本文選題：人牙周膜干細(xì)胞　切入點(diǎn)：細(xì)胞外基質(zhì)　出處：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：牙周炎是人類最常見的口腔疾病之一，現(xiàn)有的治療方法都存在著一定的局限性，均無法完全恢復(fù)牙周組織的形態(tài)和功能。近年來，隨著組織工程與再生醫(yī)學(xué)的迅猛發(fā)展，牙周組織的生物學(xué)再生作為未來一種理想的治療方式受到了大家的重視。牙周膜干細(xì)胞（human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs）被認(rèn)為是牙周組織穩(wěn)定和修復(fù)再生的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)，這使得利用其治療牙周炎組織缺損成為可能。然而，如何在體外大量擴(kuò)增出高質(zhì)量的牙周膜干細(xì)胞，且精確控制牙周膜干細(xì)胞的生長與分化，已成為實(shí)驗(yàn)室到臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化中亟待解決的關(guān)鍵問題。 微環(huán)境對于干細(xì)胞特性的維持和分化起著重要的調(diào)控作用，研究基質(zhì)微環(huán)境是干細(xì)胞研究中非常重要的內(nèi)容。因此，我們將牙周組織細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix,ECM）作為調(diào)控的著眼點(diǎn)，構(gòu)建組織特異性細(xì)胞外基質(zhì)，并研究其結(jié)構(gòu)成分的差異，以及對牙周膜干細(xì)胞的作用。基于大量的前期研究，我們已發(fā)現(xiàn)骨髓細(xì)胞外基質(zhì)對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能夠明顯促進(jìn)其增殖并保持其干性。但牙周膜細(xì)胞外基質(zhì)微環(huán)境對于牙周膜干細(xì)胞的影響如何，還未見研究報(bào)道。為此，我們通過研究構(gòu)建出特有的牙周膜細(xì)胞外基質(zhì)與骨髓細(xì)胞外基質(zhì)微環(huán)境模型，并分析兩種ECM的結(jié)構(gòu)與蛋白組成差異，以及對于牙周膜干細(xì)胞增殖與凋亡的影響。 研究內(nèi)容： 1.制備牙周膜細(xì)胞及骨髓細(xì)胞來源的ECM并比較其結(jié)構(gòu)異同 2.初步分析與比較兩種不同細(xì)胞來源的ECM的蛋白成分異同 3.探究兩種ECM對于牙周膜干細(xì)胞體外增殖與凋亡的影響 研究方法： 1.分離培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞（human periodontal ligament cells，hPDLCs）和人頜骨骨髓細(xì)胞（human bone marrow stromal cells，hBMCs，制備出兩種細(xì)胞來源的組織特異性細(xì)胞外基質(zhì)（hPDLCs ECM及hBMCs-ECM）保存待用。通過掃描電鏡及透射電鏡，觀察二者結(jié)構(gòu)的異同。 2.利用免疫熒光染色及液相-質(zhì)譜技術(shù)檢測兩種細(xì)胞來源的ECM基本成分，并進(jìn)行蛋白組學(xué)分析。 3.利用有限稀釋法分離培養(yǎng)出hPDLSCs,將鑒定出的hPDLSCs接種于兩種ECM上，通過CCK8及流式細(xì)胞周期、凋亡檢測分析比較兩種細(xì)胞來源的ECM對hPDLSCs增殖與凋亡的影響。 研究結(jié)果： 1.兩種不同來源的ECM模型，內(nèi)部細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失，但膠原骨架結(jié)構(gòu)基本完整，骨髓與牙周膜細(xì)胞外基質(zhì)表面結(jié)構(gòu)有所不同，牙周膜細(xì)胞來源的ECM膠原纖細(xì)，而骨髓細(xì)胞來源的ECM膠原粗大。 2.細(xì)胞外基質(zhì)蛋白成分保留基本完整，兩種ECM的構(gòu)成蛋白有明顯差異性，hBMCs-ECM或表達(dá)更多的成骨特異性蛋白。 3.與對照組相比，hPDLCs-ECM與hBMCs-ECM均能顯著促進(jìn)hPDLSCs增殖，但對凋亡的影響與對照組無明顯差異。 結(jié)論： 本研究成功制備出了兩種細(xì)胞來源的具有組織特異性的ECM，即hPDLCs ECM與hBMCs-ECM，進(jìn)一步明確了其結(jié)構(gòu)，并對其中的蛋白成分進(jìn)行了分析。我們發(fā)現(xiàn)，該方法構(gòu)建出的細(xì)胞外基質(zhì)微環(huán)境，不僅能維持基質(zhì)原有的骨架結(jié)構(gòu)，同時(shí)也保留了內(nèi)部的基本成分，能夠有效模擬細(xì)胞外基質(zhì)微環(huán)境，有利于干細(xì)胞的生長與分化。研究還發(fā)現(xiàn)hPDLCs ECM及hBMCs-ECM均能促進(jìn)hPDLSCs的增殖，保持干細(xì)胞的特性，，對干細(xì)胞的凋亡沒有影響。通過本研究，為探究牙周組織微環(huán)境對牙周膜干細(xì)胞的生長與分化提供了有效的細(xì)胞外基質(zhì)微環(huán)境模型，為獲得體外高質(zhì)量擴(kuò)增牙周膜干細(xì)胞提供了新的研究思路。
[Abstract]:In recent years , with the rapid development of tissue engineering and regenerative medicine , the biological regeneration of periodontal tissues has been paid more attention as an ideal treatment modality .

In this paper , we have found that the extracellular matrix of bone marrow plays an important role in the research of periodontal ligament stem cells , and the effect of extracellular matrix on periodontal ligament stem cells is studied .

Study Content :

1 . ECM of periodontal ligament cells and bone marrow cell origin was prepared and compared with its structure .

2 . Preliminary analysis and comparison of protein composition of ECM from two different cell sources

3 . To explore the effects of two kinds of ECM on proliferation and apoptosis of periodontal ligament stem cells in vitro

Study method :

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本文編號：1696876