發(fā)布時間：2018-04-02 15:36

  本文選題：STAT3　切入點：IGF-I　出處：《山東大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 探索體外胰島素樣生長因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)促進L6成肌細胞增殖的適宜濃度,探討信號轉(zhuǎn)導及轉(zhuǎn)錄活化因子3(STAT3)在IGF-Ⅰ介導的L6成肌細胞增殖中的作用。方法： 使用10ng/ml,50ng/ml,100ng/ml,200ng/ml,300ng/ml的IGF-Ⅰ作用于L6成肌細胞,2%FBS培養(yǎng)基作為對照組,分別作用0h、12h、24h、48h, MTT法檢測各實驗組及對照組細胞增殖活性；利用100ng/ml的IGF-Ⅰ作用于L6成肌細胞0h、12h、24h、48h,2%FBS培養(yǎng)基作為對照組,提取各組細胞的總RNA和總蛋白,應用RT-PCR技術及Western-Blotting免疫印跡技術檢測STAT3蛋白基因轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達水平的變化情況及磷酸化STAT3蛋白P-STAT3的表達情況；利用JAK-STAT3通路抑制劑AG490預處理細胞后,再利用100ng/ml的IGF-I作用于L6成肌細胞24h,應用RT-PCR技術及Western-Blotting免疫印跡技術檢測STAT3蛋白基因轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達水平的變化情況及磷酸化STAT3蛋白的表達變化,MTT法檢測各組細胞增殖活性的變化。 結(jié)果： (1)當IGF-I濃度小于100ng/ml時,隨著IGF-I濃度的升高,各時間段內(nèi)成肌細胞增殖能力均逐漸增強,變化有顯著性差異(P0.05)；當IGF-I濃度大于100ng/ml時,細胞增殖能力隨IGF-Ⅰ濃度上升增強不明顯,變化無顯著性差異(P0.05)。(2)在0-24h時間段內(nèi),成肌細胞在IGF-Ⅰ作用下增殖能力逐漸增強,24h時達到高峰,變化有顯著性差異(P0.05)。24h后,IGF-Ⅰ濃度低于100ng/ml的實驗組細胞增殖能力下降,變化有顯著性差異(P0.05); IGF-Ⅰ濃度高于100ng/ml的實驗組細胞增殖速度變緩,但仍維持在較高水平,變化有顯著性差異(P0.05)。(3)經(jīng)100ng/ml IGF-ⅠI誘導組細胞的STAT3蛋白無論基因轉(zhuǎn)錄水平還是蛋白表達水平均高于對照組,有顯著性差異(P0.05)。實驗組細胞各時間段之間STAT3,總蛋白表達水平無明顯差異(P0.05), p-STAT3蛋白表達水平在0～24h內(nèi)逐漸升高,在24h達到高峰,變化有顯著性差異(P0.05),其后表達水平下降,有顯著性差異(P0.05)。(4)AG490處理組細胞增殖活性明顯低于未處理組,有顯著性差異(P0.05)。經(jīng)AG490預處理組細胞STAT3總蛋白表達水平與未處理組細胞無明顯差異(P0.05), p-STAT3表達明顯低于未經(jīng)AG490處理組細胞,有顯著性差異(P0.05)。 結(jié)論： 一定濃度的IGF-Ⅰ對成肌細胞增殖有促進作用,在IGF-Ⅰ介導的成肌細胞增殖過程中,STAT3蛋白被激活,部分阻斷細胞STAT3蛋白磷酸化后,細胞增殖能力顯著下降,我們由此可推斷STAT3蛋白在IGF-Ⅰ介導的成肌細胞增殖過程中發(fā)揮著重要作用。
[Abstract]:Objective:To explore the appropriate concentration of insulin-like growth factor 鈪，

本文編號：1701063