本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)牙髓損傷的修復(fù)及經(jīng)典Wnt通路在其中的作用的體內(nèi)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第四軍醫(yī)大學(xué)》 2012年

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)牙髓損傷的修復(fù)及經(jīng)典Wnt通路在其中的作用的體內(nèi)研究

郝靖惠  

【摘要】：牙齒在受到外界各種刺激，如齲病、磨耗、外傷等，均可引起牙本質(zhì)缺損，缺損到一定程度會(huì)導(dǎo)致牙髓出現(xiàn)一系列抵御刺激的自身修復(fù)反應(yīng)。目前認(rèn)為牙髓干細(xì)胞在牙本質(zhì)-牙髓的損傷修復(fù)中具有非常重要的作用，然而，牙源性干細(xì)胞來源匱乏、擴(kuò)增困難，且已有很多文獻(xiàn)報(bào)道了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMMSCs）可分化為多種細(xì)胞，如成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、皮膚細(xì)胞等，并且在骨、軟骨、肌腱、神經(jīng)、皮膚損傷的修復(fù)中也起著重要作用，BMMSCs已被認(rèn)為是組織再生修復(fù)的重要種子細(xì)胞。目前許多研究證明經(jīng)典Wnt信號(hào)通路在早期未分化細(xì)胞的分化、遷移等多方面起著重要作用。 牙齒是人體的器官之一，當(dāng)牙髓損傷時(shí)，機(jī)體內(nèi)BMMSCs是否參與其修復(fù)以及經(jīng)典Wnt信號(hào)通路在其中的作用尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)將利用綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞嵌合SD大鼠牙本質(zhì)缺損模型研究BMMSCs在牙髓損傷修復(fù)中的作用，以及經(jīng)典Wnt通路在這一修復(fù)過程中的調(diào)節(jié)作用。 實(shí)驗(yàn)分為兩部分： 1. BMMSCs與大鼠切牙Apical bud復(fù)合后腎被膜下移植實(shí)驗(yàn) 目的：探討經(jīng)典Wnt信號(hào)通路在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向牙本質(zhì)樣分化中的作用。 方法：將BMMSCs分為三組：（1）對(duì)照組：正常的BMMSCs，不經(jīng)過任何處理；（2）Wnt3a組：BMMSCs經(jīng)100ng/ml濃度的Wnt3a刺激48h；（3）DKK-1組：BMMSCs經(jīng)100ng/ml濃度的DKK-1刺激48h。然后分別與大鼠切牙Apical bud復(fù)合，移植到大鼠腎被膜下，2周后取材，，切片，HE和免疫組化染色觀察。 結(jié)果：三組移植物均有牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合體樣結(jié)構(gòu)形成，與對(duì)照組相比，DKK-1組可見有更多的礦化組織形成，并有較多表達(dá)DMP-1、DSP的細(xì)胞，而wnt3a組僅形成極少的礦化組織，且僅有較少表達(dá)DMP-1、DSP的細(xì)胞。 結(jié)論：經(jīng)典Wnt通路可能抑制BMMSCs向成牙本質(zhì)樣細(xì)胞的分化及礦化的形成。 2.利用GFP-BMMSCs嵌合SD大鼠牙本質(zhì)缺損模型研究BMMSCs對(duì)牙髓損傷的修復(fù)以及經(jīng)典Wnt通路的調(diào)節(jié)作用 目的：探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是否參與牙髓損傷的修復(fù)以及經(jīng)典Wnt通路在這一過程中的調(diào)節(jié)作用。 方法：利用綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（GFP-BMMSCs）嵌合SD大鼠模型，實(shí)驗(yàn)分為三組：（1）對(duì)照組：經(jīng)尾靜脈所注射的GFP-BMMSCs為正常細(xì)胞，不經(jīng)過任何刺激;（2）Wnt3a組：尾靜脈所注射的GFP-BMMSCs經(jīng)100ng/ml濃度的Wnt3a刺激48h;（3）DKK-1組:尾靜脈所注射的GFP-BMMSCs經(jīng)100ng/ml濃度的DKK-1刺激48h。通過制備牙本質(zhì)缺損構(gòu)建牙髓損傷模型，于牙本質(zhì)缺損5d,10d,15d后取材，切片，HE及免疫熒光染色，分別觀察牙髓的病理變化和損傷修復(fù)情況以及GFP-BMMSCs在牙髓組織中的分布情況和變化。 結(jié)果：（1）牙本質(zhì)缺損組初期有牙髓充血，后期有修復(fù)性牙本質(zhì)形成，免疫熒光染色可見牙髓組織中有熒光細(xì)胞的分布，且牙本質(zhì)缺損組比正常組中可見更多的熒光細(xì)胞。（2）與對(duì)照組相比，同一時(shí)間點(diǎn)，DKK-1組有更多修復(fù)性牙本質(zhì)形成，且牙髓組織中可見更多的熒光細(xì)胞，相反，Wnt3a組修復(fù)性牙本質(zhì)形成較少，牙髓組織中熒光細(xì)胞也較少。 結(jié)論：（1）牙髓損傷時(shí)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以遷移到損傷的牙髓處參與損傷的修復(fù)。（2）通過抑制經(jīng)典Wnt信號(hào)通路可以促進(jìn)牙髓損傷修復(fù)的過程。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R782.2
【目錄】：

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