本文關(guān)鍵詞：不同fimA型牙齦卟啉單胞菌脂多糖對(duì)人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞功能的影響

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【摘要】：目的:分析比較Ⅰ、Ⅳfim A型牙齦卟啉單胞菌脂多糖(P.gingivalis-LPS)對(duì)人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HUASMCs)的增殖、遷移能力和表型轉(zhuǎn)化的影響,探討不同fim A型P.gingivalis-LPS感染在動(dòng)脈粥樣硬化(As)發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的可能作用。方法:1.厭氧條件下培養(yǎng)Ⅰfim A型P.gingivalis(ATCC33277)和IVfim A型P.gingivalis(W83)。2.采用熱酚-水法提取P.gingivalis-LPS,并通過(guò)鱟試驗(yàn)、SDS-PAGE對(duì)所提取的脂多糖進(jìn)行鑒定。3.體外培養(yǎng)的HUASMCs 5~6代,加入96孔培養(yǎng)板,采用CCK-8檢測(cè)不同終濃度的P.gingivalis-LPS(0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)在2h、8h、24h、48h對(duì)平滑肌細(xì)胞增殖的影響,酶標(biāo)儀450nm處測(cè)定各組OD值。4.后續(xù)實(shí)驗(yàn)采用終濃度為10μg/ml的P.gingivalis-LPS,與HUASMCs共培養(yǎng)2h、8h、24h、48h后,采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HUASMCs的遷移情況,透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)收縮型標(biāo)志蛋白平滑肌α-肌動(dòng)蛋白(α-SM-actin)、平滑肌肌球蛋白重鏈(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)和合成型標(biāo)志細(xì)胞視黃醇結(jié)合蛋白-1(cellular retinol bindingprotein-1,CRBP-1)的表達(dá)變化情況。結(jié)果:1.I、IV fim A型P.gingivalis-LPS對(duì)HUASMCs的增殖作用具有時(shí)間、濃度依賴性,隨著刺激時(shí)間的延長(zhǎng)、刺激濃度的增加,HUASMCs的增殖越強(qiáng)(P0.05);在同一刺激濃度和作用時(shí)間點(diǎn),IV fim A型P.gingivalis-LPS刺激HUASMCs的增殖作用強(qiáng)于I fim A型P.gingivalis-LPS(P0.05)。2.劃痕實(shí)驗(yàn)中,2h,8h,24h,48h時(shí),I、IV fim A型P.gingivalis-LPS均能促進(jìn)HUASMCs遷移,隨著刺激時(shí)間的延長(zhǎng),HUASMCs遷移距離增加,至觀察末期(48h)表達(dá)量達(dá)到峰值,與陰性對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在24h,48h時(shí),IV fim A型P.gingivalis-LPS組HUASMCs遷移距離高于I fim A型P.gingivalis-LPS組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果與劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果相近,但僅在48h時(shí),IV fim A型P.gingivalis-LPS組HUASMCs遷移細(xì)胞數(shù)目高于I fim A型P.gingivalis-LPS組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.通過(guò)電鏡觀察,在2h、8h、24h、48h時(shí),I、IV fim A型P.gingivalis-LPS刺激后HUASMCs由收縮型逐漸轉(zhuǎn)換為合成型表型,細(xì)胞體積較大,胞質(zhì)內(nèi)見(jiàn)大量線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),高爾基體等細(xì)胞器增多,糖原等物質(zhì)合成增多,肌絲成分較少,且吞噬體增多。在2h、8h、24h、48h時(shí),IV fim A型P.gingivalis-LPS刺激的HUASMCs均可見(jiàn)脂滴出現(xiàn)和增多。I fim A型P.gingivalis-LPS刺激的HUASMCs未見(jiàn)脂滴的出現(xiàn),至觀察末期48h,可見(jiàn)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)不同程度水腫。4.I、IV fim A型P.gingivalis-LPS刺激后,上調(diào)HUASMCs的合成型標(biāo)志分子CRBP-1的表達(dá),下調(diào)HUASMCs收縮型標(biāo)志分子ɑ-SMA、SM-MHC的表達(dá),IV fim A型P.gingivalis-LPS上調(diào)CRBP-1表達(dá)的作用強(qiáng)于I fim A型P.gingivalis-LPS(P0.05);在48h IVfim A型P.gingivalis-LPS下調(diào)ɑ-SMA表達(dá)作用強(qiáng)于I fim A型P.gingivalis-LPS(P0.05);在24h IVfim A型P.gingivalis-LPS下調(diào)SM-MHC表達(dá)的作用強(qiáng)于Ifim A型P.gingivalis-LPS(P0.05)。結(jié)論:I、IV fim A型P.gingivalis-LPS的刺激可導(dǎo)致平滑肌細(xì)胞的表型由收縮型轉(zhuǎn)換為更加活躍的合成型、并促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移,從而可能參與和影響As的發(fā)生、發(fā)展;不同fim A型P.gingivalis-LPS對(duì)平滑肌細(xì)胞的促增殖、遷移和表型轉(zhuǎn)換作用存在一定的差異。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R780.2

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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本文編號(hào)：1307761