發(fā)布時間：2017-12-25 19:25

  本文關(guān)鍵詞：COX-2和SPARC在口腔鱗癌中表達的研究　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：口腔頜面-頭頸鱗狀細胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC/Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck,HNSCC)占成人惡性腫瘤的8%[1],口腔頜面-頭頸部腫瘤占全身惡性腫瘤的6.6%,而這其中鱗狀細胞癌又占到55.8%,口腔和下咽部為高發(fā)部位(20.9%),并呈逐年遞增的趨勢[2]。2015年中國約有新發(fā)浸潤性癌病例數(shù)429.2萬,有281.4萬癌癥死亡病例,其中,唇、口腔、咽癌年新發(fā)病例4.81萬,年死亡病例2.21萬[3]。幾乎22%的全球新發(fā)癌癥病例出現(xiàn)在中國,27%的癌癥死亡病例在中國[3]。OSCC大多臨近重要的組織器官,使手術(shù)的范圍受到嚴重的制約,而且由于頭頸頜面組織血管、淋巴管豐富以及舌的頻繁機械運動,常發(fā)生早期頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,預(yù)后較差,死亡率高達50%[1],嚴重威脅著人們的生命健康。盡管腫瘤綜合治療的不斷發(fā)展,口腔鱗癌的治療取得了一定的進步,但是近20年,五年生存率沒有明顯改善。由于口腔頜面-頭頸鱗狀細胞癌患者總體生存率很低,其發(fā)病相關(guān)的分子機制尚未明確,關(guān)于它的診斷與治療始終是惡性腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點。盡管眾多與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的生物標志在多項前瞻性研究和Meta分析中得到反復(fù)確證,但仍缺乏足夠的證據(jù)支持臨床應(yīng)用,因此,與OSCC/HNSCC發(fā)生發(fā)展相關(guān)的分子標志的研究仍需不斷的探索。初步研究顯示,環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygenases,COX-2)與富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(Secreted Protein Acidic and Rich in Cysteine,SPARC)在OSCC/HNSCC組織中上調(diào)明顯,提示其與OSCC/HNSCC發(fā)生和發(fā)展可能有相關(guān)性,可能是OSCC/HNSCC復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和治療指導(dǎo)方面有價值的關(guān)鍵節(jié)點基因[4-6]。目的:檢測SPARC和COX-2基因在口腔鱗狀細胞癌、癌旁、淋巴結(jié)以及正常組織中的表達,研究它們在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用機制以及相互關(guān)系;對SPARC和COX-2的甲基化情況進行初步的探討,驗證甲基化修飾水平是否能夠調(diào)控SPARC和COX-2在口腔鱗癌中的表達。方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)免疫印跡、實時定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測SPARC和COX-2基因在口腔鱗狀細胞癌、癌旁、淋巴結(jié)以及正常組織中的表達。甲基化特異性PCR(MSP)檢測上述樣本中這兩個基因的甲基化狀態(tài)。統(tǒng)計學(xué)方法分析上述實驗結(jié)果。結(jié)果:1.免疫組化顯示COX-2在癌組織高表達,在正常組織中幾乎無表達;其表達含量隨腫瘤分化程度降低而逐漸增高,與腫瘤的臨床分期、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在明顯正相關(guān)性。COX-2m RNA的表達量在癌、癌旁、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織標本中均高于正常粘膜組織,其中在癌組織的表達量最高(P0.01);除Ⅳ區(qū)與Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2m RNA的表達量相比不具有統(tǒng)計學(xué)意義以外,其余各組間COX-2m RNA的表達均具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。2.免疫組化顯示SPARC在正常粘膜和癌旁組織呈現(xiàn)高表達,在癌組織中呈低表達或不表達。其表達與腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負相關(guān)。與正常粘膜組的SPARC m RNA表達量相比,除癌旁組織和Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)不具有統(tǒng)計學(xué)意義以外,其余各組表達均低于正常粘膜組織(P0.05)。3.Western blot發(fā)現(xiàn)COX-2和SPARC在正常組織、癌旁組織、口腔鱗癌和淋巴結(jié)組織中有不同程度的表達,且蛋白表達水平與二者m RNA表達趨勢一致。4.COX-2m RNA和SPARCm RNA的相對表達量在口腔癌組織、癌旁組織、頸部Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)中表現(xiàn)為顯著的負相關(guān)性P=0.000。5.在頭頸鱗癌多個細胞系中COX-2的表達強烈,SPARC表達沉默或低下,二者表達趨勢與所測癌組織中表達結(jié)果一致。6.在OSCC組織樣本中,在癌組織,淋巴結(jié)組織中SPARC基因啟動子均出現(xiàn)了高甲基化,而COX-2基因啟動子則出現(xiàn)非甲基化狀態(tài)。在正常組織中,COX-2基因啟動子則出現(xiàn)高甲基化,SPARC基因啟動子則表現(xiàn)出了非甲基化狀態(tài)。在癌旁組織中,COX-2和SPARC均表現(xiàn)為非甲基化。7.在頭頸腫瘤Scc-9、Scc-25、Tca8113、HN13多個細胞系均發(fā)現(xiàn)SPARC基因啟動子區(qū)出現(xiàn)甲基化修飾,而COX-2基因啟動子區(qū)無甲基化條帶。在正常上皮細胞系h OMK則發(fā)現(xiàn)COX-2甲基化和SPARC非甲基化。8.在舌癌細胞株中COX-2基因啟動子23個Cp G島僅有3~6個位點出現(xiàn)甲基化,甲基化率不足10%;SPARC的17個Cp G島全部出現(xiàn)甲基化修飾。去甲基化處理后,SPARCm RNA的表達出現(xiàn)明顯上調(diào)(P=0.000);COX-2m RNA的表達無明顯變化,組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.064)。9.COX-2和SPARC蛋白表達狀態(tài)與啟動子區(qū)甲基化均存在著負相關(guān)關(guān)系,P=0.000。結(jié)論:1、COX-2在口腔鱗狀細胞癌中高表達,與臨床TNM分期的密切相關(guān),可能是口腔鱗狀細胞癌的促進因子。2、SPARC在口腔鱗狀細胞癌中低表達,其表達缺失與臨床TNM分期關(guān)系密切,可能是口腔鱗狀細胞癌的抑制因子,可以作為口腔鱗狀細胞癌診斷的分子生物學(xué)標志物。3、癌組織中SPARC啟動子區(qū)甲基化和COX-2啟動子區(qū)去甲基化是引起二者蛋白表達及m RNA表達異常的重要原因。4、COX-2和SPARC的表達沿縱形淋巴鏈呈梯度變化,且它們的表達存在著負相關(guān)關(guān)系,二者在OSCC的發(fā)生發(fā)展過程中可能存在著某種拮抗作用。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.85
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本文編號：1334132