本文關鍵詞：牙髓干細胞在鼠尾膠原和鈦金屬表面生物學特性比較研究　出處：《吉林大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：研究目的:目前DPSCs生物學特征的研究多為干細胞的定向分化研究。因此,本實驗主要研究目的為DPSCs在鼠尾膠原蛋白和鈦金屬上的細胞表型特點、細胞活性、礦化潛能、組織再生能力、多向分化潛能的體外生物學特性比較。實驗方法:完整拔除牙根尚未發(fā)育完全的正畸牙或從未有牙體牙周疾病的第三磨牙(16-28歲),用組織塊發(fā)原代培養(yǎng)DPSCs,之后分組。分三組,空白對照組,正常培養(yǎng)(10%FBS+α-MEM培養(yǎng)液);實驗組A:加入鼠尾膠原蛋白和10%FBS+α-MEM培養(yǎng)液;實驗組B:加入鈦金屬和10%FBS+α-MEM培養(yǎng)液。倒置顯微鏡下觀察三組DPSCs原代細胞和傳代細胞的生長和傳代特征。之后將三組P2細胞接種于蓋玻片上,用熒光免疫技術檢測DPSCs表明標記物STRO-1的表達情況。再將對數(shù)生長的三組細胞制成細胞懸液,接種至6孔板中,培養(yǎng)7D后,加入結晶紫染液染色,觀察細胞克隆形成情況。采用MTT法分別連續(xù)10D測定三組DPSCs的P3細胞的OD值,繪制三組DPSCs的生長曲線。在取三組P2細胞在成脂誘導液下進行培養(yǎng),觀察到脂滴形成后使用油紅-O染色。對經礦化誘導4W后的三組細胞進行西紅素染色,并行半定量測定兩組干細胞的鈣含量以比較鼠尾膠原蛋白和鈦金屬對DPSCs礦化結節(jié)形成能力的影響。對礦化誘導4W后的三組DPSCs采用免疫熒光技術檢測成骨標志堿性磷酸鹽(alkaline phosphatase,ALP)、骨涎磷蛋白(bone sialophosphoprotein,BSP)、牙本質涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)、骨鈣素(osteocalcin,OC)的表達情況。應用熒光定量PCR儀7900分別檢測三組DPSCs礦化誘導3D,14D,21D的ALP、BSP、DSP、OC基因的m RNA表達水平,定量比較鼠尾膠原蛋白和鈦金屬對干細胞體外成骨/成牙骨質能力的影響。結果:連續(xù)培養(yǎng)7D后,倒置顯微鏡下三組均可見有貼壁細胞以組織塊為中心成放射狀生長。三組中的大部分細胞為成纖維細胞樣生長,呈梭狀,輪廓清晰,大小基本一致。對P0的三組DPSCs爬片進行抗STRO-1免疫熒光檢測,鏡下三組DPSCs細胞核均呈藍色熒光,胞漿呈綠色熒光,是陽性表達。培養(yǎng)7D后進行結晶紫染液染色,鏡下均可見有明顯的細胞集形成,其中A組克隆形成率為8.5%,B組為5%。經統(tǒng)計學分析,A組形成率高于B組,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。DPSCs的生長曲線呈“S”型,1-2D是潛伏期,3-8D為對數(shù)生長期,細胞加速生長,8D后進入平臺期,細胞生長速度減緩,符合干細胞慢周期的特點,P4開始A組和B組相比較,差異存在統(tǒng)計學意義(p0.05)。三組DPSCs體外誘導成脂3W后進行油紅-O染色均呈陽性,倒置顯微鏡下觀察到有明顯的紅色脂滴形成。礦化誘導4W后,三組細胞使用茜素紅染色法檢測,可見有橘紅色礦化結節(jié)形成。茜素紅半定量檢測三組細胞的鈣含量,其中A組的鈣含量為5.89±0.41,明顯高于B組的3.83±0.27,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。對礦化誘導4W后的DPSCs進行抗ALP、BSP、DSP、OC的免疫熒光檢測,結果為陽性,其中A組熒光強度明顯高于其他2組。熒光定量PCR結果顯示隨著誘導時間的增加,BSP、DSP和OC基因水平表達上升,而ALP基因水平表達則隨誘導時間的增加而下降,且A組中的各基因的m RNA表達水平均高于其他2組,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。結論:本實驗成功地對人恒牙牙髓干細胞進行原代培養(yǎng),并且在體外分別對鼠尾膠原蛋白和鈦金屬對恒牙牙髓干細胞的成骨性/牙源性的分化及相關成骨標志物的鑒定和比較,并證實了鼠尾膠原蛋白對DPSCs關于以上綜述各指標的影響和促進作用。
[Abstract]:In this study , three groups of DPSCs were cultured under an inverted microscope . The results showed that the expression of ALP , BSP , DSP and OC increased with the increase of induction time . The results showed that the expression of ALP , BSP , DSP and OC increased with the increase of induction time .

【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R783.1

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本文編號：1440616