本文選題：慢病毒載體　切入點(diǎn)：短發(fā)夾RNA　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》2014年11期

【摘要】：目的:探討特異性沉默促肝細(xì)胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver cell-1,PRL-1)基因表達(dá)對舌癌細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響。方法:設(shè)計、合成5條針對PRL-1基因的短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干擾序列,構(gòu)建于慢病毒載體質(zhì)粒中,PCR電泳及基因測序驗(yàn)證。轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,Western blot篩選最佳干擾序列,包裝產(chǎn)生慢病毒。轉(zhuǎn)染TCA8113細(xì)胞,篩選、建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株;real-time PCR檢測PRL-1基因沉默效率;劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)分別比較慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞(KD組)、空病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞(NC組)及TCA8113細(xì)胞(CON組)遷移、侵襲能力變化。結(jié)果:PCR電泳及基因測序證實(shí)5條sh RNA序列定向插入慢病毒載體質(zhì)粒中。Western blot篩選出PRL-1-sh RNA-1基因沉默效率最高,包裝獲得慢病毒滴度為7×108 TU/ml。通過轉(zhuǎn)染、篩選,建立了TCA8113細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株;real-time PCR測得PRL-1基因m RNA表達(dá)明顯下降(F=809.120,P=0.000);PRL-1基因沉默后細(xì)胞遷移能力降低,穿過人工基底膜的細(xì)胞數(shù)KD組(25.5±0.4)明顯少于NC組(81.5±2.0)和CON組(88.5±2.3)(F=1 092.970,P=0.000)。結(jié)論:沉默PRL-1基因表達(dá)能有效抑制舌癌細(xì)胞遷移、侵襲能力。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of specific silencing on the expression of 1(phosphatase of regenerating liver cell-1 (PRL-1) gene on the migration and invasion of tongue cancer cells.Methods: five interference sequences of short hairpin RNA(short hairpin RNAs targeting PRL-1 gene were designed and synthesized, and were constructed into lentivirus vector plasmids by polymerase chain reaction electrophoresis and gene sequencing.Western blot was transfected into 293T cells to screen the best interference sequence, and the lentivirus was produced by packaging.After transfection of TCA8113 cells, a stable transfection cell line real-time PCR was established to detect the silencing efficiency of PRL-1 gene. Scratch assay and Transwell assay were used to compare the effect of PRL-1 gene silencing on lentivirus-transfected cells (KD group, empty virus transfected cell group (NC group) and TCA8113 cell group (Con group)).Change in invasiveness.Results 5 sh RNA sequences were inserted into the plasmid of lentivirus vector. Western blot showed that PRL-1-sh RNA-1 gene silencing efficiency was the highest, and the lentivirus titer was 7 脳 108TU / ml.Conclusion: silencing the expression of PRL-1 gene can effectively inhibit the migration and invasion of tongue cancer cells.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院 口腔疾病與生物醫(yī)學(xué)重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：重慶市衛(wèi)生局重點(diǎn)資助項(xiàng)目(編號:2013-1-030)
【分類號】：R739.86

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1716798