本文關(guān)鍵詞：bFGF和BMP-2預(yù)處理對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞干性維持與成骨分化潛能的差異影響　出處：《山東大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景和目的牙周再生一直是牙周領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone morrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)是骨髓來源的多能干細(xì)胞,在組織工程領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblast growth factor, bFGF)和骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(bone morphogenetic protein 2, BMP-2)在骨再生及牙周組織再生領(lǐng)域的應(yīng)用已得到廣泛研究。然而BMMSCs會(huì)隨著增殖傳代逐漸失去干細(xì)胞特性。因此如何獲得具有良好增殖能力和成骨分化潛能的干細(xì)胞是目前牙周組織工程領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。本研究旨在探究通過bFGF和BMP-2分別預(yù)處理細(xì)胞的方法對(duì)BMMSCs增殖、成骨分化、干性維持方面的差異影響并探討其機(jī)制。方法1、分離培養(yǎng)Wista r大鼠的BMMSCs,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMMSCs表面CD34, CD44, CD45, CD90的表達(dá)情況。將培養(yǎng)至P3代的BMMSCs分為三組,分別用普通培養(yǎng)基、含20ng/ml bFGF的培養(yǎng)基和含100ng/ml BMP-2培養(yǎng)基培養(yǎng)3天,收集細(xì)胞(以下簡(jiǎn)稱為對(duì)照組、bFGF預(yù)處理組及BMP-2預(yù)處理組)。然后在無bFGF或BMP-2作用的條件下繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。2、三組BMMSCs預(yù)處理后培養(yǎng)1,2,3,5天,采用CCK-8法檢測(cè)三組BMMSCs的增殖活性。并采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布的變化。3、三組BMMSCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)3,7,14天后采用ALP活性試劑盒檢測(cè)細(xì)胞的ALP活性。成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)28天后,進(jìn)行茜素紅染色觀察鈣結(jié)節(jié),同時(shí)進(jìn)行定量檢測(cè)。4、采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)三組BMMSCs表面CD90的表達(dá)情況。結(jié)果1、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示BMMSCs表面CD90、CD44高表達(dá),造血系干細(xì)胞表面標(biāo)志抗原CD34、CD45低表達(dá)。2、CCK8細(xì)胞增殖檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：bFGF和BMP-2預(yù)處理組細(xì)胞增殖活性顯著高于對(duì)照組(p0.05),并且bFGF預(yù)處理組BMMSCs的增殖活性較BMP-2預(yù)處理組增強(qiáng)(p0.05)。細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示： 經(jīng)bFGF預(yù)處理后處于分裂期(S期)的細(xì)胞數(shù)增多,而處于靜止期(G0/G1期)的細(xì)胞數(shù)減少(p0.05),而BMP-2預(yù)處理后BMMSCs的細(xì)胞周期分布(G0/G1期, S期,G2/M期)沒有顯著改變。3、ALP活性檢測(cè)結(jié)果顯示：第3天時(shí),BMP-2預(yù)處理組BMMSCs ALP活性高于對(duì)照組和bFGF預(yù)處理組(p0.05),第7天時(shí),bFGF預(yù)處理組與BMP-2預(yù)處理組BMMSCs ALP活性達(dá)到最高峰且兩組ALP活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),并顯著高于對(duì)照組(p0.05),而第14天時(shí),bFGF預(yù)處理組細(xì)胞ALP活性顯著高于對(duì)照組和BMP-2預(yù)處理組(p0.05)。 成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)28天后,鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色及定量檢測(cè)結(jié)果顯示：三組細(xì)胞的鈣結(jié)節(jié)形成情況沒有明顯差異(p0.05)。4、bFGF預(yù)處理組CD90陽性細(xì)胞百分比高于對(duì)照組(p0.05), BMP-2預(yù)處理組CD90陽性細(xì)胞百分比較對(duì)照組有下降趨勢(shì)(p0.05)。結(jié)論bFGF和BMP-2預(yù)處理均能夠增強(qiáng)BMMSCs的增殖活性,bFGF對(duì)BMMSCs的促增殖作用可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期來實(shí)現(xiàn)；與BMP-2相比,bFGF更能有效維持BMMSCs的干細(xì)胞特性,且能保留其成骨分化潛能。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781.4

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本文編號(hào)：1316916