本文關(guān)鍵詞：COX-2和SPARC在口腔鱗癌中表達(dá)的研究　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：口腔頜面-頭頸鱗狀細(xì)胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC/Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck,HNSCC)占成人惡性腫瘤的8%[1],口腔頜面-頭頸部腫瘤占全身惡性腫瘤的6.6%,而這其中鱗狀細(xì)胞癌又占到55.8%,口腔和下咽部為高發(fā)部位(20.9%),并呈逐年遞增的趨勢(shì)[2]。2015年中國(guó)約有新發(fā)浸潤(rùn)性癌病例數(shù)429.2萬,有281.4萬癌癥死亡病例,其中,唇、口腔、咽癌年新發(fā)病例4.81萬,年死亡病例2.21萬[3]。幾乎22%的全球新發(fā)癌癥病例出現(xiàn)在中國(guó),27%的癌癥死亡病例在中國(guó)[3]。OSCC大多臨近重要的組織器官,使手術(shù)的范圍受到嚴(yán)重的制約,而且由于頭頸頜面組織血管、淋巴管豐富以及舌的頻繁機(jī)械運(yùn)動(dòng),常發(fā)生早期頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,預(yù)后較差,死亡率高達(dá)50%[1],嚴(yán)重威脅著人們的生命健康。盡管腫瘤綜合治療的不斷發(fā)展,口腔鱗癌的治療取得了一定的進(jìn)步,但是近20年,五年生存率沒有明顯改善。由于口腔頜面-頭頸鱗狀細(xì)胞癌患者總體生存率很低,其發(fā)病相關(guān)的分子機(jī)制尚未明確,關(guān)于它的診斷與治療始終是惡性腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。盡管眾多與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的生物標(biāo)志在多項(xiàng)前瞻性研究和Meta分析中得到反復(fù)確證,但仍缺乏足夠的證據(jù)支持臨床應(yīng)用,因此,與OSCC/HNSCC發(fā)生發(fā)展相關(guān)的分子標(biāo)志的研究仍需不斷的探索。初步研究顯示,環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygenases,COX-2)與富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(Secreted Protein Acidic and Rich in Cysteine,SPARC)在OSCC/HNSCC組織中上調(diào)明顯,提示其與OSCC/HNSCC發(fā)生和發(fā)展可能有相關(guān)性,可能是OSCC/HNSCC復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和治療指導(dǎo)方面有價(jià)值的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)基因[4-6]。目的:檢測(cè)SPARC和COX-2基因在口腔鱗狀細(xì)胞癌、癌旁、淋巴結(jié)以及正常組織中的表達(dá),研究它們?cè)谀[瘤發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用機(jī)制以及相互關(guān)系;對(duì)SPARC和COX-2的甲基化情況進(jìn)行初步的探討,驗(yàn)證甲基化修飾水平是否能夠調(diào)控SPARC和COX-2在口腔鱗癌中的表達(dá)。方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)免疫印跡、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測(cè)SPARC和COX-2基因在口腔鱗狀細(xì)胞癌、癌旁、淋巴結(jié)以及正常組織中的表達(dá)。甲基化特異性PCR(MSP)檢測(cè)上述樣本中這兩個(gè)基因的甲基化狀態(tài)。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果:1.免疫組化顯示COX-2在癌組織高表達(dá),在正常組織中幾乎無表達(dá);其表達(dá)含量隨腫瘤分化程度降低而逐漸增高,與腫瘤的臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在明顯正相關(guān)性。COX-2m RNA的表達(dá)量在癌、癌旁、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織標(biāo)本中均高于正常粘膜組織,其中在癌組織的表達(dá)量最高(P0.01);除Ⅳ區(qū)與Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2m RNA的表達(dá)量相比不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義以外,其余各組間COX-2m RNA的表達(dá)均具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.免疫組化顯示SPARC在正常粘膜和癌旁組織呈現(xiàn)高表達(dá),在癌組織中呈低表達(dá)或不表達(dá)。其表達(dá)與腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。與正常粘膜組的SPARC m RNA表達(dá)量相比,除癌旁組織和Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義以外,其余各組表達(dá)均低于正常粘膜組織(P0.05)。3.Western blot發(fā)現(xiàn)COX-2和SPARC在正常組織、癌旁組織、口腔鱗癌和淋巴結(jié)組織中有不同程度的表達(dá),且蛋白表達(dá)水平與二者m RNA表達(dá)趨勢(shì)一致。4.COX-2m RNA和SPARCm RNA的相對(duì)表達(dá)量在口腔癌組織、癌旁組織、頸部Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)中表現(xiàn)為顯著的負(fù)相關(guān)性P=0.000。5.在頭頸鱗癌多個(gè)細(xì)胞系中COX-2的表達(dá)強(qiáng)烈,SPARC表達(dá)沉默或低下,二者表達(dá)趨勢(shì)與所測(cè)癌組織中表達(dá)結(jié)果一致。6.在OSCC組織樣本中,在癌組織,淋巴結(jié)組織中SPARC基因啟動(dòng)子均出現(xiàn)了高甲基化,而COX-2基因啟動(dòng)子則出現(xiàn)非甲基化狀態(tài)。在正常組織中,COX-2基因啟動(dòng)子則出現(xiàn)高甲基化,SPARC基因啟動(dòng)子則表現(xiàn)出了非甲基化狀態(tài)。在癌旁組織中,COX-2和SPARC均表現(xiàn)為非甲基化。7.在頭頸腫瘤Scc-9、Scc-25、Tca8113、HN13多個(gè)細(xì)胞系均發(fā)現(xiàn)SPARC基因啟動(dòng)子區(qū)出現(xiàn)甲基化修飾,而COX-2基因啟動(dòng)子區(qū)無甲基化條帶。在正常上皮細(xì)胞系h OMK則發(fā)現(xiàn)COX-2甲基化和SPARC非甲基化。8.在舌癌細(xì)胞株中COX-2基因啟動(dòng)子23個(gè)Cp G島僅有3~6個(gè)位點(diǎn)出現(xiàn)甲基化,甲基化率不足10%;SPARC的17個(gè)Cp G島全部出現(xiàn)甲基化修飾。去甲基化處理后,SPARCm RNA的表達(dá)出現(xiàn)明顯上調(diào)(P=0.000);COX-2m RNA的表達(dá)無明顯變化,組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.064)。9.COX-2和SPARC蛋白表達(dá)狀態(tài)與啟動(dòng)子區(qū)甲基化均存在著負(fù)相關(guān)關(guān)系,P=0.000。結(jié)論:1、COX-2在口腔鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá),與臨床TNM分期的密切相關(guān),可能是口腔鱗狀細(xì)胞癌的促進(jìn)因子。2、SPARC在口腔鱗狀細(xì)胞癌中低表達(dá),其表達(dá)缺失與臨床TNM分期關(guān)系密切,可能是口腔鱗狀細(xì)胞癌的抑制因子,可以作為口腔鱗狀細(xì)胞癌診斷的分子生物學(xué)標(biāo)志物。3、癌組織中SPARC啟動(dòng)子區(qū)甲基化和COX-2啟動(dòng)子區(qū)去甲基化是引起二者蛋白表達(dá)及m RNA表達(dá)異常的重要原因。4、COX-2和SPARC的表達(dá)沿縱形淋巴鏈呈梯度變化,且它們的表達(dá)存在著負(fù)相關(guān)關(guān)系,二者在OSCC的發(fā)生發(fā)展過程中可能存在著某種拮抗作用。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.85
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本文編號(hào)：1334132