發(fā)布時間：2018-03-01 18:45

  本文關(guān)鍵詞： 抗壞血酸碳點 口腔黏膜鱗癌 自噬 凋亡　出處：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景:口腔黏膜鱗癌是口腔頜面部發(fā)病率最高的惡性腫瘤,嚴(yán)重威脅人類的生命與健康�；瘜W(xué)治療作為口腔鱗癌序列治療的重要手段之一,能夠有效地殺傷腫瘤細(xì)胞、防止腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移,但其對正常組織器官的毒副作用往往限制了化療的應(yīng)用。納米載體能夠有效地運載抗癌藥物或基因,減少化療的毒副作用,因而被廣泛應(yīng)用于腫瘤治療。碳點是近年來新興的一種碳納米材料,除能發(fā)揮納米載體的功能外還具有獨特的發(fā)光性能,在生物成像、腫瘤化療等腫瘤診治領(lǐng)域中具有巨大的應(yīng)用前景。但目前人們主要聚焦于碳點的熒光特性及納米載體的應(yīng)用上,而碳點對腫瘤細(xì)胞尤其是對口腔鱗癌細(xì)胞的殺傷作用仍研究甚少,若碳點能直接殺傷腫瘤細(xì)胞,可能協(xié)同其所負(fù)載的藥物或基因共同發(fā)揮抗癌效果。研究表明,納米材料能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生自噬和凋亡,而自噬又可能對腫瘤細(xì)胞的凋亡產(chǎn)生不同的影響。因此,研究碳點對口腔黏膜鱗癌KB細(xì)胞的殺傷作用,并探索細(xì)胞自噬及凋亡在這個過程中所起的作用,可能為口腔黏膜鱗癌的治療提供新的視野與策略。目的:探討抗壞血酸碳點對口腔鱗癌KB細(xì)胞增殖、自噬及凋亡的影響,明確抗壞血酸碳點對口腔鱗癌KB細(xì)胞的殺傷作用機(jī)制,為未來抗壞血酸碳點協(xié)同負(fù)載的藥物或基因應(yīng)用于口腔黏膜鱗癌的治療提供理論基礎(chǔ)。方法:首先采用微波法制備抗壞血酸碳點,通過透射電子顯微鏡(TEM)觀察碳點的形貌及尺寸,動態(tài)光散射分析碳點的水合粒徑及電勢。為檢測KB細(xì)胞對碳點的攝取情況,首先通過熒光顯微鏡觀察各組內(nèi)綠色熒光細(xì)胞的數(shù)量,并利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行定量分析。通過MTT法檢測不同濃度的碳點對KB細(xì)胞增殖的抑制作用,克隆形成實驗檢測不同濃度的碳點對KB細(xì)胞克隆形成能力的影響。為評價自噬的水平,利用吖啶橙(AO)染色后通過熒光顯微鏡觀察各組細(xì)胞中自噬溶酶體數(shù)量的變化,同時利用Western Blot對各組細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白LC3的蛋白水平進(jìn)行半定量分析。采用Annexin V-FITC/PI雙染法經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞的凋亡率。結(jié)果:透射電鏡下觀察所合成的抗壞血酸碳點尺寸平均為5.36 nm,晶格大小平均為0.24 nm。動態(tài)光散射測得碳點的水合粒徑平均為12.89 nm,電勢平均為+8.92 m V。熒光顯微鏡下觀察,40μg/m L碳點處理KB細(xì)胞2 h后可見較多的細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)綠色熒光,流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,40μg/m L碳點處理4 h后,與空白對照組相比,綠色熒光細(xì)胞的數(shù)量顯著增加(P0.001),表明抗壞血酸碳點能夠被KB細(xì)胞攝入。與空白對照組比較,各實驗組(即5、10、20、40和80μg/m L碳點組)中KB細(xì)胞的增殖率及克隆形成能力均明顯降低(分別為P0.01和P0.001)。與空白對照組比較,各實驗組KB細(xì)胞中自噬溶酶體的數(shù)量均有所增加,Western Blot結(jié)果顯示,僅40μg/m L碳點組細(xì)胞內(nèi)的LC3 II蛋白的水平明顯升高(P0.05),表明碳點能夠誘導(dǎo)KB細(xì)胞發(fā)生自噬。此外,40μg/m L碳點組中細(xì)胞凋亡率也明顯增加(P0.001),表明碳點能誘導(dǎo)KB細(xì)胞發(fā)生凋亡。與單純碳點處理組比較,自噬抑制劑3-MA和碳點共處理組中細(xì)胞凋亡率明顯減少(P0.05),提示自噬能夠促進(jìn)碳點誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。結(jié)論:合成的抗壞血酸碳點是平均尺寸為5.36 nm、平均電勢為+8.92 m V的球形碳納米顆粒�？箟难崽键c能夠被KB細(xì)胞攝取,并能夠有效地抑制KB細(xì)胞的增殖、減弱其克隆形成能力,并誘導(dǎo)KB細(xì)胞發(fā)生自噬及凋亡�？箟难崽键c誘導(dǎo)的自噬能夠促進(jìn)KB細(xì)胞的凋亡,提示細(xì)胞自噬和凋亡在抗壞血酸碳點殺傷KB細(xì)胞的過程中可能起到協(xié)同作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.8

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本文編號：1553123