本文關(guān)鍵詞：MiR-503-5p在正畸大鼠牽張側(cè)牙槽骨的表達(dá)及對(duì)骨形成的作用　出處：《山東大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景和目的正畸醫(yī)師通過矯治器對(duì)牙齒施加一定的矯治力,并通過牙齒傳遞到牙周組織,產(chǎn)生一系列的生物學(xué)反應(yīng),從而引起牙周組織的改建,最終引起牙齒移動(dòng)而達(dá)到矯治的目的。機(jī)械力引起的局部牙周組織尤其是牙槽骨的改建構(gòu)成了正畸治療的生物學(xué)基礎(chǔ)。機(jī)械力作用下的骨形成是一個(gè)復(fù)雜有序的過程。這一過程由多種因素調(diào)控,包括多種激素、細(xì)胞因子以及轉(zhuǎn)錄因子等。這些因素相互作用,形成一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。MicroRNAs在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控骨形成是這個(gè)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中重要組成部分。MicroRNAs是一種非編碼小分子RNA,長(zhǎng)度為20～24個(gè)核苷酸序列,廣泛存在于動(dòng)植物細(xì)胞中,在多種生物學(xué)過程中發(fā)揮作用。這些小的miRNA可連接于mRNA的3’非編碼區(qū)域(UTR)阻止蛋白轉(zhuǎn)錄和／或調(diào)節(jié)mRNA的穩(wěn)定。隨著研究的不斷深入,多種miRNA被證實(shí)參與了骨形成的復(fù)雜過程。然而,MicroRNAs在正畸牽張力環(huán)境下對(duì)骨形成所發(fā)揮的作用有待于進(jìn)一步闡明。在前期實(shí)驗(yàn)中研究人員使用牽張力誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化,通過miRNA芯片篩選出在這一過程中表達(dá)有明顯變化的miRNA—— miR-503-5p。并且,研究人員驗(yàn)證了miR-503-5p對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的抑制作用。但是,體內(nèi)環(huán)境相對(duì)于體外實(shí)驗(yàn)情況較為復(fù)雜。因此,miR-503-5p在體內(nèi)的表達(dá)以及其對(duì)骨形成的作用仍需要進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠正畸牙移動(dòng)模型,檢測(cè)miR-503-5p在大鼠牽張側(cè)牙槽骨的表達(dá)變化,探討正畸牙移動(dòng)過程中miR-503-5p對(duì)大鼠牙槽骨骨形成能力的作用,為正畸中骨改建提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1.構(gòu)建大鼠正畸牙移動(dòng)動(dòng)物模型：本實(shí)驗(yàn)以采用拉簧加力法對(duì)大鼠上頜左側(cè)第一磨牙進(jìn)行加力,建立正畸牙移動(dòng)大鼠模型。在加力1d、3d、7d和14d后處死大鼠,提取上頜骨。將樣本固定、脫鈣、包埋,制作大鼠上頜牙槽骨的石蠟切片,并通過HE染色觀察正畸大鼠上頜第一磨牙在近中移動(dòng)過程中牙周組織形態(tài)學(xué)變化。2.觀察大鼠正畸牙移動(dòng)模型中牽張側(cè)牙槽骨組織mi-503-5p隨時(shí)間的表達(dá)變化。在對(duì)大鼠上頜左側(cè)第一磨牙加力1d、3d、7d和14d后處死大鼠,提取正畸大鼠牽張側(cè)牙槽骨組織的總RNA,采用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)miR-503-5p在大鼠牽張側(cè)牙槽骨的表達(dá)變化。3.觀察miR-503-5p在大鼠正畸牙移動(dòng)過程中對(duì)牽張側(cè)骨形成的作用利用agomiR-503-5p過表達(dá)大鼠體內(nèi)miR-503-5p, qRT-PCR、Western blot檢測(cè)牽張側(cè)牙槽骨組織成骨相關(guān)因子ALP和Runx2的表達(dá)變化,HE染色觀察組織學(xué)變化,分別從基因、蛋白和組織水平驗(yàn)證miR-503-5p的對(duì)骨形成的作用。結(jié)果1.成功構(gòu)建大鼠正畸牙移動(dòng)動(dòng)物模型：顯微鏡下,對(duì)照側(cè)樣本牙根近遠(yuǎn)中兩側(cè)牙周膜間隙均勻,寬度接近；隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng),大鼠上頜左側(cè)第一磨牙發(fā)生近中移動(dòng),形成明顯的張力區(qū)和壓力區(qū)。張力側(cè)牙周膜纖維緊張,其方向與正畸力方向一致,成骨活躍,牙槽骨的表面有新骨沉積。壓力區(qū)牙周間隙變窄,細(xì)胞密度增大,牙槽骨邊緣形成較多骨吸收陷窩,骨吸收明顯。2.大鼠正畸牙移動(dòng)模型中牽張側(cè)牙槽骨miR-503-5p表達(dá)隨時(shí)間發(fā)生一系列變化,建立模型1d后,miR-503-5p的表達(dá)即開始降低(P0.05)；隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng),3d后牽張側(cè)miR-503-5p的表達(dá)明顯低于對(duì)照側(cè)(P0.01)；而加力14d后miR-503-5p表達(dá)明顯回升但仍低于對(duì)照側(cè)(P0.01)。3.經(jīng)agomiR-503-5p過表達(dá)大鼠體內(nèi)miR-503-5p后,大鼠體內(nèi)miR-503-5p表達(dá)水平明顯增高。施加正畸牽引力后,牽張側(cè)牙槽骨組織內(nèi)成骨相關(guān)因子Runx2和ALPmRNA和蛋白水平的表達(dá)均降低(P0.01),成骨細(xì)胞數(shù)量和新生骨均減少。結(jié)論1.miR-503-5p參與了大鼠牙移動(dòng)過程中牽張側(cè)的牙槽骨骨形成。2.miR-503-5p在大鼠牙移動(dòng)過程中對(duì)牽張側(cè)牙槽骨形成起負(fù)性調(diào)控作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R783.5

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