本文關(guān)鍵詞：BMP2誘導(dǎo)人根尖乳頭干細(xì)胞分化的作用及機(jī)制的研究　出處：《山東大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的人根尖乳頭干細(xì)胞(Stem cells from the apical papilla, SCAPs)具有成牙本質(zhì)向分化、形成根部牙本質(zhì)的潛能,在未發(fā)育完全的恒牙牙根部的發(fā)育過(guò)程中起重要作用。已有研究證明人骨形成蛋白2(human bone morphogenetic protein 2, BMP2)能夠誘導(dǎo)牙組織來(lái)源的干細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞分化,形成牙本質(zhì)。然而關(guān)于BMP2對(duì)人根尖乳頭干細(xì)胞的作用如何尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究目的是研究BMP2對(duì)體外培養(yǎng)的人根尖乳頭干細(xì)胞增殖及成牙本質(zhì)向分化的影響及機(jī)制。方法及結(jié)果第—部分：SCAPs的分離培養(yǎng)、鑒定以及體外誘導(dǎo)分化酶消化法分離培養(yǎng)人根尖乳頭細(xì)胞,傳代后獲得穩(wěn)定生長(zhǎng)的細(xì)胞。免疫熒光染色及流式細(xì)胞儀檢測(cè)鑒定所培養(yǎng)的細(xì)胞干性。成脂誘導(dǎo)及礦化誘導(dǎo)證明所培養(yǎng)的細(xì)胞的多向分化潛能。第二部分：BMP2對(duì)SCAPs增殖和分化的影響選取含不同濃度的BMP2的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞,通過(guò)CCK-8方法檢測(cè)BMP2對(duì)SCAPs增殖的影響,結(jié)果顯示濃度為0-400ng/ml BMP2對(duì)細(xì)胞增殖無(wú)明顯的促進(jìn)或抑制作用(p0.05)。使用BMP2條件培養(yǎng)基(0-400ng/ml)誘導(dǎo)SCAPs的分化,檢測(cè)堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,結(jié)果顯示ALP活性在0-200ng/ml的實(shí)驗(yàn)組是逐漸上升的,而在200ng/ml與400ng/ml組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。所以在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中我們選取200ng/ml為實(shí)驗(yàn)濃度。通過(guò)real-time PCR檢測(cè)牙本質(zhì)特異性標(biāo)記物牙本質(zhì)涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)以及成骨相關(guān)性轉(zhuǎn)錄因子(runt-related transcription factor2, Runx2)、骨涎蛋白(bone sialoprotein, BSP)、骨鈣素(osteocalcin, OCN) mRNA的表達(dá)；Western Blotting檢測(cè)DSPP、Runx2、BSP、OCN蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示BMP2處理細(xì)胞后,DSPP、 Runx2、BSP、OCN mRNA及蛋白表達(dá)量升高。以上結(jié)果充分說(shuō)明BMP2促進(jìn)SCAPs的成牙本質(zhì)／成骨向分化。第三部分MAPKs信號(hào)通路在BMP2誘導(dǎo)的SCAPs分化過(guò)程中的作用Western Blotting檢測(cè)BMP2處理SCAPs后MAPKs信號(hào)通路蛋白磷酸化水平的變化,結(jié)果顯示,BMP2促進(jìn)JNK,ERK和p38的磷酸化,表明BMP2可以激活JNK, ERK和p38信號(hào)通路。在BMP2誘導(dǎo)SCAPs分化的同時(shí),分別用20uM濃度的JNK抑制劑SP600125, ERK抑制劑U0126和p38MAPK抑制劑SB203580處理細(xì)胞,檢測(cè)ALP活性,通過(guò)real-time PCR和Western Blotting分別檢測(cè)DSPP、Runx2、BSP、 OCN mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示,抑制JNK, ERK和p38的活性后,人根尖乳頭細(xì)胞ALP活性降低；DSPP、Runx2、BSP和OCN mRNA及蛋白表達(dá)水平下降。以上結(jié)果表明阻斷JNK, ERK和p38MAPK信號(hào)通路可抑制BMP2誘導(dǎo)的SCAPs成牙本質(zhì)/成骨向分化,證明MAPKs信號(hào)通路在BMP2對(duì)SCAPs成牙／成骨分化過(guò)程中起正向調(diào)控作用。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781.34

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本文編號(hào)：1336013