發(fā)布時(shí)間：2018-03-18 20:15

  本文選題：促性腺激素釋放激素受體　切入點(diǎn)：曲普瑞林　出處：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:目前已知有多種癌細(xì)胞表面存在I型促性腺激素釋放激素受體(Gn RHR-I),但國內(nèi)外尚未見有關(guān)于口腔癌細(xì)胞或組織表達(dá)Gn RHR-I的報(bào)道,并且多數(shù)學(xué)者認(rèn)為腫瘤細(xì)胞表面Gn RHR-I與其在下丘腦-垂體-性腺軸的細(xì)胞內(nèi)所介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制不同。因此本研究選取口腔癌KB細(xì)胞株,驗(yàn)證其Gn RHR-I基因及蛋白的表達(dá),并通過細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)、Real-Time PCR、Western Blot、i TRAQ等實(shí)驗(yàn)方法希望解釋體內(nèi)激素水平影響腫瘤組織的生長狀態(tài)及找到口腔癌細(xì)胞表面Gn RHR-I的存在意義。方法:1.RT-RCR方法及電泳后切膠回收測(cè)序方法基因水平驗(yàn)證KB細(xì)胞存在Gn RHR-I m RNA表達(dá),Western Blot方法蛋白水平證實(shí)KB細(xì)胞存在Gn RHR-I蛋白表達(dá)。2.利用CCK-8試劑盒檢測(cè)不同濃度(10、20、40、80μg/ml)Gn RH-I及Triptorelin處理KB細(xì)胞48小時(shí)后450 nm處吸光值并計(jì)算存活率。3.熒光定量PCR方法對(duì)CAL-27、SCC-4、KB三株口腔癌細(xì)胞Gn RHR m RNA表達(dá)水平進(jìn)行相對(duì)鑒定。4.熒光定量PCR方法檢測(cè)Gn RH-I及Triptorelin處理KB細(xì)胞48小時(shí)對(duì)細(xì)胞Gn RHR-I表達(dá)水平的影響,檢測(cè)Triptorelin處理KB細(xì)胞12、24、36、48小時(shí)對(duì)細(xì)胞Gn RHR-I m RNA表達(dá)水平的影響。5.同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量(i TRAQ)方法解析Triptorelin處理KB細(xì)胞48小時(shí)后與對(duì)照組相比較的差異蛋白表達(dá)譜,并做GO、KEGG分析獲得代謝通路變化情況。結(jié)果:1.經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳并進(jìn)行切膠回收測(cè)序檢測(cè)顯示KB細(xì)胞Gn RHR-I基因擴(kuò)增結(jié)果正確。Western Blot結(jié)果顯示,KB細(xì)胞蛋白在60k Da處存在Gn RHR-I特異性反應(yīng)條帶。2.Gn RH-I處理KB細(xì)胞48小時(shí)后酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處吸光值,對(duì)照組、10、20、40、80μg/ml處理組吸光值分別為1.475±0.017、1.455±0.013、1.437±0.017、1.418±0.016、1.392±0.019,存活率分別為100.00±0.013%、98.537±0.009%、97.186±0.012%、95.784±0.012%、93.860±0.014%。10μg/ml Gn RH處理KB細(xì)胞48小時(shí)與對(duì)照組相比,細(xì)胞存活率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.171),20μg/ml組與對(duì)照組相比存活率有顯著差異(p=0.018),40、80μg/ml處理組與對(duì)照組相比存活率差異有極顯著性(p=0.002,p=0.0001)。Triptorelin處理KB細(xì)胞48小時(shí)對(duì)照組、10、20、40、80μg/ml組吸光值分別為1.475±0.017,1.444±0.019,1.429±0.023,1.401±0.018,1.332±0.032。細(xì)胞存活率分別為100.00±0.013%,97.701±0.014%,96.431±0.017%,94.507±0.013%,89.485±0.024%。10μg/ml Triptorelin處理KB細(xì)胞48小時(shí)與對(duì)照組相比,存活率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.118),20μg/ml Triptorelin組與對(duì)照組相比存活率有顯著差異(p=0.022),40、80μg/ml Triptorelin處理組與對(duì)照組相比存活率差異有極顯著性(p=0.002,p=0.0001)。相同濃度組間比較顯示,Gn RH-I與曲普瑞林對(duì)KB細(xì)胞增殖抑制能力均無差異(p0.05)。3.對(duì)三株口腔癌細(xì)胞CAL-27、SCC-4、KB的相對(duì)定量分析顯示,KB細(xì)胞Gn RHR-I m RNA表達(dá)量為SCC-4的1.810±0.049倍(p0.01),人舌鱗癌細(xì)胞株CAL-27的Gn RHR-I表達(dá)水平在三種細(xì)胞中最高,為SCC-4的3.564±0.066倍(p0.0001)。4.熒光定量PCR結(jié)果顯示,Gn RH-I處理KB細(xì)胞48小時(shí)后Gn RHR-I m RNA表達(dá)量為對(duì)照組的0.256±0.023倍(p0.01),Triptorelin處理組m RNA表達(dá)量為對(duì)照組的0.117±0.013倍(p0.01),Triptorelin顯示對(duì)KB細(xì)胞Gn RHR-I m RNA的表達(dá)有更強(qiáng)的抑制能力(p0.01)。Triptorelin處理KB細(xì)胞12、24、36、48小時(shí)的m RNA表達(dá)水平分別為對(duì)照組的0.926±0.021倍(p=0.186)、0.565±0.016倍(p0.01)、0.250±0.022倍(p0.01)、0.175±0.034倍(p0.0001),24、36、48小時(shí)組與對(duì)照組相比較差異具極顯著意義(p0.01)。5.基于i TRAQ技術(shù)的曲普瑞林對(duì)KB細(xì)胞抑制作用的蛋白組學(xué)分析顯示KB細(xì)胞差異蛋白數(shù)共58個(gè)點(diǎn),上調(diào)14個(gè),下調(diào)44個(gè)(p0.05)。差異蛋白經(jīng)GO與KEGG分析主要與蛋白酶體下調(diào)有關(guān)(p0.01)。結(jié)論:1.口腔癌KB細(xì)胞株促性腺激素釋放激素受體基因及蛋白檢測(cè)呈陽性。2.Gn RH-I和Triptorelin能夠抑制KB細(xì)胞增殖。隨Gn RH-I和Triptorelin濃度增加,細(xì)胞存活率逐漸降低,相同濃度的Gn RH-I和Triptorelin對(duì)細(xì)胞的增殖抑制能力無差異。3.人舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株CAL-27在SCC-4、CAL-27、KB三株口腔癌細(xì)胞中Gn RHR-I m RNA表達(dá)量最高,SCC-4最低。4.Gn RH-I和Triptorelin均能夠下調(diào)KB細(xì)胞的Gn RHR-I m RNA表達(dá)水平,其中Triptorelin顯示更強(qiáng)的下調(diào)KB細(xì)胞Gn RHR-I m RNA能力。Triptorelin下調(diào)KB細(xì)胞Gn RHR-I m RNA表達(dá)具有時(shí)間依賴性。5.曲普瑞林對(duì)KB細(xì)胞的增殖抑制作用機(jī)制為對(duì)蛋白酶體亞單位等關(guān)鍵蛋白下調(diào),干擾細(xì)胞內(nèi)蛋白降解,從而抑制細(xì)胞增殖,顯示曲普瑞林作為一種蛋白酶體抑制劑抑制細(xì)胞增殖。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.8

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李健;魏洪濤;張國利;岳玉環(huán);吳廣謀;田園;邱麗娜;馬洪圓;王冬冬;吉元?jiǎng)?;舌癌CAL-27細(xì)胞GnRHR的檢測(cè)及曲普瑞林對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用研究[J];中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2017年03期

2 李明;繆澤鴻;丁健;;蛋白酶體及其抑制劑的研究進(jìn)展[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2008年05期

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本文編號(hào)：1631133