本文關(guān)鍵詞：穿心蓮內(nèi)酯對牙齦卟啉單胞菌胰酶樣蛋白酶活性的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《吉林大學(xué)》 2016年

穿心蓮內(nèi)酯對牙齦卟啉單胞菌胰酶樣蛋白酶活性的影響

仲琦  

【摘要】：牙周病是口腔兩大主要疾病之一,在我國患病率居于齲病之上。牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)是慢性牙周炎的主要致病菌,而胰酶樣蛋白酶(trypsin-like protease,TLP)為P.g的重要毒力因子,是目前研究的熱點(diǎn)。穿心蓮內(nèi)酯(andrographolide,Andro)作為中草藥提取物在我國來源廣泛且毒副作用小,并具有抗炎抗菌等多方面作用。目的:本實(shí)驗(yàn)擬選用穿心蓮內(nèi)酯為研究對象,觀察其對牙齦卟啉單胞菌的生長能否起到抑制作用;并通過研究其對牙齦卟啉單胞菌胰酶樣蛋白酶的活性是否有影響及其影響程度,為穿心蓮內(nèi)酯應(yīng)用于牙周炎的預(yù)防及治療提供理論基礎(chǔ)。方法:本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)菌株為P.g W83,采用二倍稀釋法配比藥物濃度進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)一:測定穿心蓮內(nèi)酯對P.g的最小抑菌濃度(MIC)及最小殺菌濃度(MBC)。實(shí)驗(yàn)二:測定培養(yǎng)物結(jié)合態(tài)TLP和游離態(tài)TLP活性及含量,計(jì)算TLP的比活,評價(jià)穿心蓮內(nèi)酯。配制液體牛心腦浸液培養(yǎng)基(BHI),P.g濃度為108CFU/ml,穿心蓮內(nèi)酯終濃度分別為MIC的l/2、l/4和l/8,加入一定濃度的P.g菌懸液及不同濃度的穿心蓮內(nèi)酯,在37℃恒溫箱內(nèi)厭氧培養(yǎng)48小時(shí)后,收集離心后的培養(yǎng)物上清液,并超聲破碎剩余菌細(xì)胞,收集破碎后菌細(xì)胞上清液,測定菌細(xì)胞破碎后上清液及培養(yǎng)物上清液中TLP活性及其含量,計(jì)算TLP的比活。結(jié)果:在P.g濃度為108CFU/ml時(shí),穿心蓮內(nèi)酯對P.g的生長抑制作用較明顯,穿心蓮內(nèi)酯的MIC為6mg/ml,其MBC為12mg/ml。P.g的TLP存在兩種形式:結(jié)合態(tài)(與菌細(xì)胞結(jié)合)和游離態(tài)(分泌到細(xì)胞外),TLP主要的存在形式為與菌細(xì)胞結(jié)合的結(jié)合態(tài)。游離態(tài)TLP水解蛋白的能力較結(jié)合態(tài)弱,穿心蓮內(nèi)酯的濃度越弱,酶比活越高,對P.g的TLP酶的抑制作用越弱。結(jié)論:穿心蓮內(nèi)酯對P.g的生長有抑制作用,MIC為6mg/ml,MBC為12mg/ml;穿心蓮內(nèi)酯對P.g游離態(tài)TLP和結(jié)合態(tài)TLP的活性及蛋白水解能力均有抑制作用,濃度越大,抑制作用越強(qiáng),且對游離態(tài)TLP抑制作用強(qiáng)于結(jié)合態(tài)TLP。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R781.42
【目錄】：

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