炎大鼠發(fā)現(xiàn)牙頸部結(jié)扎處牙齦紅腫、牙槽骨吸收、牙周袋形成,并且大量牙齦退縮；對(duì)照組相應(yīng)牙齒的牙頸部牙齦色形質(zhì)正常,少量牙齦退縮,不能探及明顯牙周袋。OLETF大鼠組牙周炎嚴(yán)重于LETO組。 Micro-CT的三維重建顯示四組大鼠牙槽骨吸收體積,牙周炎組(CP(+)組)牙槽骨骨喪失量明顯高于對(duì)照組(CP(-)組)(0.457+0.067vs0.350±0.071, F=20.288,P=0.002),且0CP(+)組骨喪失體積要多于L CP(-)組骨喪失體積(0.516±0.021vs0.398±0.016, t=-7.659,P=0.002)。在線性吸收上牙周炎組高于對(duì)照組(2.75±0.13vs2.36±0.23,F=10.715,P=0.011)但是OLETF大鼠和LETO大鼠間沒有發(fā)現(xiàn)明顯差別(2.54±0.28vs2.56±0.28,F=0.014,P=0.910)。 OLETF大鼠表現(xiàn)為多食多飲多尿,倦怠少動(dòng),體重快速增加。從36周開始,L組大鼠的體重基本維持穩(wěn)定,中途稍微波動(dòng),0組大鼠體重穩(wěn)步升高兩組間有差異(F=8.405,P=0.007)；牙周炎分組兩組大鼠間沒有隨時(shí)間變化趨勢(shì)(F=0.727,P=0.401)。牙周炎對(duì)于糖尿病和非糖尿病大鼠的體重的影響也沒有區(qū)別(F=0.291,P=0.594)。 OLETF大鼠在實(shí)驗(yàn)中OGTT水平高于LETO大鼠(F=88.404,P=0.000);同時(shí)OLETF大鼠隨著周齡的增加,OGTT結(jié)果相對(duì)于LETO大鼠差距越來越大(F=9.478,P=0.005)。大鼠是否復(fù)合牙周炎對(duì)于大鼠的OGTT結(jié)果沒有影響(F=2.864,P=0.102),但是牙周炎有增加OLETF大鼠OGTT結(jié)果的趨勢(shì)(F=3.731,P=0.064)。 4組大鼠中OLETF大鼠胰島素抵抗程度嚴(yán)重于LETO組(F=951.493,P=0.000),并且隨大鼠周齡加重(F=88.261,P=0.000)；牙周炎組比對(duì)照組嚴(yán)重(F=22.119,P=0.000),并且隨牙周炎持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)而加重(F=10.844,P=0.003)。牙周炎能夠加重OLETF導(dǎo)致的胰島素抵抗(F=90.325,P=0.000)而且隨牙周炎持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)而加重(F=19.022,P=0.000)。 大鼠56周處死后檢測(cè)血清中胰島素含量OLETF組高于LETO組(27.58±13.27vs9.71+2.92, F=26.004, P=0.000),牙周炎組和對(duì)照組間沒有明顯差異(F=0.006,P=0.938)。 結(jié)論 1、絲線結(jié)扎復(fù)合局部涂病菌的方法能夠在OLETF大鼠模型上建立糖尿病復(fù)合牙周炎動(dòng)物模型,在一定程度上模擬糖尿病人群的牙周炎發(fā)病特征； 2、牙周炎可促進(jìn)糖尿病大鼠模型的胰島素抵抗的程度和進(jìn)度,不利于血糖控制,血清胰島素代償性增高,血脂增高,進(jìn)而惡化T2DM的進(jìn)程。 第三章牙周炎對(duì)于OLETF糖尿病大鼠脂肪代謝功能的影響 目的 通過OLETF糖尿病大鼠附加牙周炎,檢測(cè)慢性牙周炎對(duì)OLETF脂肪組織脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控以及血脂指標(biāo)的改變,探討牙周炎影響糖尿病大鼠脂肪代謝的可能機(jī)理。 方法 大鼠處死以后,立刻采集血液采用全自動(dòng)生化儀按說明書檢測(cè)大鼠血脂指標(biāo)甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)。血清凍存于-80℃,實(shí)驗(yàn)完成后采用ELISA檢測(cè)血清瘦素水平。 脂肪組織在大鼠處死時(shí)完整獲得,分割為5mm X5mm組織塊液氮凍存。腎周脂肪組織用常規(guī)qPCR檢測(cè)脂肪組織脂肪代謝代表基因表達(dá)情況,比較各組大鼠以上指標(biāo)的差異。 四組之間的整體比較采用2×2析因設(shè)計(jì)資料的方差分析,兩組間單因素?cái)?shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；同一處理因素兩個(gè)不同水平之間以及同一水平不同處理因素之間的比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。 結(jié)果 1、血脂指標(biāo)影響 四組大鼠血清總膽固醇中0CP(+)組最高(5.01±0.91),L CP(-)組最低(2.16±0.47), OLETF大鼠血清總膽固醇水平高于LETO大鼠(4.24±1.41vs2.22±0.47,F=6.374,P=0.018)。牙周炎使大鼠血清總膽固醇升高在OLETF大鼠比LETO大鼠多(F=4.743,P=0.038)。LETO大鼠復(fù)合牙周炎血清總膽固醇水平?jīng)]有明顯改變(t=-0.467,P=0.647),而在OLETF大鼠中復(fù)合牙周炎比對(duì)照組高血清總膽固醇水平高(t=-2.532,P=0.024)。 大鼠血清總甘油三酯水平,OLETF大鼠高于LETO大鼠(3.00±2.11vs0.91±0.64,F=15.847,P=O.000)。兩因素間沒有明顯交互作用(F=1.347,P=0.256)。 OLETF大鼠復(fù)合牙周炎組血清高密度脂蛋白膽固醇水平最低(1.48±0.43),LETO組最高(2.24±0.40); OLETF大鼠低于LETO大鼠(1.70±0.41vs2.09±0.56,F=4.889,P=O.035)。復(fù)合牙周炎對(duì)于OLETF和LETO大鼠血清高密度脂蛋白膽固醇水平影響沒有發(fā)現(xiàn)明顯差異(F=0.156,P=0.695),但是在OLETF大鼠中復(fù)合牙周炎組低于對(duì)照組(1.48±0.43vs1.91±0.27,t=2.415,P=0.030)。 對(duì)于低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)水平,OLETF組大鼠高于LETO組大鼠(0.68+0.17vs0.51+0.19, F=8.069,P=0.008),但是牙周炎分組和對(duì)照組間沒有發(fā)現(xiàn)差異(0.60+0.24vs0.59+0.15, F=0.056, P=0.815)牙周炎有使OLETF大鼠低密度脂蛋白膽固醇水平增高的趨勢(shì),但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.012P=0.055)。在OLETF大鼠中復(fù)合牙周炎組高于對(duì)照組,但是差距沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.75±0.08vs0.62±0.21,t=-1.741,P=0.104)。 2、牙周炎對(duì)于血清瘦素水平的影響 四組大鼠Leptin水平中,OLETF大鼠高于LETO大鼠(8.55±±6.53vs3.63±±1.46,F=14.213,P=0.001)。牙周炎能夠使OLETF大鼠血清Leptin水平增高高于LETO大鼠(F=13.773P=0.001)。0CP(+)組瘦素血清濃度高于0CP(-)組3倍(12.77±±6.53vs4.34±±2.88,t=-3.337,P=0.005),在LETO大鼠中牙周炎組與對(duì)照組Leptin的水平?jīng)]有差異(2.99±±1.35vs4.27±±1.35,t=-0.068,P=0.946)。 3、牙周炎對(duì)于大鼠脂肪組織脂肪代謝相關(guān)因子的轉(zhuǎn)錄水平影響 大鼠瘦素受體的基因表達(dá)水平,OLETF大鼠表達(dá)高于LETO大鼠(47.42±47.19vs4.38±3.2l,F=17.361,P=0.000)。牙周炎對(duì)于OLETF大鼠和LETO大鼠升高瘦素受體表達(dá)水平不同(F=5.281,P=0.029)。在OLETF大鼠中,牙周炎組Lepr表達(dá)水平也高于對(duì)照組(71.98±±54.62vs22.85±±20.23,t=-2.386,P=0.041) 在Nampt的轉(zhuǎn)錄水平上,OLETF大鼠比LETO大鼠表達(dá)水平高(112.44±±90.04vs50.48±±90.29,F=4.832,P=0.036),但是沒有發(fā)現(xiàn)牙周炎在OLETF大鼠和LETO大鼠中升高瘦素受體表達(dá)水平有差異(F=O.944,P=0.340)。在OLETF大鼠中牙周炎組轉(zhuǎn)錄水平高于對(duì)照組(169.39±85.90vs55.50±50.81,t=-3.228,P=0.006) 在FABP4的轉(zhuǎn)錄水平上,OLETF大鼠表達(dá)高于LETO大鼠(69.41±±45.49vs11.60±±13.57,F=27.142,P=0.000),但是牙周炎對(duì)于OLETF大鼠的改變和LETO大鼠的改變沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=1.601,P=0.216)。在OLETF大鼠中牙周炎組相對(duì)于對(duì)照組有升高的趨勢(shì),但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(88.49±±46.23vs50.34±38.30,t=-1.798,P=0.094)。 在蛋白質(zhì)表達(dá)水平,western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)牙周炎組OLETF大鼠比對(duì)照組OLETF大鼠表達(dá)Nampt水平增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但是沒有檢測(cè)到FABP4的改變。對(duì)于牙周炎OLETF大鼠和對(duì)照OLETF大鼠的脂肪組織行免疫組化染色,Nampt在組織中的分布部位沒有明顯差異,主要分布于胞漿中,脂肪組織和巨噬細(xì)胞包漿中都高表達(dá)。半定量分析Nampt免疫組化光密度值也沒有明顯差異。 結(jié)論 1、慢性牙周炎可能通過調(diào)控大鼠脂肪組織脂代謝相關(guān)基因的表達(dá),如Lepr、 Nampt、FABP4,從而在一定程度上影響機(jī)體脂肪組織脂代謝功能的改變。 2、慢性牙周炎在一定程度上可以影響糖尿病機(jī)體的血脂指標(biāo)和脂肪因子的水平,提示糖尿病大鼠機(jī)體暴露在牙周局部炎癥下時(shí),機(jī)體的脂代謝在某種程度上發(fā)生了改變。 第四章牙周炎對(duì)于OLETF大鼠脂肪因子和脂肪組織炎性標(biāo)志物的影響 目的 通過檢測(cè)各組大鼠血清中脂肪因子水平的差異和脂肪組織中炎性標(biāo)志物基因表達(dá)水平的差異,分析牙周炎對(duì)糖尿病大鼠脂肪組織的炎癥狀態(tài)改變的相關(guān)關(guān)系,探討T2DM狀態(tài)下,慢性牙周炎作為局部炎癥影響機(jī)體脂肪組織代謝的可能機(jī)制。 方法 采用RADPK-81K高效液相芯片試劑盒檢測(cè)大鼠血清IL-1β、PAI-1濃度。 采用熒光定量PCR檢測(cè)脂肪組織中炎癥標(biāo)志物的基因表達(dá)水平：CCR5、CXCR4、Emr1、IKBKB、Mapk8、Nf-κb1、Retn、TLR2和TLR4。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果四組之間的整體比較采用2×2析因設(shè)計(jì)資料的方差分析,兩組間單因素?cái)?shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；同一處理因素兩個(gè)不同水平之間以及同一水平不同處理因素之間的比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。分析脂肪組織炎癥指標(biāo)轉(zhuǎn)錄水平和血清指標(biāo)的相關(guān)性采用pearson相關(guān)檢驗(yàn) 結(jié)果 在CCR5表達(dá)水平上,OLETF大鼠高于LET0大鼠(8.76±7.86vs3.42±2.89,F=8.312,P=0.007),牙周炎組高于對(duì)照組(8.77±7.75vs3.40±3.14,F=8.407,P0.007),牙周炎對(duì)于OLETF大鼠和LET0大鼠的CCR5表達(dá)水平增高沒有差異(F=1.878,P0.181)。對(duì)于OLETF大鼠復(fù)合牙周炎相對(duì)于對(duì)照組CCR5表達(dá)水平有升高的趨勢(shì),但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(12.71±9.26vs4.80±3.29,t=-2.278,P=0.050)。 在CXCR4表達(dá)水平上,OLETF大鼠高于LETO大鼠(2.05±1.3l vs1.09±0.53,F=7.530,P=0.010),牙周炎組和對(duì)照組間沒有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,1.85±1.09vs1.29±1.09,F=2.530,P=0.123),牙周炎對(duì)于OLETF大鼠和LETO大鼠CXCR4表達(dá)水平上的作用也沒有檢測(cè)到明顯差異(F=0.269,P=0.608)。 在炎癥信號(hào)通路分子IKBKB表達(dá)水平上,OLETF大鼠表達(dá)水平高于LETO大鼠,137.23±126.40vs45.02±134.08,F=4.582,P=0.041),牙周炎組比對(duì)照組高,141.28±174.64vs40.96±51.21,F=5.422,P=0.027),牙周炎對(duì)于OLETF大鼠和LETO大鼠IKBKB表達(dá)沒有差異(F=0.880,P0.356)。在0LETF大鼠中牙周炎組比多找組IKBKB表達(dá)水平升高(207.59±141.05vs66.87±54.99,t=-2.629,P=0.027)。 脂肪組織Nf-K b1表達(dá)水平上,OLETF大鼠表達(dá)水平高于LETO大鼠(108.62±102.69vs9.01±12.79,F:19.986,P=0.000),牙周炎組比對(duì)照組高(89.79±112.82vs27.93±35.15,F:7.687,P=0.010),牙周炎升高0LETF大鼠Nf-K bl表達(dá)水平比升高LETO大鼠表達(dá)水平高,差距有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.758,P=0.038)。在OLETF大鼠中復(fù)合牙周炎組表達(dá)水平高于對(duì)照組(163.81±120.32vs53.43±34.01,t=-2.497,P=0.037)。 而對(duì)于MAPK8轉(zhuǎn)錄水平,0LETF大鼠脂肪組織表達(dá)高于LETO大鼠(6.70±4.18vs2.92±1.77,F=18.471,P=0.000),牙周炎組高于對(duì)照組(6.37±4.3lvs3.25±2.1l,F=12.567,P0.001),牙周炎升高OLETF大鼠MAPK8表達(dá)水平比升高LETO大鼠農(nóng)達(dá)水半高,差距有統(tǒng)計(jì)字意義(F=9.487,P=0.005)。在OLETF大鼠中,復(fù)合牙周炎組表達(dá)水平高于對(duì)照組(9.61±3.67vs3.79±2.16, t=-3.871,P=0.002). 對(duì)于TLR4轉(zhuǎn)錄水平,0LETF大鼠脂肪組織表達(dá)高于LET0大鼠(9.61±6.68vs3.66±5.18,F=8.894,P=0.006),牙周炎組高于對(duì)照組(8.82±7.86vs4.46±4.30,F=4.782,P=0.037),牙周炎升高OLETF大鼠TLR4表達(dá)水平和升高LETO大鼠表達(dá)水平?jīng)]有差異(F=0.932,P=0.343)。在OLETF大鼠中,復(fù)合牙周炎組有高于對(duì)照組的趨勢(shì),但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(12.75±7.16vs6.47±4.68,t=-2.078,P=0.057)。 在血清炎癥因子水平上,IL-1β水平四組間也有差異。OLETF大鼠高于LETO大鼠(68.08±33.85vs46.62±15.23,F=9.661,P=0.004),牙周炎組高于對(duì)照組(72.91±29.06vs41.78±16.17,F=20.331P=0.000),牙周炎對(duì)于OLETF大鼠比對(duì)于LETO大鼠升高IL-1β水平高(F=5.857P=0.022)。在OLETF大鼠中牙周炎組比對(duì)照組血清IL-1B水平高(91.99±28.31vs44.16±18.56,t=-3.996,P=-0.001)。 四組大鼠纖溶酶原激活劑抑制物-1的水平也檢測(cè)到差異.OLETF大鼠PAI-1血清水平高于LETO組(407.27±291.04vs237.09±140.96,F=5.131P=0.031,牙周炎組高于對(duì)照組(408.20±281.27vs236.17±158.49,F:5.243P=0.030)但是牙周炎升高OLETF大鼠PAI-1水平和升高LETO大鼠沒有明顯差異(F=1.494,P=-O.232)。在OLETF大鼠中牙周炎組比對(duì)照組血清PAI-1水平有增高的趨勢(shì),但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(539.21±317.37vs275.34±202.48,t=-1.983,P=0.067) 脂肪組織炎癥基因表達(dá)情況和血清中脂代謝指標(biāo)相關(guān)情況。各組數(shù)據(jù)均服從近似正態(tài)分布,且具有線性趨勢(shì)。脂肪組織中的炎癥基因表達(dá)升高,并且OLETF復(fù)合牙周炎組升高多于OLETF組。將脂肪組織中的已經(jīng)表達(dá)情況結(jié)合血清中脂代謝指標(biāo)和胰島素指標(biāo)可以看到。Nampt表達(dá)程度和血清中總膽固醇和甘油三酯水平有輕度相關(guān)性,和胰島素濃度具有中度相關(guān)性,和胰島素抵抗也有中度相關(guān)性,和糖耐量的受損情況有中度相關(guān)性,和血清甘油三酯濃度有輕度相關(guān)性。而隨著脂肪組織中核因子Nf-Kb1信號(hào)通路的Nf-Kb1和IKBKB逐漸激活,胰島素敏感性下降,糖耐量受損情況加重,在血清中胰島素濃度逐漸增加,血脂代謝紊亂加劇,總膽固醇水平升高,總甘油三酯水平升高,低密度脂蛋白膽固醇含量升高,高密度脂蛋白膽固醇水平下降。 結(jié)論 1.在糖尿病大鼠機(jī)體內(nèi),牙周炎能夠在一定程度上調(diào)控脂肪組織中炎癥分子的表達(dá)。 2.牙周炎促進(jìn)血清中脂肪因子水平的升高。 3.牙周炎情況下脂肪組織炎癥水平和血清中脂肪因子水平、血脂代謝指標(biāo)有相關(guān)性,提示牙周炎可能通過影響脂肪組織功能來促進(jìn)機(jī)體系統(tǒng)性炎癥。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R781.4;R587.1

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳元潔;費(fèi)愛華;賈典榮;方朝暉;;丹蛭降糖膠囊結(jié)合西藥對(duì)2型糖尿病大鼠脂肪因子的影響[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2009年02期

2 杜文華;石建華;黃奰齊;;脂聯(lián)素的研究現(xiàn)狀[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年01期

3 王亞軍;孫家邦;李非;孫海晨;;高脂血癥對(duì)大鼠急性胰腺炎影響及白蛋白的干預(yù)效應(yīng)[J];肝膽胰外科雜志;2008年04期

4 陳弼滄;吳秋英;;糖耐量異常與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系及中藥干預(yù)研究進(jìn)展[J];甘肅中醫(yī);2006年01期

5 趙柯湘;肖謙;;脂聯(lián)素與2型糖尿病及其慢性并發(fā)癥[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊(cè));2005年04期

6 楊澤華,解軍;脂聯(lián)素球狀結(jié)構(gòu)域研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè);2005年09期

7 王恒琨;鞏艷玲;王仁欣;鄭曉濤;張文峰;;39例糖尿病患者頜面部間隙感染診治[J];重慶醫(yī)學(xué);2013年28期

8 劉志榮;吳慶生;徐偉;金少華;王安蓮;;安徽省慢性病監(jiān)測(cè)點(diǎn)成人糖代謝異常流行特征分析[J];安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2013年05期

9 朱永香;王倩;王爽;于瑋;南瑛;曹健;;肥胖與食欲調(diào)控機(jī)制[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年05期

10 向旭;朱海杭;;糖尿病并發(fā)膽結(jié)石發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];國(guó)際消化病雜志;2013年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前3條

1 張奕;林杰義;羅瑋;黃少明;毛麗梅;;二十二碳六烯酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素表達(dá)的影響及其機(jī)制[A];營(yíng)養(yǎng)與老年代謝病——達(dá)能營(yíng)養(yǎng)中心第十四屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

2 成軍;;慢性HCV感染與肝脂肪變[A];第二屆全國(guó)病毒性肝炎慢性化重癥化基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

3 LI Min;WANG Qi;ZHANG Jin-qian;CHENG Jun;;The molecular mechanism of SREBP-1c expression regulated by HCV core protein[A];第二屆全國(guó)病毒性肝炎慢性化重癥化基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王捷思;沙棘籽渣黃酮對(duì)糖、脂代謝的調(diào)控及機(jī)理探討[D];華東師范大學(xué);2011年

2 楊敏;北京市漢族人群2型糖尿病的分子遺傳學(xué)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

3 李丙蓉;構(gòu)建人脂聯(lián)素基因重組腺病毒轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年

4 王s，

本文編號(hào)：1718411