本文選題：透明質(zhì)酸合酶2　切入點：Cal27　出處：《南京醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：癌相關(guān)成纖維細胞(carcinoma-associated fibroblasts, CAFs)是一類來源尚不清楚,位于腫瘤基質(zhì)中的生物學行為活躍的成纖維細胞。α-SMA(α-smooth muscle actin, α-平滑肌肌動蛋白)通常用于鑒定其表型。CAFs與腫瘤發(fā)生發(fā)展間的聯(lián)系一直是研究領(lǐng)域的熱點,目前針對CAFs設(shè)計的靶向藥物已進入臨床試驗階段。透明質(zhì)酸合酶2(Hyaluronan synthase2,HAS2)是廣泛存在于脊椎動物中催化透明質(zhì)酸HA合成的三種酶之一,其與胚胎發(fā)育、腫瘤、關(guān)節(jié)炎等疾病密切相關(guān)。本課題在分析HAS2在口腔癌組織標本中表達特點的基礎(chǔ)上,探討HAS2在CAFs影響口腔癌細胞生物學行為中的作用及相關(guān)機制,為進一步認識腫瘤微環(huán)境與口腔癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系、以及針對腫瘤微環(huán)境的生物學治療提供依據(jù)。 第一部分：透明質(zhì)酸合酶-2在口腔鱗癌中的表達與意義 目的：檢測口腔癌臨床標本中HAS2的表達分布特征,并分析其與臨床病理參數(shù)及α-SMA陽性表達成纖維細胞之間的關(guān)系。 方法：收集48例無放化療病史的口腔癌患者的石蠟包埋腫瘤組織,以及配對的16例陰性切緣處取得的石蠟包埋正常黏膜組織,常規(guī)制作成5μm厚的病理切片。利用免疫組織化學的方法對標本進行染色。根據(jù)HAS2, α-SMA在腫瘤組織及正常組織中的表達情況進行評分,所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果：HAS2在口腔癌組織腫瘤細胞中表達的陽性率為93.8%(45/48),在腫瘤基質(zhì)中表達的陽性率為52.8%(25/48)；HAS2在正�？谇火つど掀ぜ毎谋磉_陽性率為93.8%(15/16),在上皮下結(jié)締組織中表達的陽性率為12.5%(2/16)。腫瘤基質(zhì)中HAS2的表達情況與臨床分期細=0.02)、淋巴結(jié)狀態(tài)(p=0.02)、α-SMA陽性的CAFs (p0.01)之間存在相關(guān)性。 結(jié)論：HAS2在口腔癌發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移及腫瘤基質(zhì)激活中可能發(fā)揮重要生物學作用。 第二部分：透明質(zhì)酸合酶-2在癌相關(guān)成纖維細胞影響口腔癌細胞生物學行為中的作用 目的：檢測CAFs對舌鱗癌細胞株Ca127生物學行為的影響,探討HAS2在CAFs介導的Ca127侵襲行為中的作用及相關(guān)分子機制。 方法：分別從同一舌癌患者手術(shù)切除標本的癌組織及癌旁組織獲取CAFs和NFs。免疫細胞化學、Western blot鑒定細胞表型。通過MTT、間接共培養(yǎng)模型、侵襲試驗比較NFs及CAFs對Ca127細胞增殖、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、侵襲能力的影響。實時定量RT-PCR及Western blot檢測HAS1,2,3在兩型成纖維細胞中的表達。觀察HAS抑制劑4-MU處理CAFs對Ca127細胞生物學特征的影響。利用siRNA抑制CAFs中的HAS2表達,并分析其對Ca127侵襲能力的影響。 結(jié)果：a-SMA表達于CAFs, NFs中幾乎無表達。相比NFs, CAFs能夠促進Ca127細胞的增殖、侵襲,誘導Ca127細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。實時定量RT-PCR結(jié)果顯示HAS2在CAFs中的表達是NFs的7倍(P0.01)；4-MU在濃度0.4mM時抑常CAFs由HAS2, HAS3的表達而不影響其增殖,并能部分抵消其對腫瘤細胞增殖、侵襲、EMT的作用。NFs與腫瘤細胞間接共培養(yǎng)可誘導腫瘤細胞發(fā)生EMT及自身HAS2水平的增高。Ca127在HAS2干擾組的侵襲力顯著低于無關(guān)序列組(P0.01)。 結(jié)論：CAFs促進Ca127細胞增殖、侵襲,誘導腫瘤細胞EMT,高表達HAS2可能是其作用機制之一,抑制腫瘤微環(huán)境中CAFs的HAS2功能可能是一條新的抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移方法。
[Abstract]:The association between CAFs and oncogenesis has been a hot spot in the field of study .

The first part : Expression and significance of hyaluronic acid synthase - 2 in oral squamous cell carcinoma

Objective : To investigate the expression profile of HAS2 in clinical specimens of oral cancer and to analyze its relationship with clinicopathological parameters and 偽 - SMA positive expression .

Methods : The paraffin - embedded tumor tissues of 48 patients with oral cancer who had no history of radiotherapy and chemotherapy were collected , and paraffin - embedded normal mucosa tissues obtained from 16 negative margins were collected . The specimens were stained with immunohistochemical methods .

Results : The positive rate of HAS2 expression in tumor cells was 93 . 8 % ( 45 / 48 ) , and the positive rate was 52.8 % ( 25 / 48 ) .
The positive rate of HAS2 expression in normal oral mucosal epithelial cells was 93 . 8 % ( 15 / 16 ) , and the positive rate was 12.5 % ( 2 / 16 ) in the upper subcutaneous connective tissue . The expression of H 2 2 in tumor stroma was correlated with clinical stage ( 0 . 02 ) , lymph node status ( p = 0.02 ) , and 偽 - SMA positive CAFs ( p0.01 ) .

Conclusion : HAS2 may play an important role in the development , metastasis and tumor matrix activation of oral cancer .

The second part : The role of hyaluronic acid synthase - 2 in the biological behavior of cancer - related fibroblasts

Objective : To investigate the effect of CAFs on the biological behavior of Ca127 cell line in tongue squamous cell carcinoma cell line .

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本文編號：1704971