本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)過表達(dá)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶的人口腔黏膜上皮穩(wěn)定細(xì)胞系的構(gòu)建　出處：《華西口腔醫(yī)學(xué)雜志》2016年05期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的通過慢病毒法建立穩(wěn)定表達(dá)外源性人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(h TERT)基因的口腔黏膜上皮細(xì)胞(OMECs),探索構(gòu)建高效、穩(wěn)定的永生化OMECs細(xì)胞系的方法。方法提取293T細(xì)胞總RNA,應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法擴(kuò)增h TERT基因全長,構(gòu)建重組慢病毒載體p LVX-puro-h TERT。包裝慢病毒顆粒后感染人正常OMECs,經(jīng)嘌呤霉素抗性篩選獲得陽性克隆,采用實(shí)時熒光定量PCR法和Western blot法檢測h TERT基因m RNA和蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果成功構(gòu)建了p LVX-puro-h TERT過表達(dá)慢病毒載體并感染到OMECs中;感染細(xì)胞與正常OMECs形態(tài)相似,呈鋪路石樣生長;實(shí)時熒光定量PCR和Western blot結(jié)果均顯示,h TERT在感染細(xì)胞中高表達(dá),與正常細(xì)胞相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論通過慢病毒法成功建立了過表達(dá)h TERT的OMECs穩(wěn)定細(xì)胞系,為構(gòu)建高效、穩(wěn)定增殖的人永生化OMECs細(xì)胞系奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to establish oral mucosal epithelial cells (OMECs) stably expressing exogenous human telomerase reverse transcriptase (hTERT) gene by lentivirus method and to explore the construction efficiency. Methods Total RNAs of 293T cells were extracted and h TERT gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR). To construct recombinant lentivirus vector p LVX-puro-h TERT. after packaging lentivirus particles and infecting human normal OMECs, positive clones were obtained by purine mycin resistant screening. The expression of h TERT gene m RNA and protein was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot. TERT overexpression of lentivirus vector and infection into OMECs; The morphology of infected cells was similar to that of normal OMECs, and the infected cells grew like paving stones. The results of real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot showed the high expression of TERT in infected cells. Conclusion the stable cell line of OMECs expressing h TERT was successfully established by lentivirus method. The stable proliferation of human immortalized OMECs cell line laid the experimental foundation.
【作者單位】： 蘭州大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所;
【基金】：甘肅省自然科學(xué)基金(1308RJZA248)~~
【分類號】：R781
【正文快照】： epithelial cells,OMECs)多因素、多步驟致病機(jī)制,建立人永生化OMECs細(xì)胞系是非常必要的。正常情況下,OMECs在體外僅能傳代培養(yǎng)5~6代,無法滿足研究需求。有學(xué)者[1]對人永生化OMECs細(xì)胞系進(jìn)行了探索,如采用16型人乳頭狀瘤病毒E6和E7誘導(dǎo)培養(yǎng)永生化口腔黏膜上皮細(xì)胞系,但培養(yǎng)的

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